TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组:NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<0.05);SW480细胞凋亡水平明显增加(P<0.05),髓细胞白血病序列(Mcl)-1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl及Bcl-2的蛋白表达水平明显下降,Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达明显升高(P<0.05);SW480细胞的侵袭和迁移能力被抑制。结论 TPARM可能通过使结直肠癌细胞增殖增加和凋亡减少及促进结肠癌细胞的侵袭和迁移能力,从而在结直肠癌发生发展中发挥作用。

转录因子HIF-1α通过正调控TPARM基因表达影响人结肠癌细胞株SW480的增殖、凋亡

目的探讨转录因子HIF-1α是否通过调控TPARM的表达从而影响结肠癌细胞的增殖及凋亡。方法通过生物信息学分析转录因子HIF-1α与TPARM的启动子序列是否结合。敲低和过表达HIF-1α后检测TPARM的mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证HIF-1α是否与TPARM的启动子序列有结合。CCK-8和免疫印迹实验检测HIF-1α和TPARM对结肠癌细胞株SW480增殖和调亡的影响。结果生物信息学网站提示转录因子HIF-1α与TPARM启动子的部分序列有结合位点。敲低和过表达HIF-1α能调控TPARM的mRNA和蛋白表达水平, 两者关系为正相关。双荧光素酶报告实验验证了转录因子HIF-1α能促进TPARM启动子活性。CCK-8和免疫印迹实验验证了HIF-1α通过上调TPARM来发挥促进结肠癌细胞株SW480增殖以及抗凋亡的作用。结论转录因子HIF-1α通过促进TPARM的mRNA和蛋白水平表达, 影响结肠癌细胞SW480的增殖、凋亡水平, 为确定结肠癌治疗的有效分子靶点提供了实验依据。