回阳生肌膏治疗慢性难愈性皮肤溃疡疗效观察及作用机制探讨

目的考察回阳生肌膏治疗脾肾阳虚型慢性难愈性溃疡的临床疗效,并在细胞、分子层次上探讨其作用机制。方法将102例慢性溃疡患者随机分为治疗组(外用回阳生肌膏纱条)、对照组(外用洗必泰油纱条),2组均服用温补脾肾的玉肾胶囊,6周后总结疗效。取治疗前后慢性皮肤溃疡患者创面边缘组织,用图像分析软件分析Ⅰ型/Ⅲ型胶原,观察成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(Fn)在伤口愈合过程中的表达情况。结果治疗组愈显率为50.00%,对照组愈显率为33.33%,差异有统计学意义。回阳生肌膏可以改善慢性溃疡创面的局部炎症状态,促进新生血管生成;可促进胶原合成,尤其是Ⅰ型胶原形成;可使慢性皮肤溃疡边缘组织FGF-2表达和VEGF的表达有上升的趋势。结论回阳生肌膏对慢性难愈性溃疡具有促进创面愈合的作用,促进新生血管生成和胶原合成是作用机制之一。

回阳生肌膏及其拆方对糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠血清白细胞介素-1α和血栓素B_2含量的影响

目的观察回阳生肌膏及其拆方对糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠白细胞介素-1α(IL-1α)和血栓素B2(TXB2)含量的影响,探讨其促进糖尿病慢性皮肤溃疡愈合的作用机制。方法 160只大鼠随机抽取6只作为空白组,不做任何处理,其余大鼠制备糖尿病模型,2周后随机分为1、3、5、7、14 d处理组,各处理组再分为正常组、模型组、回阳生肌膏组(全方组)、温阳益气拆方组(益气组)、活血生肌拆方组(活血组)。正常组及模型组给予凡士林纱条,全方组、益气组及活血组给予相应药物纱条。正常组采用皮肤缺损法,其他组采用复合因素制备慢性皮肤溃疡模型。在相应给药时间点处死各组大鼠,酶联免疫法检测各时点大鼠血清中IL-1α和TXB2的含量。结果 IL-1α含量:给药3 d益气组显著高于空白组、模型组、全方组和活血组(P<0.05);给药5 d,全方组显著高于空白组和模型组(P<0.05);给药7 d,各给药组显著高于空白组和模型组(P<0.05),全方组高于益气组、活血组(P<0.05);给药14 d,模型组和活血组低于空白组(P<0.05)。TXB2含量:给药3 d,正常组和全方组高于空白组(P<0.05);给药5 d,全方组高于空白组和正常组(P<0.05);给药7 d,益气组高于空白组、模型组、全方组和活血组(P<0.05);给药14 d,活血组高于空白组、模型组、全方组和益气组(P<0.05),空白组和正常组低于其他各给药组(P<0.05)。结论回阳生肌膏及其拆方均能促进炎症反应,刺激炎症因子分泌,益气温阳药对创面的促炎作用早期更为明显。

回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡形态变化的初步研究

目的：探讨回阳生肌膏治疗慢性皮肤溃疡腐肉、肉芽、脓液及组织HE染色形态变化规律。方法收集首都医科大学附属北京中医医院2012年11月-2013年11月40例局部辨证为寒湿凝滞证慢性疮面患者，随机分为两组，治疗组应用回阳生肌膏纱条，对照组按照常规方法进行。观察两组治疗前后疮面形态评分和治疗前后皮下组织HE染色变化情况。结果对照组总的评分治疗前为（29.1±5.7）分，治疗组为（28.4±6.1）分，差异无统计学意义（P〉0.05）；对照组治疗后为（25.7±5.4）分，与治疗前比较，差异有统计学意义（P〈0.05），治疗组为（22.9±6.8）分，与治疗前比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。对照组与治疗组治疗后组间比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。皮下组织HE染色观察，治疗前炎症细胞较多，内皮细胞、成纤维细胞较少且形态瘦小，分布散乱，胶原纤维淡染，治疗后炎症细胞减少，内皮细胞、成纤维细胞数量多形态饱满，分布规律，胶原纤维深染，治疗组较对照组有更好的愈合趋势。结论回阳生肌膏主要功效“温阳益气”，使慢性皮肤溃疡疮面由“阴”转“阳”，由“静”转“动”，从而加速疮面愈合。

回阳生肌膏对人来源微血管内皮细胞的干预作用

目的研究回阳生肌膏对人来源微血管内皮细胞体外凋亡和迁移的影响及其可能存在的机制。方法细胞实验分为空白组、模型组、实验组和阳性对照组,空白组与模型组不予干预,实验组予回阳生肌膏,阳性对照组予龙珠软膏,均作用48小时。采用MTT法筛选药物无毒浓度;流式细胞术观察细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中基质金属蛋白酶1(matrix metallopeptidase 1,MMP1)、基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase 1,TIMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量;细胞迁移实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹法检测血管内皮细胞生长因子受体2(VEGF receptor 2,VEGFR2)蛋白的表达。结果确定了实验组予50μg/mL回阳生肌膏,对照组予25μg/mL龙珠软膏为后续试验浓度,作用48小时后,与模型组相比,回阳生肌膏可有效抑制内皮细胞的凋亡(P<0.05),而龙珠软膏能显著抑制内皮细胞凋亡(P<0.01);与模型组相比,回阳生肌膏、龙珠软膏在体外均能显著下调糖尿病足内皮细胞MMP9、TIMP1的分泌(P<0.01),显著提高VEGF的含量(P<0.01),对MMP1、TIMP2的表达也有下调趋势;细胞迁移试验结果显示,回阳生肌膏可增多人来源微血管内皮细胞的迁移数(P<0.05),龙珠软膏能显著增多细胞迁移数(P<0.01);蛋白质印迹法结果显示,回阳生肌膏、龙珠软膏均促进了糖尿病足创面内皮细胞VEGFR2蛋白的表达(P<0.05)。结论回阳生肌膏可抑制糖尿病足创面内皮细胞凋亡,促进糖尿病足创面内皮细胞迁移增殖,其机制可能与其调控基质金属蛋白酶类及抑制酶类,促进VEGF、VEGFR2的表达有关。

回阳生肌膏治疗下肢静脉性溃疡脾肾阳虚证的临床研究

目的对回阳生肌膏外用治疗下肢静脉性溃疡脾肾阳虚证患者开展回顾性分析,评价其临床疗效及安全性。方法回顾性选择2018年9月至2020年9月在首都医科大学附属北京中医医院住院及门诊随访的76例患者,按治疗方法分为治疗组38例(采用回阳生肌膏)与对照组38例(采用西医常规疗法)。疗程为4周,对两组患者的新生肉芽首次出现时间、创面面积、创面深度、肉芽色泽积分、创面分泌物积分及视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、创面愈合率及安全性指标等进行观察。结果与本组治疗前比较,治疗14天及28天后,治疗组与对照组的创面面积、创面深度、肉芽色泽积分、创面分泌物积分及创面VAS评分均显著下降,差异有显著性(P<0.05)。与对照组比较,治疗组首次新鲜肉芽出现时间显著少于对照组,差异有显著性(P<0.05)。在治疗第14天时,治疗组的创面面积及肉芽色泽积分显著低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。创面深度、创面分泌物积分、创面VAS评分及创面愈合率差异无显著性(P>0.05)。在治疗第28天时,治疗组创面面积仍显著低于对照组,同时创面分泌物积分、创面VAS评分、创面愈合率均与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。治疗组创面分泌物积分、创面VAS评分均显著低于对照组,而创面愈合率显著高于对照组。两组创面深度差异无显著性(P>0.05)。两组均未见不良反应。结论回阳生肌膏外用能促进下肢静脉性溃疡脾肾阳虚证者生长愈合,疗效优于西医常规外治疗法,且安全性好,性价比高,易于操作。

回阳生肌膏治疗糖尿病足溃疡的作用机制探讨

目的探讨回阳生肌膏对微血管内皮细胞的影响及其促进创面修复的作用机制。方法体外实验:将细胞分为4组,正常组:正常内皮细胞,模型组:病变内皮细胞,实验组:病变内皮细胞+回阳生肌膏,对照组:病变内皮细胞+龙珠软膏,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达量。体内实验:将大鼠分为3组,正常组:正常大鼠,模型组:糖尿病大鼠+凡士林纱条,实验组:糖尿病大鼠+回阳生肌膏纱条。观察创面愈合及形态变化,检测血清中TNF-α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达量。结果体外实验:与正常组比较,模型组eNOS的表达量较高,差异有统计学意义(P>0.05),与模型组比较,实验组和对照组中eNOS的表达量较低,差异无统计学意义(P>0.05),与对照组比较,实验组微血管中eNOS表达较高,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组中TNF-α的表达量较高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,实验组中TNF-α的表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组比较,实验组中TNF-α的表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组中IL-6的表达量较低,差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比较,实验组中IL-6的表达量较高,差异有统计学意义(P<0.05),对照组中IL-6的表达量较高,差异无统计学意义(P>0.05),与对照组比较,实验组中IL-6的表达量较高,差异无统计学意义(P>0.05)。体内实验:第3天时,与正常组比较,模型组的创面愈合率较低,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,实验组创面愈合率较高,差异无统计学意义(P>0.05)。第7天时,与正常组比较,模型组的创面愈合率较低,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,实验组创面愈合率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。第14天时,与正常组比较,模型组的创面愈合率较低,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,实验组创面愈合率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。第3天时,与正常组比较,模型组中TNF-α的表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,实验组中TNF-α的表达量较高,差异有统计学意义(P<0.05)。第7天时,与正常组比较,模型组中TNF-α的表达量较低,差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比较,实验组中TNF-α的表达量较高,差异有统计学意义(P<0.05)。第14天时,与正常组比较,模型组中TNF-α的表达量较高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,实验组中TNF-α的表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05)。第3天、第7天时,与正常组比较,模型组中的VEGF表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05),第14天时,与正常组比较,模型组中的VEGF表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05)。第3天、第7天、第14天时,与模型组比较,实验组中的VEGF表达量较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论回阳生肌膏能通过增加eNOS、VEGF的表达和降低促炎因子的表达,维持内皮细胞稳态,从而降低炎症反应,促进血管再生和创面修复,且效果优于龙珠软膏。

回阳生肌膏联合重组人表皮生长因子治疗激素与免疫抑制剂致大鼠皮肤溃疡的效果及机制

目的探讨回阳生肌膏联合重组人表皮生长因子治疗激素与免疫抑制剂致大鼠皮肤溃疡的实验效果及作用机制。方法选取SPF级成年雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、实验组A和实验组B各18只;造模成功后,实验组A给予回阳生肌膏纱条覆盖创面,实验组B采用含有回阳生肌膏和重组人表皮生长因子凝胶的纱条覆盖创面,正常组和模型组均只给予含有凡士林的纱条覆盖创面,每天换药1次,给药15 d。结果用药第3、7、14天,实验组A、B溃疡创面面积均显著小于模型组(P<0.05),实验组B溃疡创面面积显著小于实验组A(P<0.05);用药第14天溃疡愈合率比较,实验组B>实验组A>模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。用药第3、10天,实验组A、B肉芽组织中内皮型一氧化氮合酶(eN OS)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平显著高于模型组(P<0.05),实验组A、B肉芽组织中白细胞介素(IL)-6显著低于模型组(P<0.05);用药第3、10天,实验组B肉芽组织中eN OS、VEGF表达水平显著高于实验组A(P<0.05),实验组B肉芽组织中IL-6显著低于实验组A(P<0.05)。用药第3、10天,实验组A、B血清血清转化生长因子(TGF)-β显著高于模型组(P<0.05),实验组A、B血清IL-6显著低于模型组(P<0.05);用药第3、10天,实验组B血清TGF-β显著高于实验组A(P<0.05),实验组B血清IL-6显著低于实验组A(P<0.05)。结论回阳生肌膏联合重组人表皮生长因子治疗激素与免疫抑制剂致大鼠皮肤溃疡可以缩短创面愈合时间、促进创面愈合。

回阳生肌膏治疗慢性皮肤溃疡临床研究

目的:探究回阳生肌膏在慢性皮肤溃疡治疗中的临床应用价值。方法:选取36例寒湿凝滞证慢性疮面患者作为研究对象,随机分为观察组和对照组各18例,对照组患者采用常规治疗,观察组患者采用回阳生肌膏治疗,比较两组患者治疗前后的疮面形态评分。结果:经过治疗,观察组患者的腐肉、脓液、肉芽等疮面形态评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用回阳生肌膏治疗慢性皮肤溃疡有利于加快患者疮面的愈合速度,对提高患者生存质量有重要的意义,值得临床推广应用。

舒脉胶囊联合回阳生肌膏治疗2型糖尿病并发足部溃疡的临床疗效及对踝肱指数的影响分析

【目的】分析舒脉胶囊(由首乌藤、鸡血藤、当归、生黄芪等组成)联合回阳生肌膏(由肉桂、炮姜、人参、黄芪、当归、川芎、白芥子等组成)治疗气滞血瘀型2型糖尿病(T2DM)并发足部溃疡的临床疗效及对踝肱指数(ABI)的影响。【方法】通过盲法、便利抽样、对照原则回顾性研究首都医科大学附属北京中医医院2020年1月至2022年1月接诊的90例气滞血瘀型T2DM并发足部溃疡患者,根据治疗方法的不同分为观察组和对照组,每组各45例。对照组给予西医基础及局部清创治疗,观察组在对照组的基础上给予舒脉胶囊联合回阳生肌膏治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前后临床症状积分、ABI、溃疡面积、血清炎症因子[白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素6(IL-6)、超敏C反应蛋白(CRP)]、足背动脉血流动力学指标的变化情况,并评价2组患者的临床疗效。【结果】(1)治疗4周后,观察组的总有效率为95.56%(43/45),对照组为71.11%(32/45),组间比较,观察组的疗效明显优于对照组(P<0.01)。(2)观察组患者治疗2周和4周后及对照组患者治疗4周后的足部溃疡的色泽、面积、疼痛、渗出积分均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组在治疗2周和4周后对足部溃疡的色泽、面积、疼痛、渗出积分的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(3)观察组患者治疗2周和4周后及对照组患者治疗4周后的ABI均较治疗前升高(P<0.05),溃疡面积均较治疗前缩小(P<0.05),且观察组在治疗2周和4周后对ABI的升高幅度及对溃疡面积的缩小幅度均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(4)观察组患者治疗2周和4周后及对照组患者治疗4周后的血清IL-10水平均较治疗前升高(P<0.05),血清hs-CRP、IL-6水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组在治疗2周和4周后对血清IL-10水平的升高幅度及对血清hs-CRP、IL-6水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)观察组患者治疗2周和4周后及对照组患者治疗4周后的足背动脉搏动指数、阻力指数、血管内径、血流速度均较治疗前改善(P<0.05),且观察组在治疗2周和4周后对各项足背动脉血流动力学指标的改善幅度均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】舒脉胶囊联合回阳生肌膏可有效缓解气滞血瘀型T2DM并发足部溃疡患者的疼痛等症状,提高ABI,缩小溃疡面积,改善足背动脉血液循环,减轻炎症反应,疗效显著。

回阳生肌膏对糖尿病足溃疡小鼠阴证创面愈合的影响

目的:从促进内皮祖细胞(EPCs)动员的角度,研究回阳生肌膏促进糖尿病足溃疡阴证创面愈合的可能机制。方法:BABL/c雄性小鼠随机分为空白组、模型组、回阳生肌膏组,采用链脲佐菌素-激素-创面-塑料环埋置方法建立糖尿病足溃疡阴证创面小鼠模型,空白组和模型组创面予凡士林纱条,回阳生肌膏组创面予回阳生肌膏纱条,每日换药1次。比较给药第7、14天各组创面形态、计算创面面积及愈合率,HE染色观察创面皮损组织形态,流式细胞术检测骨髓中EPCs(BMEPCs)及外周血中EPCs(PBEPCs)数量,硝酸还原酶法检测创面皮损组织中一氧化氮(NO)表达,ELISA法检测外周血中血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的表达,对创面愈合率、BMEPCs、PBEPCs、SDF-1α、VEGF、NO之间进行相关性分析。结果:与空白组同期比较,模型组小鼠第7、14天创面面积显著增大(P<0.01),创面愈合率显著降低(P<0.01),创面皮损组织受炎性浸润程度重时间长、新生血管及肉芽组织出现缓慢,BMEPCs、PBEPCs数量均显著降低(P<0.01),NO、SDF-1α、VEGF水平均显著降低(P<0.01);与模型组同期比较,回阳生肌膏组第7、14天创面面积显著减小(P<0.01),创面愈合率显著提高(P<0.01),降低创面炎症细胞浸润,增加创面新生血管,促进创面组织重塑,BMEPCs及PBEPCs数量显著提高(P<0.01),NO、SDF-1α、VEGF水平显著提高(P<0.01)。创面愈合率与BMEPCs、PBEPCs、SDF-1α、VEGF、NO之间呈正相关(P<0.01)。结论:回阳生肌膏应用于糖尿病足溃疡小鼠能增加BMEPCs、PBEPCs的数量,增强EPCs动员增殖能力,促进血管新生、创面愈合,这可能与回阳生肌膏上调VEGF、SDF-1α及NO的合成释放,刺激EPCs动员有关。

回阳生肌膏联合默克尔细胞局部注射治疗难愈性创面大鼠纤维细胞S期细胞比例及促创面愈合机制分析

目的:分析回阳生肌膏联合默克尔细胞(MCs)局部注射对治疗下肢难愈性创面大鼠纤维细胞S期细胞比例及促创面愈合机制。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机数字表法将分成三组,正常组、模型组和观察组,每组各15只;观察组和模型组大鼠制备下肢难愈性创面模型,造模后观察组大鼠伤口处贴敷含有回阳生肌膏明胶海绵,无菌敷料包扎,隔天换药1次;同时在伤口中央与边缘3、6、9及12点位置注射25μlMCs悬液;模型组和正常大鼠不做任何处理。造模后7天随机选取7只大鼠、造模后14天选取剩余8只大鼠,腹腔注射40mg/kg戊巴比妥钠麻醉,断颈处死,采集腹主动脉血液6ml,使用ELISA法检测血清碱性成纤维生长因子(bFGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量,使用眼科手术剪将大鼠创缘0.5cm内肉芽组织剪取,流式细胞仪对细胞周期进行检测。结果:造模后7、14天模型组大鼠bFGF、TGF-β1含量比正常组下降,观察组比模型组上升,差异均有统计学意义(P<0.05);造模后7、14天模型组、观察组大鼠G2/M细胞比例、模型组G0/G1细胞比例比正常组上升,模型组S期细胞比例比正常组下降,观察组G0/G1细胞比例比模型组下降,S期细胞比例比模型组上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:回阳生肌膏结合默克尔细胞局部注射可提升难愈性大鼠血清TGF-β1、bFGF含量,提升S期细胞比例,加速创面愈合。

回阳生肌膏拆方对慢性皮肤溃疡模型小鼠疮面愈合及疮面巨噬细胞表型转化的影响

目的探讨回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡的影响及可能作用机制。方法 150只BALB/c小鼠分为空白组、模型组、西药组、益气温阳组、活血通络组,每组30只。采用免疫抑制联合皮肤伤口的方法制备小鼠慢性皮肤溃疡模型。益气温阳组和活血通络组分别给予益气温阳方和活血通络方各0.018 g,西药组给予重组人碱性成纤维细胞生长因子0.3 g,均制成含药明胶海绵、无菌贴贴敷,隔天换药,进行疮面拍照。测定疮面面积并计算愈合率;创伤第3、7、14天取疮面组织,HE、Masson和天狼星红染色观察疮面新生肉芽组织及胶原分布等;免疫组织化学法检测疮面组织巨噬细胞数量;使用实时定量PCR检测疮面局部M1、M2型巨噬细胞分泌的细胞因子基因表达。结果损伤第7、14天,与模型组比较,西药组、益气温阳组、活血通络组疮面面积减小,愈合率升高(P<0.05),且活血通络组愈合率高于益气温阳组(P<0.05)。损伤第3天,空白组、西药组、益气温阳组白细胞介素6(IL-6)水平低于模型组,血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素10(IL-10)水平高于模型组,活血通络组VEGF、IL-10水平高于模型组,且活血通络组VEGF水平高于益气温阳组(P<0.05)。损伤第7天,空白组、西药组、益气温阳组、活血通络组皮肤M1型巨噬细胞数量、TNF-α水平明显低于模型组,M2型巨噬细胞数量、VEGF、IL-10水平高于模型组(P<0.05或P<0.01),且活血通络组VEGF、IL-10水平高于益气温阳组(P<0.05)。结论活血通络方与益气温阳方均可促进小鼠皮肤慢性疮面愈合,其机制可能是通过促进巨噬细胞表型转化,促使疮面修复由炎症期过渡到增殖期,并且活血通络方对巨噬细胞表型转化作用优于益气温阳方。

回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡脾肾阳虚证患者创面巨噬细胞的影响

目的探讨回阳生肌膏促进慢性皮肤溃疡脾肾阳虚证患者创面愈合的可能作用机制。方法将70例慢性皮肤溃疡脾肾阳虚证患者随机分为治疗组34例与对照组36例,治疗组采用回阳生肌膏覆盖创面,对照组采用莫匹罗星软膏覆盖创面,疗程均为14天。分别于治疗前及治疗3、7、14天切取创面中心肉芽及提取创面分泌物,采用免疫组织化学法检测创面组织巨噬细胞数量(CD68阳性细胞)、M1型巨噬细胞[CD86、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)阳性细胞]、M2型巨噬细胞[CD206、精氨酸(Argi)阳性细胞]。使用ELISA法测定创面巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素10 (IL-10)相对含量。结果治疗组治疗第7天M1型巨噬细胞(CD86、i NOS阳性细胞)数量和TNF-α相对含量较治疗前明显增加(P <0. 05);治疗第14天M1型巨噬细胞数量和TNF-α相对含量较治疗第7天明显减少,M2型巨噬细胞(CD206、Argi阳性细胞)数量和IL-10相对含量较治疗前明显增加(P <0. 05);对照组治疗第7天CD68、CD86、i NOS阳性细胞数量及TNF-α相对含量均明显低于治疗前(P <0. 05),治疗第14天IL-10相对含量明显低于治疗前(P <0. 05);治疗组CD68阳性细胞数量、TNF-α相对含量治疗第3、7、14天,CD86、i NOS阳性细胞数量治疗第3、7天,CD206、Argi阳性细胞数量及IL-10相对含量治疗第14天均明显高于同时间对照组(P <0. 05)。结论回阳生肌膏促进慢性皮肤溃疡脾肾阳虚证患者创面愈合的作用机制可能是促进创面巨噬细胞的分泌及表型转化,并且其作用明显优于莫匹罗星软膏。

回阳生肌膏对糖尿病大鼠阴证疮面氧化应激的影响

目的探讨回阳生肌膏治疗糖尿病阴证疮面的作用机制。方法 108只雄性Wistar大鼠随机分为空白组18只,糖尿病组90只。将糖尿病组大鼠按照链脲佐菌素-激素干预-皮肤缺损-塑料环埋置方法制备糖尿病阴证疮面动物模型。造模成功的72只大鼠分为模型组、中药组、中药+抑制剂组、模型+抑制剂组各18只;空白组和模型组予以凡士林纱条,中药组予以回阳生肌纱条,中药+抑制剂组予以回阳生肌纱条并腹腔注射LY294002抑制剂,模型+抑制剂组予以凡士林纱条并腹腔注射LY294002抑制剂。在给药第3、7、10天检测疮面肉芽组织中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA含量及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)蛋白含量。结果各组第3、7、10天大鼠疮面肉芽组织中SOD、MDA、GSH-Px含量比较,差异均有统计学意义(P <0. 001)。与空白组同时间比较,模型组第3、7、10天大鼠疮面肉芽组织中MDA、SOD和GSH-PX含量明显增高(P <0. 05)。与模型组同时间比较,中药组可显著提高大鼠疮面肉芽组织中SOD和GSH-PX含量,降低MDA含量(P <0. 05);与中药组同时间比较,中药+抑制剂组各时间SOD和GSH-PX含量均下降,MDA含量均升高(P <0. 05)。与空白组同时间相比,模型组第3、7、10天PI3K、AKT、eNOS mRNA水平均升高(P <0. 05);与模型组同时间比较,中药组第3、7、10天PI3K、AKT、eNOS mRNA水平显著提高(P <0. 05);与中药组同时间比较,中药+抑制剂组PI3K、AKT、eNOS mRNA水平下降(P <0. 05)。结论回阳生肌膏可能通过PI3K/AKT通路抑制糖尿病阴证疮面氧化应激。

回阳生肌膏抗小鼠骨髓内皮祖细胞功能损伤的研究

目的观察回阳生肌膏对过氧化氢(H;O;)诱导的小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)功能损伤的影响。方法通过密度梯度离心法联合差速贴壁法提取、分离、培养小鼠骨髓EPCs,观察细胞形态及采用FITC标记的荆豆凝集素-1联合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)双摄取法鉴定EPCs。制备回阳生肌膏水提取物,采用细胞增殖/毒性试剂盒(CCK-8)筛选出最大无毒质量浓度(C)。针对回阳生肌膏水提取物进行化学成分定性分析。以0.12 mL/L H_(2)O_(2)刺激EPCs模拟糖尿病足溃疡氧化应激状态建立模型,将细胞密度调整至5×10^(8)L^(-1),分别种于培养板,5孔为1组。将细胞分为空白对照组,模型组,回阳生肌膏高、中、低剂量组。空白对照组与模型组不予干预,各给药组分别予回阳生肌膏水提取物高剂量(C)、中剂量(C/2)、低剂量(C/4)。采用CCK-8法、Transwell实验、小管形成实验分别检测细胞的增殖、迁移、小管形成功能,酶联免疫吸附测定(ELISA)及硝酸还原酶法分别检测细胞上清液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、一氧化氮(NO)的表达情况。结果提取的EPCs诱导培养至第7天经鉴定细胞为小鼠骨髓EPCs。确定C为50 mg/L,回阳生肌高、中、低剂量组的剂量分别为50、25、12.5 mg/L。回阳生肌膏水提取物中共有黄芪甲苷、人参皂苷、肉桂醛等35种成分。与空白对照组比较,模型组OD值降低(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.05),小管形成数量减少、总分支长度缩短(P<0.01),VEGF、SDF-1α、NO含量均降低(P<0.01);回阳生肌膏中、低剂量组OD值均升高(P<0.01),回阳生肌膏中剂量组迁移细胞数增多(P<0.01),VEGF、SDF-1α含量均降低(P<0.05,P<0.01),回阳生肌膏低剂量组VEGF、SDF-1α、NO含量均降低(P<0.01)。与模型组比较,回阳生肌膏高、中、低剂量组OD值均升高(P<0.01),小管形成数量均增多(P<0.01),SDF-1α含量均升高(P<0.01);回阳生肌膏高、中剂量组迁移细胞数均增多(P<0.01),总分支长度延长(P<0.05,P<0.01),VEGF、NO含量均升高(P<0.01)。结论回阳生肌膏水提取物应用于氧化应激下的EPCs可以有效修复细胞受损的增殖、迁移、小管形成功能,促进EPCs积极发挥增殖、迁移、血管新生作用,可能与其上调VEGF、SDF-1α、NO的表达有关。

回阳生肌膏治疗糖尿病足阴证疮面述要

糖尿病足(DF)是糖尿病中最容易发生的一类并发症。DF由于糖尿病而引起的截肢及截肢后复发率也在逐年上升,但目前尚缺乏明确有效的防治措施和手段,成为了当前医学界治疗的难点和热点,因此越来越多的专家学者专注于糖尿病足溃疡的研究。目前中医外科对糖尿病足方面的治疗有着明显的优势,其中回阳生肌膏属于中医外科外用药,在首都医科大学附属北京中医医院临床应用效果显著,现将回阳生肌膏治疗糖尿病足溃疡的研究进展叙述如下。

基于PI3K/AKT通路对回阳生肌膏促进糖尿病阴证疮面的微血管新生作用机制的初探

目的:探讨回阳生肌膏影响糖尿病大鼠阴证疮面的微血管新生可能的作用机制。方法:108只大鼠剔除实验术中死亡的18只大鼠后,将剩余90只大鼠随机分为:实验组、实验+抑制剂组、模型+抑制剂组、模型组、对照组,每组18只,实验组和实验+抑制剂组给予回阳生肌膏纱条,其余各组给予凡士林纱条,实验+抑制剂组和模型+抑制剂组腹腔注射Ly294002抑制剂,其余各组腹腔注射0.9%氯化钠溶液。每天给药1次,分别于给药后3、7、10d每组各处死6只大鼠,观察CD34免疫组化染色情况,ELISA法检测VEGF的含量变化。结果:给药3、7、10d,实验组较模型组CD34的IOD值升高显著(P<0.01);给药7d,实验+抑制剂组较实验组CD34的IOD值显著下降(P<0.01),模型+抑制剂组较模型组CD34的IOD值显著下降(P<0.01);给药3、7、10d实验组和实验+抑制剂组较模型组VEGF的蛋白含量显著升高(P<0.01),模型+抑制剂组较模型组VEGF的蛋白含量显著降低(P<0.01)。结论:回阳生肌膏可能通过激活PI3K/AKT通路,促进血管新生,从而促进伤口愈合。

回阳生肌膏治疗糖尿病大鼠阴证疮面的研究

目的探讨回阳生肌膏促进糖尿病大鼠阴证疮面愈合的机理。方法 66只雄性Wistar大鼠剔除不符合要求的大鼠12只,将剩下大鼠随机分为:实验组、模型组、对照组各18只,除对照组直接进行皮肤切除—塑料环埋置外,其他各组采用"腹腔注射链脲佐菌素(STZ)—肌注激素干预—皮肤手术切除—塑料环埋置"制备糖尿病大鼠阴证疮面的模型。实验组给予回阳生肌膏纱条,模型组和对照组给予凡士林纱条。每天给药1次,分别给药3、7、10 d后每组各处死6只大鼠,观察疮面愈合及形态变化,并取病理组织进行切片,观察HE染色及CD34免疫组化染色情况。结果给药3、7、10 d后,模型组愈合率均低于对照组(P<0.01),给药3 d实验组和模型组之间的愈合率差异不显著,但在给药7、10 d时愈合率有明显的差异,实验组愈合率均高于模型组(P<0.05);通过HE染色结果显示给药7、10 d后实验组和对照组较模型组肉芽组织生长旺盛,成纤维细胞、毛细血管丰富,胶原纤维加粗,炎性细胞较少,而模型组在给药7 d后炎性细胞达到最高值,给药10 d后有了明显的下降,且毛细血管开始增加,胶原纤维不断增多;给药3、7 d,实验组和对照组微血管生成标志CD34的IOD值升高显著(P<0.01),给药10 d略有下降,实验组和对照组之间的差异不显著;模型组在实验期间CD34的含量一直缓慢增加,与实验组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论回阳生肌膏可动态调节糖尿病大鼠阴证疮面从而有效促进疮面愈合。

回阳生肌散对慢性难愈性皮肤溃疡伴铜绿假单胞菌感染31例

目的:中医外治药物回阳生肌散对慢性难愈性皮肤溃疡伴酮绿假单胞菌感染的治疗作用;方法:选择临床上分泌物培养为铜绿假单胞菌的慢性难愈性属阴证疮面31例。入选标准:疮面色晦褐污秽,疮形平塌,无新生肉芽;疮周皮色淡黯,遇凉有酸痛、抽痛,分泌物清稀,或如粉浆,或干涸。应用回阳生肌散或膏剂、纱条治疗,疮面分泌物增加稠厚或有肉芽组织生长或10～15天时再次行分泌物培养。结果:治疗后分泌物培养为杆菌的有9例,其中仍为铜绿假单胞菌1例,大肠埃希氏菌(2)、肺炎克雷伯菌(2)、阴沟肠杆菌(2)、奇异变形杆菌(1)、鲍曼不动杆菌(1);球菌的有18例,金黄色葡萄球菌(12)、表皮葡萄球菌(3)、屎肠球菌(2)、鹑鸡肠球菌(1),无细菌生长4例。治疗前抗菌素敏感率平均为52.82%,治疗后杆菌为50.23%,球菌为54.87%,与治疗前比较P=0.32。结论:回阳生肌散不仅可以杀菌、抑菌,对病原菌抗药性影响较小或无影响,而且能促进疮面失活组织去除、肉芽增生、细胞激活,体现了中医药整体、辨证论治的优势。