回阳生肌汤对糖尿病小鼠皮肤创面愈合及单核巨噬细胞表型转化的影响

目的:探讨回阳生肌汤对糖尿病小鼠创面愈合的作用及可能的机制。方法:10只db/m小鼠为空白对照组,30只db/db糖尿病小鼠随机分为模型组、回阳生肌汤组和重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组;各组小鼠在造模前称重、检测血糖,背部全层皮肤切除直径为6 mm的创面,外用药物贴敷,隔天换药,创面拍照并计算创面面积。造模7 d后取小鼠背部皮肤组织,采用苏木素-伊红染色观察组织病理学改变;多重免疫荧光染色检测创面组织促炎型(M1型)和抗炎型(M2型)巨噬细胞的数量;蛋白芯片技术检测M1型和M2型巨噬细胞相关蛋白的表达水平;流式细胞术检测小鼠骨髓和血液中总单核细胞、抗炎型单核细胞(Ly6C^(low/−))和促炎型单核细胞(Ly6C^(hi/+))占总活细胞的比例。结果:db/db小鼠体重和血糖显著高于db/m小鼠(P<0.01)。与模型组相比,回阳生肌汤干预可显著提高db/db小鼠创面愈合率(P<0.01),促进肉芽组织新生,丰富成纤维细胞和血管。多重免疫荧光染色显示,与模型组相比,回阳生肌汤组M1型巨噬细胞数量减少,M2型巨噬细胞增多(P<0.01)。蛋白因子芯片结果显示,回阳生肌汤能抑制白细胞介素1β(IL-1β)、IL-1α、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNF-RII)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术结果显示,与模型组相比,回阳生肌汤组骨髓总单核细胞和Ly6C^(low/−)单核细胞比例升高,Ly6C^(hi/+)单核细胞比例下降(P<0.05或P<0.01),血液中总单核细胞和Ly6C^(hi/+)单核细胞比例下降,Ly6C^(low/−)单核细胞比例升高(P<0.01)。结论:db/db糖尿病小鼠血糖升高,创面愈合迟缓;回阳生肌汤可提高db/db糖尿病小鼠创面愈合率,减轻创面炎症反应,其机制可能是调节骨髓和血液中Ly6C^(low/−)/Ly6C^(hi/+)单核细胞平衡,抑制Ly6C^(hi/+)促炎型单核细胞向创面局部募集,促进Ly6C^(low/−)抗炎型单核细胞募集,从而减少创面中血液来源的M1型巨噬细胞,增加M2型巨噬细胞。

回阳生肌汤对RAW264.7巨噬细胞表型极化的影响

目的:探讨回阳生肌汤对体外RAW264.7巨噬细胞极化的作用及可能机制。方法:采用体外培养RAW264.7巨噬细胞,使用脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)将RAW264.7巨噬细胞诱导为M1型(经典激活型巨噬细胞),白介素(IL)-4使其诱导为M2型(替代激活型巨噬细胞)。采用CCK-8法检测回阳生肌汤提取物对巨噬细胞增殖作用。回阳生肌汤提取物预先作用巨噬细胞24 h,LPS+IFN-γ刺激12 h后,通过比色法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平;luminex高通量检测技术检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10、血管内皮生长因子(VEGF)的含量;流式细胞术检测RAW264.7巨噬细胞表面白细胞分化抗原86(CD86)、甘露糖受体(CD206)阳性率;Western Blot检测一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、磷酸化信号传导和转录激活蛋白6(p-STAT6)和STAT6的表达。结果:回阳生肌汤提取物在520、260、130 mg/L时对巨噬细胞有增殖作用;与模型组比较,回阳生肌汤提取物能显著抑制巨噬细胞NO释放(P<0.01,P<0.05),抑制IL-1β、IL-6、IL-12分泌,同时促进IL-10分泌(P<0.01);提高RAW264.7巨噬细胞CD206阳性率(P<0.01);抑制iNOS蛋白表达,促进Arg-1、p-STAT6蛋白表达(P<0.01)。结论:回阳生肌汤提取物体外可抑制LPS+IFN-γ诱导的RAW264.7巨噬细胞向M1型极化,促进向M2型极化,可能通过激活STAT6信号通路发挥作用。

回阳生肌汤配合康复新液对肛瘘伴2型糖尿病患者术后创面愈合的影响

目的:观察回阳生肌汤配合康复新液对肛瘘伴2型糖尿病患者术后创面愈合的影响。方法:选择肛瘘伴2型糖尿病患者术后创面难以愈合的患者42例,按照随机数字表法将其分为治疗组、对照组和空白组,每组各14例。空白组予以常规换药及0. 9%氯化钠注射液纱条外敷治疗,对照组在空白组基础上加服回阳生肌汤治疗,治疗组口服回阳生肌汤并以康复新液外敷治疗。观察3组患者术后第7、14、35天创面疼痛视觉模拟评分量表(VAS)评分、创面分泌物情况、创面愈合率及临床疗效。结果:总显效率治疗组为100. 00%(14/14),对照组为85. 71%(12/14),空白组为71. 43%(10/14),治疗组优于对照组、空白组,差异有统计学意义(P <0. 05);治疗组在术后第7、14、35天创面疼痛评分、渗液评分、愈合率方面均优于对照组及空白组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:回阳生肌汤配合康复新液可促进肛瘘伴2型糖尿病患者术后创面愈合、减少创面分泌物,值得临床推广。