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P450cam突变体蛋白表达、纯化与结晶的改进及其四突变体(F87L/Y96F/L244A/V247A)晶体结构
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作者 刘斌斌 孙蕾 +4 位作者 徐峰 娄智勇 庞海 L.L.WONG 刘一苇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期611-615,共5页
在P4 5 0cam突变体蛋白纯化过程中使用 2 80nm/ 392nm双波长比值检测蛋白质纯度 ,采用 β 巯基乙醇对蛋白质进行还原性保护 ,有效地缩短了纯化进程 ,纯化效率相应提高 .以PEG 80 0 0为沉淀剂经悬滴汽相扩散法筛选得到适合衍射的P4 5 0ca... 在P4 5 0cam突变体蛋白纯化过程中使用 2 80nm/ 392nm双波长比值检测蛋白质纯度 ,采用 β 巯基乙醇对蛋白质进行还原性保护 ,有效地缩短了纯化进程 ,纯化效率相应提高 .以PEG 80 0 0为沉淀剂经悬滴汽相扩散法筛选得到适合衍射的P4 5 0cam四突变体 (F87L/Y96F/L2 4 4A/V2 4 7A)晶体 ,在Mar Research面探测器系统上收集了0 2 2nm分辨率的X射线衍射数据 .采用同晶差值傅立叶法解析结构 ,最后的晶体学R因子和Rfree分别为 0 197和 0 2 4 7,键长偏差为 0 0 0 177nm ,键角偏差为 1 96°.结构测定显示P4 5 0cam四突变体 (F87L/Y96F/L2 4 4A/V2 4 7A)和P4 5 0cam野生型的整体构象无重大变化 ,突变后活性口袋变大而疏水性增加 ,这与突变设计预期目标一致 . 展开更多
关键词 P450cam 四突变体 纯化 双波长检测 晶体结构
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利用CRISPR/Cas9技术构建拟南芥IQM家族基因四突变体 被引量:1
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作者 魏丽茵 吕天晓 +2 位作者 范甜 周玉萍 田长恩 《科技视界》 2020年第12期166-168,共3页
之前,本研究组分别对IQM家族基因的功能进行了研究。不过,由于缺乏相应突变体而未能对该家族多基因同时突变所产生的生长发育改变进行研究。因此,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IQM家族多基因突变体。分别在IQM家族4个成员的基因组上... 之前,本研究组分别对IQM家族基因的功能进行了研究。不过,由于缺乏相应突变体而未能对该家族多基因同时突变所产生的生长发育改变进行研究。因此,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IQM家族多基因突变体。分别在IQM家族4个成员的基因组上设计靶点接头,通过同源重组构建成相应小载体sgRNA表达盒:LazAtU3d-AtU3b-AtU3d-AtU3b,并整合成pYLCRISPR/Cas9Pubi-N表达载体后转入拟南芥。经抗生素抗性筛选,共获得70株T0代植株。最后经过编辑靶点测序,得到2个IQM1~IQM4的四突变体株系。 展开更多
关键词 拟南芥 IQM 四突变体 CRISPR/Cas9
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Construction and Analysis of Asexual Mutant Population of Tetraploid Potato Longshu 7 Induced by EMS 被引量:1
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作者 柳永强 胡新元 +2 位作者 李掌 蒙孔莉 高彦萍 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2016年第8期1780-1785,共6页
[Objective] This study was conducted to detect the variation induction ability of ethyl methanesulfonate (EMS), to construct a mutant population. [Method] 0.6%, 1.2% and 2.4% EMS solutions were used for inducing 2 4... [Objective] This study was conducted to detect the variation induction ability of ethyl methanesulfonate (EMS), to construct a mutant population. [Method] 0.6%, 1.2% and 2.4% EMS solutions were used for inducing 2 400 stem segments of test-tube plantlets of tetraploid potato Longshu 7, and an asexual mutant population including leaf, plant type, stem, stolon, glandular hair traits was constructed. [Result] Twenty two mutation types, i.e. etiolated plantlet, albino plantlet, leaf-color gradient, etiolated vein, wrapped bud, lobed leaf, crinkled leaf, deformed compound leaf, cluster, branch, top enlargement, top bifurcation, succulent, stolon distortion, stolon shift, early tuberization, hair stolon, stem enlargement, vine stem, foliage stem, glandular hair and whorled leaf types were observed in total. There were 52 mutant single plants in total, with a mutation rate of 21.67‰. [Conclusion] The glandular hair, clustered short-stem, branched stem and early tuberization types of mutants have higher application value, and are anticipated to be used in potato functional genome research, gene improvement and germplasm innovation. 展开更多
关键词 Tetraploid potato EMS Asexual mutant population Longshu 7
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大豆花芽差异表达基因片段GmFBDG01克隆和RNAi表达载体的构建 被引量:3
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作者 潘丽丹 姚丹 +3 位作者 王丕武 刘婷婷 郑成忠 赵翠兰 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期543-548,共6页
大豆的产量构成因素中每荚粒数是提高大豆产量的育种关键因素,因此研究与荚粒数相关的基因至关重要,花芽作为植物生殖生长的第一步,对大豆植株的生长发育有着重要的影响,可能对四粒荚的产生有影响。以大豆吉农18四粒荚突变体的7叶期花... 大豆的产量构成因素中每荚粒数是提高大豆产量的育种关键因素,因此研究与荚粒数相关的基因至关重要,花芽作为植物生殖生长的第一步,对大豆植株的生长发育有着重要的影响,可能对四粒荚的产生有影响。以大豆吉农18四粒荚突变体的7叶期花芽的转录组测序结果进行分析,筛选出差异表达的片段Gm FBDG01;利用RT-PCR克隆差异表达基因的CDS核心序列,并借助中间克隆载体p Bluescript SK plus,成功构建了RNA干扰(RNAi)表达载体p CPB-Gm FBDG01-RNAi,该表达载体的构建为大豆四粒荚相关功能基因的功能验证奠定基础。 展开更多
关键词 大豆 粒荚突变体 花芽 差异表达 RNA干扰 表达载体构建
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