四跨膜蛋白CO-029过表达与胆管癌上皮-间质转变及转移的关系

目的探讨四跨膜蛋白CO-029表达与胆管癌上皮-间质转变(EMT)及肿瘤转移的关系和作用机理。方法利用已构建的vshRNA-CO-029(LV/GFP/CO-029)慢病毒质粒转染并筛选沉默CO-029基因表达的稳转胆管癌细胞株HCCC-9810-vshRNA-CO-029作为沉默组,以模拟质粒转染的HCCC-9810细胞作为模拟组,以未转染细胞作为对照组。分别以细胞划痕、Transwell和裸鼠体内种植实验检测三组细胞的迁移和侵袭转移能力变化。应用免疫共沉淀和肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激实验检测CO-029对EMT相关基因表达的影响。结果沉默组细胞划痕愈合率低于模拟组细胞[(27.11±4.58)%比(92.84±6.24)%],沉默组细胞穿过Matrigel胶的数量为(57.15±6.10)个,低于模拟组(108.20±9.21)个及对照组(112.00±10.45)个,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。裸鼠肝脏移植沉默组细胞的肝脏瘤体积为(2.17±0.54)cm3,而移植模拟组细胞的肝脏瘤体积为(0.74±0.15)cm3,差异有统计学意义(P<0.05)。模拟组肺转移的发生率和肺转移瘤灶数目分别为100%(6/6)、(214.17±35.64)个,沉默组分别为16.7%(1/6)、(41.56±14.15)个,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。免疫共沉淀显示CO-029可与TNF-αR1形成复合物,TNF-α可诱导模拟组细胞的E-钙黏蛋白表达下调,波形蛋白和N-钙黏蛋白表达上调,而沉默组细胞中则无明显变化。结论CO-029表达与胆管癌侵袭转移能力正相关,并可能与TNF-α协同诱导胆管癌细胞发生EMT,是胆管癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。