获得性凝血因子XⅢ缺乏症一例

获得性凝血因子XⅢ缺乏症是一种较罕见的出血性疾病。1例于我院行正颌手术的患者,因术中出血不止而终止手术,最终结合实验室检查诊断为获得性凝血因子XⅢ缺乏症。本文对该患者的临床资料进行分析并复习相关文献,加强对获得性凝血因子XⅢ缺乏症的认识。

凝血因子Ⅲ在非小细胞肺癌高凝状态患者外周血中的表达及其临床意义

目的:研究凝血因子Ⅲ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)高凝状态患者外周血中的表达水平,并探讨其表达水平与临床病理特征和生存期的关系。方法:选取2013年1月至2014年10月云南省肿瘤医院病理和生化检测证实为NSCLC高凝状态患者74例,NSCLC无高凝状态患者42例作为研究对象,酶联免疫法检测血清凝血因子Ⅲ的表达水平,分析其与NSCLC临床病理特征和预后的关系。结果:化疗前NSCLC高凝状态患者血清凝血因子Ⅲ为(560.32~200.34)ng/L,显著高于无高凝状态患者(463.29~159.22)ng/L的表达水平(P=0.008),且显著高于化疗后凝血因子Ⅲ(471.39±160.31)ng/L的血清表达水平(P<0.001);凝血因子Ⅲ在NSCLC高凝状态患者血清中的表达水平与淋巴结转移(P=0.026)、远端转移(P=0.025)和TNM分期(P=0.007)有关,且与凝血酶原时间(PT)(r=-0.638,P=0.032)、活化部分凝血酶时间(APTT)(r=-0.702,P=0.028)呈负相关,与纤维蛋白原(FIB)(r=0.715,P=0.008)、血小板(PLT)(r=0.597,P=0.007)呈正相关;凝血因子Ⅲ高表达水平的NSCLC高凝状态患者1~3年总生存期显著低于低表达患者(P<0.05)。结论:NSCLC高凝状态患者血清凝血因子Ⅲ表达水平与淋巴结转移和TNM分期有关,对患者生存期具有预测的指导意义。

表皮生长因子受体Ⅲ型突变体在肝细胞癌中的表达及意义

背景与目的有许多证据表明表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)在一系列恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但EGFRvⅢ与肝癌的关系目前尚未明确。本研究旨在探讨EGFRvⅢ在人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)癌组织中的表达,并分析其意义。方法用免疫组化SP方法检测55例HCC癌组织及癌旁肝组织中EGFRvⅢ的表达。结果HCC癌组织中EGFRvⅢ的阳性率(61.8%,34/55)高于癌旁肝组织中的阳性率(38.2%,21/55),两者间有显著性差异(P<0.05)。人肝癌组织中EGFRvⅢ蛋白的检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤直径大小呈显著性相关,而与肿瘤数目、分化程度、血清AFP水平或HBsAg状况、癌旁肝硬化无显著性相关。结论EGFRvⅢ在肝癌组织中有较高表达,且与肝癌的发展及术后复发等有关。

表皮生长因子受体及Ⅲ型突变体在食管癌的表达及意义

背景与目的:已有研究显示表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant Ⅲ,EGFRv Ⅲ)在一系列恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但EGFR、EGFRvⅢ与食管癌的关系目前尚未明确。本研究探讨EGFR及EGFRvⅢ与食管癌组织发生发展的关系。方法:应用免疫组织化学及蛋白印迹实验(Western Blot)检测66例人食管癌组织及癌旁正常组织EGFR及EGFRvⅢ表达,评价EGFR及EGFRvⅢ在食管癌患者的性别、年龄、TNM分期及病理分级等临床参数组的表达分布。Pearson相关性检验分析EGFR及EGFRvⅢ表达相关性。结果:免疫组化显示EGFR、EGFRvⅢ在肿瘤组织表达的平均灰度净值分别为25.4±3.2、22.5±4.2,在癌旁正常食管组织平均灰度净值分别为5.0±3.5、5.5±3.0,肿瘤组织与正常组织相比差异均有显著性(P<0.000)。Western Blot显示EGFR、EGFRvⅢ在肿瘤组织表达的平均灰度净值分别为1.37±0.41、0.83±0.15,在瘤旁正常食管组织平均灰度净值分别为0.21±0.09、0.08±0.05,肿瘤组织与正常组织相比差异均有显著性(P<0.05)。在性别、年龄、肿瘤大小和生长方式方面EGFR、EGFRvⅢ的表达分布差异均无显著性(P>0.05),而在TNM分期、病理分级和淋巴结转移方面两者差异均有显著性(P<0.05)。免疫组化检测两蛋白表达净灰度值相关系数r为0.701(P<0.0001),Western Blot检测两种蛋白表达相关系数r为0.556(P=0.031)。两种研究方法均提示EGFR与EGFRvⅢ在食管癌中的表达成较好线性正相关性。结论:EGFRvⅢ在食管癌特异性表达,EGFR与EGFRvⅢ在食管癌中的表达呈线性正相关,提示EGFR与EGFRvⅢ与食管癌发生、发展密切相关。

日本血吸虫RNA聚合酶转录因子SⅢ-p15真核正反义表达载体的构建和鉴定

目的 构建日本血吸虫 RNA聚合酶 转录延长因子 S - p15真核正反义表达载体 ,为进一步鉴定该因子的生物学功能奠定基础。方法 采用表达序列标签法从日本血吸虫成虫 c DNA文库中获得了 1个 RNA聚合酶转录因子 (S - p15 )全长 c DNA序列 ,克隆及序列测定后 ,将该片段正向及反向插入到真核表达载体 pc DNA 3中。重组载体采用氨苄青霉素 L B培养基筛选、双酶切、PCR及测序鉴定。结果 经鉴定 ,S - p15 - pc DNA3真核正反义表达载体构建成功。结论 构建成功 S -p15 - pc DNA3真核正反义表达载体 ,为下一步鉴定其生物学功能奠定基础。

抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选

目的构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)特异性单链抗体库,从中筛选抗EGFRvⅢ特异性单链抗体。方法用pep-3偶联载体蛋白OVA,然后免疫BALB/c小鼠从脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增重链(VH)和轻链(VL)的可变区基因片段。将两基因片段由编码(Gly4Ser)3的linker连在一起,并克隆入噬菌体展示表达载体pCANTAB5E中,电转化至E.coliTG1,经辅助噬菌体超感染,构建噬菌体单链抗体库。以pep-3-BSA为抗原对所建抗体库进行4轮亲和筛选,用ELISA鉴定抗体与EGFRvⅢ结合的特异性。结果经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350和320bp,与预期理论值相符。经重组PCR得到大小约780bp的ScFv基因片段。ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为5.0×106的噬菌体抗体库,噬菌体滴度为3.0×104pfu/ml。通过亲和筛选使抗EGFRvⅢ噬菌体单链抗体得到富集,第4轮为第1轮的56倍。在E.coliHB2151中实现了单链抗体的可溶性表达。SDS-PAGE结果显示抗体相对分子质量为28000左右。ELISA测定结果显示该单链抗体具有结合EGFRvⅢ的特异性。结论成功构建了噬菌体单链抗体库,筛选得到了抗EGFRvⅢ特异性噬菌体单链抗体。

凝血因子XⅢ基因Val34Leu突变与脑出血神经功能的相关研究

目的 探讨凝血因子 XⅢ (FXⅢ )基因 Va134Leu突变与中国人群脑出血发病的相关关系。方法 利用等位基因特异性聚合酶链反应技术分析了 150例原发性脑出血病人和 150例非脑卒中对照组 FXⅢ基因的基因型位点频率。结果 在所研究的人群中发现了 4例 FXⅢ基因 Val34Leu突变的杂合子，全部位于脑出血组，没有发现突变型的纯合子。等位基因 Val34和 Leu34在所研究的中国人群中的频率分别是 99.3％和 0.7％。结论 FXⅢ基因 Val34Leu突变可能与中国人群的脑出血有潜在的关系。

凝血因子XⅢAPro564Leu基因多态性与脑出血关系的研究

目的探讨人凝血因子XⅢ A亚单位(FXⅢA)Pro564Leu基因多态性与原发性脑出血的关系。方法应用聚合酶链反应和限制性片断长度多态性技术,对80例原发性脑出血患者及80例健康对照者FXⅢA第12号外显子Pro564Leu基因多态性进行检测。结果脑出血组发现FXⅢLeu564/Leu564纯合子型8例,Pro564/Leu564杂合子型21例,对照组发现Leu564/Leu564纯合子型1例,Pro564/Leu杂合子型6例,脑出血组Leu564等位基因频率明显高于对照组(P<0.05)。结论FXⅢAPro564Leu基因多态性与脑出血有关,携带有Pro564Leu基因型者可能增加脑出血的危险性。FXⅢA Pro564Leu基因多态性在广西人群中的分布频率可能较黑色和白色人种低。

表皮生长因子受体和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体在胆囊癌中的表达及意义

目的检测胆囊癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)蛋白表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测52例胆囊癌组织及50例慢性胆囊炎组织中EGFR和EGFRvⅢ蛋白表达情况,分析EGFR和EGFRvⅢ蛋白表达与胆囊癌患者临床病理特征的关系。结果胆囊腺癌和慢性胆囊炎组织中的EGFR阳性表达率分别为46.6%和20%(P=0.005);胆囊腺癌中EGFRvⅢ的阳性表达率为28.8%,慢性胆囊炎组织未见EGFRvⅢ阳性表达(P=0.000)。EGFR和EGFRvⅢ蛋白在胆囊腺癌中表达呈正相关(r=0.517,P=0.000)。EGFR表达与胆囊腺癌组织分化、T分期相关(P<0.05);EGFRvⅢ阳性表达与胆囊腺癌组织分化、T分期、淋巴结转移、远处转移相关(P<0.05)。EGFR与EGFRvⅢ阳性表达胆囊癌患者总体生存显著低于阴性表达患者;EGFRvⅢ阳性表达、淋巴结转移是评估胆囊癌预后独立因素。结论胆囊癌组织中EGFR与EGFRvⅢ蛋白高表达,与胆囊癌分化程度、淋巴结转移等临床指标相关,可能成为胆囊腺癌诊断、治疗及评估预后的有效指标。

编码表皮生长因子受体Ⅲ型突变体PEP-3表位的cDNA的克隆

目的克隆出针对表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)PEP-3表位的cDNA片段,为高表达EGFRvⅢ肿瘤的免疫治疗奠定基础。方法根据PEP-3的碱基序列设计出有12对互补碱基的正负引物,正负引物互为模板进行PCR扩增,制备出两端含酶切位点的PEP-3 cDNA片段,再将扩增的PCR产物亚克隆于载体pGEM-T Easy构建重组质粒pGEM-T Easy/PEP-3。结果经限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序证实,编码PEP-3的cDNA片段被成功扩增并亚克隆于载体pGEM-T Easy中。结论成功克隆了编码表皮生长因子受体Ⅲ型突变体PEP-3表位的cDNA片段。

成都地区汉族群体抗凝血因子Ⅲ的遗传多态性

用等电聚焦免疫固定技术，调查成都地区225名无血缘关系汉族男女青年血浆抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）表现型的分布，发现B、AB两种普遍型和一种BV变异型；推算出ATⅢ的基因频率，即ATⅢ*A=0．1022，ATⅢ*B=0．8956，ATⅢ*V=0．0022。该遗传标记在中国人群中的频率分布系国内首次报道。

结肠癌围术期输血后血清凝血因子X、XⅢ水平与预后的相关性

目的探讨结肠癌围术期输血后血清凝血因子X(FX:C)、凝血因子XⅢ(FXⅢ:C)水平与预后的相关性分析。方法回顾性分析收治的146例行根治术治疗的结肠癌患者作为研究对象,将围术期输血量≥5U的患者作为观察1组(n=47),输血量<5U的患者作为观察2组(n=41),未输血患者作为对照组(n=58),观察各组患者血清凝血4项指标、FX:C、FXⅢ:C活性变化。并对患者进行随访,将其分为复发组和非复发组,分析不同预后结局FX:C、FXⅢ:C活性变化及与预后复发的关系。结果观察1组、观察2组凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)时间高于对照组(P<0.05),观察1组高于观察2组(P<0.05),观察1组、观察2组患者血清纤维蛋白原(FIB)水平、FX:C、FXⅢ:C活性低于对照组(P<0.05),观察1组低于观察2组(P<0.05);复发组患者血清FX、FXⅢ活性明显低于未复发组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,高/中分化程度、淋巴结转移、输血、低FX:C、低FXⅢ:C是结肠癌预后复发的独立危险因素。结论结肠癌围术期输血后患者凝血功能异常,血清FX:C、FXⅢ:C活性降低,均是影响结肠癌术后复发的危险因素。

表皮生长因子受体及其Ⅲ型突变体在人食管癌的表达及意义

目的检测表皮生长因子受体(EGFR)及表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)在人食管癌组织中的表达,探讨其与食管癌发生、发展的关系及其与各临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法(Maxvision TM二步法)检测食管癌组织及正常食管组织中EGFR和EGFRvⅢ蛋白的表达水平,并将检测结果与临床病理参数进行综合分析。结果食管癌组织EGFR和EGFRvⅢ的表达率分别为65.6%、58.5%,正常食管黏膜EGFR和EGFRvⅢ表达率为30.0%、0%。EGFR在食管癌组织的表达明显高于正常食管组织(P<0.01),EGFRvⅢ在正常食管黏膜不表达。二者在食管癌组织的表达与性别、年龄、肿瘤大小和生长部位均无相关(P>0.05),与食管癌的分化程度、淋巴结转移、远隔器官转移及临床分期相关(P<0.05)。结论EGFR、EGFRvⅢ过度表达可能与食管癌的发生发展密切相关,EGFR、EGFRvⅢ有望作为预测食管癌预后的候选基因,EGFRvⅢ在食管癌组织中特异性表达,可能使其成为食管癌治疗的理想的靶点。

库存血浆血小板第Ⅲ因子有效性改变的研究

目的 :探讨血小板第Ⅲ因子 (PF3)在库血存放过程中的改变 ,以保证高质量采血和输血。方法 :采用白陶土时间法对存放不同时间的库血进行血小板第Ⅲ因子有效性 (plateletfactor 3availabilitytest ,PF3a)测定 ,同时计数血小板。结果 :库血于 4℃存放 ,其PF3a 6h内改变不明显 ,6h后发生显著改变 (P <0 .0 5 )。结论 :PF3a研究提示 ,输血应首选最新鲜血液 ,其次为存放小于 2

人凝血因子ⅩⅢ的研究进展

人凝血因子ⅩⅢ(coagulation factor ⅩⅢ,FⅩⅢ)是参与凝血过程的最后一个凝血因子,不仅参与止血过程,而且与组织修复、伤口愈合、炎症、肿瘤等病理过程密切相关。先天性凝血因子ⅩⅢ缺乏症是由于F ⅩⅢ基因缺陷所致,目前已有数十种。F ⅩⅢ蛋白空间结构的阐明对理解F ⅩⅢ功能与结构的关系有很大的帮助。本文对目前F ⅩⅢ研究现状作一简要介绍。

检测初发过敏性紫癜患者XⅢ因子的临床意义

目的探讨XⅢ因子活性检测对初发过敏性紫癜肾累及的预测价值。方法检测102例初发过敏性紫癜患者XⅢ因子,随访12个月,分别于第3月及第12月统计肾累及患者数量并作统计分析。结果在随访3月及12月两个时点的肾累及率,XⅢ因子降低组明显高于XⅢ因子正常组,差异有统计学意义(3月时点:χ2=5.47,P<0.05,12月时点:χ2=5.30,P<0.05,);关联性分析结果显示XⅢ因子浓度与肾损害程度有关联性(χ2=135.15,P<0.005),且关联性很强(r=0.995)。结论 XⅢ因子浓度降低与过敏性紫癜肾累及有关,可作为肾累及的有效预测指标。

一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA链基因5’-端短串联重复序列[AAAG]n多态性分析

目的:分析一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA基因5’-端非翻译区STR多态性,对该亚基的突变位点进行遗传分离分析。方法:应用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法技术分析一个经测序确诊的凝血因子XⅢ基因缺乏的家系的凝血因子XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn。结果:在该家系中检测出两种基因型,先证者及其弟XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn的基因型为L2/L2基因型,先证者的父亲、母亲及其妹的基因型为L1/L2,先证者的XⅢA链基因的突变位点分别与父源的L2和母源的L2位点连锁。结论:根据家系XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn与FXⅢA基因突变位点的连锁关系可确定突变的遗传分离特点。

脑梗死患者血浆凝血因子XⅢ、IL-17水平与病程相关性及预后的研究

脑梗死是多种原因引起的脑血管供血障碍,可导致局部脑组织因缺血缺氧而出现坏死或软化等病理性改变。血浆凝血因子XⅢ含量和活性的变化可引起脑梗死凝血功能障碍;IL-17是一种新近命名的Th17细胞来源的强有力的炎症细胞因子,与广泛存在的IL-17受体结合产生促炎症反应。本课题研究脑梗死患者凝血因子XⅢ和IL-17水平变化来评估它们与脑梗死病程及预后的关系。

成纤维细胞生长因子受体2剪切突变体Ⅲc在膀胱癌中的表达以及与膀胱癌253J细胞多柔比星耐药的关系

目的探讨成纤维细胞生长因子受体2的剪切突变体Ⅲc(FGFR2Ⅲc)与膀胱癌发生发展及膀胱癌253J细胞多柔比星耐药的关系。方法选取2016年1月至2018年1月郑州市第一人民医院保存的膀胱癌组织标本143例,同时选取正常膀胱组织70例作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测组织FGFR2Ⅲc表达;选取膀胱癌253J细胞,同时建立耐多柔比星253J细胞,采用MTT法检测最大半数抑制浓度,细胞划痕试验检测细胞迁移。结果膀胱癌组FGFR2Ⅲc mRNA相对表达量为(1.782±0.342),明显高于正常膀胱组(P<0.05);病理分级高级别、病理分期T2~T4期FGFR2Ⅲc mRNA相对表达量分别为(1.945±0.330)和(1.869±0.322),明显高于低级别和Ta~T1期(P<0.05);不同病理分级、病理分期病人性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05);耐多柔比星253J细胞FGFR2Ⅲc mRNA相对表达量和最大半数抑制浓度分别为(2.001±0.291)和(13.02±1.10)g/L,明显高于253J细胞(P<0.05);耐多柔比星253J细胞迁移率为(23.02±3.12)%,明显低于253J细胞(P<0.05);耐多柔比星253J细胞凋亡率为(23.22±5.50)%,明显低于253J细胞(P<0.05)。结论FGFR2Ⅲc mRNA在膀胱癌组织中表达上调,与病理分级和病理分期有关,同时与253J细胞耐多柔比星、迁移有一定关系。