F12基因p.Gly175Cys和p.Gly542Ser复合杂合突变导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症的家系分析

目的:分析1例遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系的临床表型和基因突变情况,并探讨其分子致病机制。方法:凝固法检测活化部分凝血活酶时间和FⅫ活性;ELISA方法检测FⅫ抗原;Sanger测序法测定F12基因所有外显子及侧翼序列;ClustalX-2.1-win、PROVEAN及Swiss-Pdb Viewer软件分析突变位点氨基酸的保守性、突变氨基酸是否为有害突变及该位点发生突变后对蛋白质结构的影响。结果:先证者活化部分凝血活酶时间延长为71.3 s,FⅫ活性和FⅫ抗原分别降低为5%和6%;其F12基因第7和14外显子分别存在c.580G>T和c.1681G>A杂合错义突变,导致p.Gly175Cys和p.Gly542Ser;先证者父亲携带p.Gly175Cys杂合错义突变;先证者母亲、弟弟和女儿携带p.Gly542Ser杂合错义突变。软件分析结果表明Gly175和Gly542均保守,p.Gly175Cys和p.Gly542Ser为有害突变,突变发生后相应位点会对蛋白质局部结构产生影响。结论:p.Gly175Cys和p.Gly542Ser复合杂合突变是先证者家系遗传性FⅫ缺陷症的分子发病机制,其中p.Gly175Cys为国际上首次发现的新突变。

凝血因子Ⅻrs1801020和抵抗素rs1862513基因多态性与不明原因复发性流产的相关性研究

目的探讨凝血因子M(FⅫ)rs1801020和抵抗素rs1862513基因多态性与不明原因复发性流产(URSA)的相关性。方法选取2020年1月至2022年12月在该院产科门诊诊断为URSA的189例患者和191例同期健康产后女性,采用探针法PCR检测外周血中rs1801020和rs1862513基因多态性,观察各组间基因型及等位基因分布差异。结果URSA-A组FⅫrs1801020基因型和等位基因分布频率分别为4.9%(CC)、35.7%(CT)、59.5%(TT),22.7%(C)、77.3%(T);对照A组为8.0%(CC)、47.1%(CT)、44.9%(TT),31.5%(C)、68.5%(T)。URSA-B组抵抗素rs1862513基因型和等位基因分布频率分别为11.3%(CC)、47.3%(CG)、41.4%(GG),34.9%(C),65.1%(G);对照B组为10.2%(CC)、34.1%(CG)、55.7%(GG),27.3%(C),72.7%(G)。两个位点的基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05),而等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。FⅫrs1801020T等位基因在URSA组的分布频率高于对照组(χ^(2)=6.32,OR=1.567,95%CI:1.100~2.238,P=0.012)。抵抗素rs1862513G等位基因在URSA组的分布频率低于对照组(χ^(2)=4.96,OR=1.433,95%CI:1.050~1.969,P=0.026)。FⅫrs1801020 T等位基因可能是URSA的危险性因素,抵抗素rs1862513G等位基因可能是URSA的保护性因素(P<0.05)。两个位点联合基因型分析,相较于携带具有rs1801020 CC+rs1862513 CC基因型组合的人群,携带rs1801020 TT+rs1862513CG基因型的人群患有URSA的风险明显增高(OR=5.684,95%CI:1.210~30.920,P=0.035)。结论FⅫrs1801020T等位基因可能增加URSA的发生风险,抵抗素rs1862513G等位基因可能降低URSA的发生风险,rs1801020 TT+rs1862513 CG基因型比rs1801020 CC+rs1862513 CC基因型组合更易导致URSA。

凝血因子Ⅻ缺乏致患者活化部分凝血活酶时间延长的临床分析

目的探讨凝血因子Ⅻ缺乏导致患者活化部分凝血活酶时间(APTT)延长的临床分析。方法收集2019年6月至2021年12月于滨州医学院附属医院查体或就诊患者的血液凝血功能检查结果,筛查出3例APTT单独延长的血凝结果,另选取同期20名血液凝血功能检查结果正常者作为对照组,进行APTT纠正并分析试验结果及凝血因子活性检测结果。结果3例患者APTT的检测结果分别为159.8、142.3、158.1 s。对照组血浆混匀后测得APTT结果分别为26.0、26.6、23.5 s。患者血浆与正常混匀血浆1∶1混匀后测得APTT结果分别为28.7、28.1、26.4 s;混匀血浆37℃孵育1 h后,测得APTT结果分别为28.5、28.0、26.6 s;3例患者凝血因子Ⅻ(FⅫ)活性分别为8.0%、5.4%、1.2%。结论患者单独APTT延长,但无其他与血液系统相关的临床症状,也无凝血相关的疾病,不影响正常的生理功能,查体或无意中发现,临床治疗不建议进行补充凝血因子等特殊治疗,但如果存在原发病,仍需密切关注。

复发性流产妇女凝血因子Ⅻ基因Exon1-46C/T多态性研究

目的探讨复发性流产妇女凝血因子Ⅻ基因Exon1-46C/T多态性。方法回顾性收集2022年1—6月温州市中医院收治的138例复发性流产患者(观察组),同期选取69例妊娠史良好的健康女性(对照组)。检测两组凝血因子Ⅻ基因Exon1-46C/T多态性、凝血因子Ⅻ活性和凝血指标。结果两组凝血因子Ⅻ基因Exon1-46C/T的基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(均P>0.05),具有群体代表性。在基因型分布上,两组CC、CT、TT基因型频率差异有统计学意义(P<0.05),观察组CT基因型频率高于对照组,TT基因型频率低于对照组(均P<0.05)。在等位基因分布上,观察组的C等位基因频率高于对照组,T等位基因频率低于对照组(均P<0.05)。两组凝血因子Ⅻ活性差异无统计学意义(P>0.05),且两组CC、CT、TT基因型的凝血因子Ⅻ活性差异均无统计学意义(均P>0.05)。观察组CC基因型患者的APTT水平低于CT和TT基因型患者,且CT基因型患者的APTT水平低于TT基因型患者(均P<0.05)。结论凝血因子Ⅻ基因Exon1-46C/T为CT基因型,其可能与复发性流产有关。

艾叶提取物激活凝血因子Ⅻ发挥止血活血功能

目的:通过体外实验检测艾叶提取物对FXII的作用,探讨了其止血与活血的作用机理。方法:通过运用复钙时间测定、Western Blot、发色底物法及部分凝血酶原时间(APTT)测定,探讨了艾叶对血浆FXII的作用机制。结果:艾叶提取物依赖FXII有效缩短血浆复钙时间,艾叶提取液直接激活凝血因子XII(FXII),且存在量效关系。进一步对FXIIa下游底物检测结果显示,艾叶提取液可调控FXIIa激活纤溶酶原参与到纤溶反应。在APTT测定中,艾叶提取液对APTT呈时效关系,显示艾叶含药血浆APTT早期缩短,晚期显著延长。结论:结果表明,艾叶提取物可有效激活FXII参与到内源性凝血反应,促进血液凝固,同时可能通过调控纤溶酶原并抑制内源性凝血的下游底物参与活血过程。

凝血因子Ⅻ及Ⅷ在主动脉夹层围术期凝血功能中的作用研究

目的探讨凝血因子Ⅻ及凝血因子Ⅷ在主动脉夹层手术患者围术期的变化及对二次开胸的影响。方法选取2014年1月至2015年9月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的Stanford A型主动脉夹层患者88例,均接受中度低温停循环手术治疗。根据是否二次开胸将88例患者分为二次开胸组(10例)和未二次开胸组(78例),比较2组患者手术及术后重要指标,分析凝血功能障碍导致二次开胸的危险因素。选择麻醉诱导后(t1)、术中温度最低点(t2)、复温至36℃(t3)、术后4 h(t4)、术后24 h(t5)5个时点进行血液样本的抽取,应用酶联免疫吸附法进行凝血因子Ⅻ、活化的凝血因子Ⅻ、凝血因子Ⅶ、活化的凝血因子Ⅶ、凝血因子Ⅷ、活化的凝血因子Ⅷ、血红蛋白、血小板计数的检测。结果t2~t4时点凝血因子Ⅻ水平均低于t1,差异均有统计学意义(均P<0.05),t5时点与t1比较差异无统计学意义(P=0.065)。活化的凝血因子Ⅻ和活化的凝血因子Ⅷ水平由t1~t5全程呈逐渐升高趋势,与t1比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。凝血因子Ⅷ水平各时点均低于t1,差异均有统计学意义(均P<0.05)。凝血因子Ⅶ水平于t2和t3时点均低于t1,t4和t5时点均高于t1,差异均有统计学意义(均P<0.05)。二次开胸组术中失血量、术后总引流量以及悬红细胞输注总量、冰冻血浆输注总量、纤维蛋白原输注总量均高于未二次开胸组[1 700(1 375,2 000)ml比1 250(1 000,1 600)ml;4 250(2 533,7 060)ml比2 170(1 230,3 555)ml;2 700(1 125,3 825)ml比675(600,1 424)ml;1 200(400,1 550)ml比400(50,800)ml;2.00(2.00,2.88)g比2.00(1.00,2.00)g],t2时点血小板计数水平低于未二次开胸组[(61±28)×109/L比(72±39)×109/L],差异有统计学意义(P<0.05)。在校正体质量、体外循环时间、手术时间、低温停循环时间、术前血小板水平、术前血红蛋白水平等因素的影响后,多元Logistic回归分析发现,t2时点凝血因子Ⅻ水平(比值比=1.342,95%置信区间:1.058~1.570,P=0.012)为主动脉夹层患者接受外科手术后凝血功能障碍导致二次开胸的独立危险因素。结论凝血因子Ⅻ作为内源性凝血途径的启动因子,在主动脉夹层患者围术期的凝血功能中发挥着巨大作用,其在术中最低温时的水平较低可能是术后由于凝血功能障碍导致二次开胸的独立危险因素;而凝血因子Ⅷ作为凝血共同途径的重要因子,本研究未发现其增加二次开胸的风险。

艾叶提取物对凝血因子Ⅻ的作用机制和药效物质研究

目的观察艾叶提取物对FⅫ的作用位点并检测其所含物质,阐明其抗凝、促凝机制及药效物质基础。方法检测艾叶提取物干预下脑缺血病人血浆凝血4项、FⅫ活性;FⅫ、FⅫ-2含量;检测艾叶LODB1-6干预下血浆凝血3项、连续血浆凝固时间、FⅫ激活。液质联用分析LODB5。结果艾叶提取物延长了血浆APTT、PT、TT,降低高岭土对FⅫ的激活作用;各剂量组降低了FⅫ含量,但只有中、高剂量组FⅫ-2的含量降低。相比于LODB1-3,LODB5、6可延长APTT,LODB5还使TT延长;LODB5高剂量组和LODB6各剂量组FⅫ含量降低。液质联用分析LODB5,得到6种含量较高物质。结论艾叶提取物激活FⅫ产生促凝活性与EGF-Like2结构域有关。但艾叶提取物对脑缺血病人血浆整体表现出抗凝活性。其药效物质基础可能是异戊酸冰片酯、紫花牡荆素、棕矢车菊素、伞形花内酯、5,6,4′-三羟基-7,3′-二甲氧基黄酮、丁香酚。

维持性血液透析患者凝血因子Ⅻ活性及D-二聚体水平的变化研究

目的观察维持性血液透析(MHD)患者血浆凝血因子Ⅻ活性(FⅫ:C)及D-二聚体水平的变化,探讨凝血、纤溶的特点及血液透析过程对其影响。方法分别测定70例MHD患者(MHD组)在透析开始时和结束时的血浆FⅫ:C及D-二聚体水平,并与65例健康体检者(对照组)进行对照。结果透析前MHD组患者的血浆FⅫ:C水平为(127.6±37.2)%,高于对照组的(90.0±12.0)%,差异有统计学意义(t=5.52,P<0.01);透析结束时MHD组患者的血浆FⅫ:C水平为(84.3±19.7)%,低于透析前的水平,差异有统计学意义(t=7.58,P<0.01)。透析前MHD组患者的血浆D-二聚体水平为(1.09±1.07)mg/L,高于对照组的(0.35±0.09)mg/L,差异有统计学意义(t=4.11,P<0.01);透析结束时MHD组患者的血浆D-二聚体水平为(1.23±1.19)mg/L,高于透析前的水平,差异有统计学意义(t=7.50,P<0.01)。结论 MHD患者存在着高凝及继发纤溶状态,血液透析过程使其更加明显;血浆D-二聚体水平升高提示高凝继发纤溶存在;MHD患者FⅫ:C明显升高,血液透析过程会使血浆FⅫ:C下降。

两个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系FⅫ基因突变分析

目的:检测两个中国汉族人遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系中的FⅫ基因突变。方法:检测先证者及家系成员血浆FⅫ∶C,并以其外周血单个核细胞中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增FⅫ基因的所有外显子及其侧翼序列,用DNA测序仪检测FⅫ的基因突变。结果:在两个家系中共发现3种杂合型基因突变,即Gly526Asp、7142insertC和Gly542Ser。结论:上述3种FⅫ基因突变是导致中国人遗传性FⅫ缺陷的分子发病机制之一,且均为国际首次发现。

凝血因子Ⅻ活性的变化对深静脉血栓形成的影响

目的探讨凝血因子Ⅻ活性(FⅫ:C)的变化对纤维蛋白(原)溶解功能与深静脉血栓形成(DVT)的影响。方法采用一期法测定63例DVT患者和30例正常对照组的FⅫ:C,同时用发色底物法检测血浆纤溶酶原活性(PLG:A),酶联免疫法测定组织型纤溶酶原激活物抗原性(t-PA:Ag)、纤溶酶原激活物抑制剂-1抗原性(PAI-1:Ag)及免疫比浊法测定血浆D-二聚体(D-D)含量。结果DVT组FⅫ:C和PLG:A含量显著低于正常对照组(P<0.01),其中5例(7.9%)年龄<45岁的患者FⅫ:C低于正常对照组x--2s。PAI-1:Ag、D-D含量显著高于正常组(P<0.01)。t-PA:Ag含量与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论FⅫ:C下降易导致纤溶酶原内激活途径受抑制,DVT的形成与FⅫ:C降低有关。

凝血因子Ⅻ 46 C/T多态性一家系报道及相关文献复习

目的对1个表型诊断为FⅫ缺乏的家系进行基因诊断。方法检测先证者及其父母的血浆FⅫ:C,以其外周血单个核细胞中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增F12基因的全部外显子及其侧翼序列,PCR产物纯化后直接测序。结果先证者及其父、母FⅫ:C分别是52.5%、78.6%、89%,直接测序结果提示先证者F12基因的第1外显子46位碱基即启动子上游-4位为T/T基因型,其父、母在该位点均为C/T基因型。该基因的其它编码序列和侧翼部位未发现有碱基改变。结论F12基因的46 T/T多态性可能是导致先证者FⅫ缺乏的原因。

凝血因子Ⅻ基因多态性与急性心肌梗死的关联性研究

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者凝血因子Ⅻ(FⅫ)基因多态性和急性发作时血浆凝血因子Ⅻ活性(FⅫ:C)的变化及意义。方法收集97例AMI患者治疗前及76例对照血液标本,采用直接测序法检测FⅫ第46位基因多态性和一期凝固法检测血浆FⅫ:C,并进行比较分析。结果 FⅫ基因C46T多态位点CC、CT、TT 3种基因型以及C、T等位基因频率在AMI组与对照组中的分布均无统计学差异(均P>0.05)。CC、CT和TT 3种基因型分别对应的血浆FⅫ:C水平有统计学差异(P<0.01),以CC组活性最高,TT组活性最低。AMI组血浆FⅫ:C显著低于对照组(P<0.01)。结论 FⅫC46T基因多态性与AMI无关联,AMI发病时血浆FⅫ:C显著降低,FⅫ参与血栓形成。

基于金纳米粒子/1,6-己基二硫醇组装的脱氧核糖核酸电化学传感器检测凝血因子Ⅻ片段

将含有17个碱基对的凝血因子Ⅻ单链脱氧核糖核酸(DNA)片段固定在十六烷基三甲基溴化胺(CTMAB)保护的金纳米粒子/1,6-己基二硫醇/金电极上,以道诺霉素(DNR)为电活性指示剂,用于检测其互补序列。电化学阻抗谱(EIS)监测了整个组装过程,电极界面性质随组装层的改变而变化。循环伏安(CV)研究发现,DNR与单、双链DNA以不同的方式结合。通过微分脉冲伏安法(DPV)检测DNR的还原峰电流,获得DNA杂交的最佳条件为:杂交时间1h,道诺霉素的浓度为1.0×10-4mol/L,巯基修饰的单链DNA(SH-ssDNA)组装时间为24h。在最佳杂交条件下,当互补DNA(cDNA)的浓度从1.0×10-13mol/L增加到1.0×10-8mol/L,DNR的还原峰电流与cDNA浓度的对数值呈线性关系,其线性回归方程为:y=0.288+0.022lgx,线性相关系数为0.9987,cDNA的检出限达8.1×10-14mol/L。

凝血因子Ⅻ缺陷症导致再发体外受精和胚胎移植失败原因2例分析

目的 :探讨机体凝血因子Ⅻ(FⅫ)水平对再发体外受精和胚胎移植(IVF-ET)的影响。方法:检测患者凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅻ促凝活性(FⅫ:C)、纤溶酶原活性(PLG:C)、D-二聚体(D-D)等凝血指标;PCR扩增FⅫ基因的14个外显子及其侧翼序列,进行DNA测序,发现基因突变,则反向测序予以证实。50例正常对照组用于排除FⅫ基因多态性。结果:2例FⅫ缺陷患者APTT显著延长,FⅫ:C明显降低。患者1基因分析发现g.6753delACA杂合突变(国内外鲜见报道)和46T/T。患者2发现g.7142insertC杂合突变和46C/T。结论:FⅫ缺陷症患者易导致机体纤溶功能下降,是引起患者IVF-ET失败的重要原因之一。

凝血因子Ⅻ诱导外周血单核细胞分化为卵巢癌腹膜内肿瘤相关巨噬细胞的实验研究

目的:探讨凝血因子Ⅻ能否诱导外周血单核细胞(MO)分化为卵巢癌(EOC)腹膜微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。方法:分离正常女性外周血MO,在体外经Ⅻ因子刺激,流式荧光激活细胞分选技术(FACS)检测刺激后CD14、CD68和CD163表达的比例;ELISA检测TNF-α、IL-4、IL-8、TGF-β、IL-10、MMP2等因子的表达;Real-timePCR检测IL-10、IL-8、CCL18、CCR2、TGF-β、CXCR1及CXCR2等细胞因子及相关受体mRNA的表达,添加Ⅻ因子抑制物-C1酯酶抑制剂(C1-INH)后检测相应mRNA转录变化。结果:经Ⅻ因子刺激后,MO表面CD14,CD163表达比例上调[CD14:(57.025±11.135)%,CD163:(1.09±0.21)%],与阴性对照组[CD14:(45.2±5.24)%,CD163:(0.7±0.08)%]相比有统计学差异(P<0.05);经Ⅻ因子刺激后MO分泌IL-8,IL-10及TGF-β分泌表现出时间依赖性,IL-8及TGF-β于刺激后12h分泌达到高峰,IL-10分泌高峰为刺激后3h;刺激后IL-8,IL-10,CXCR2,CCR2以及CCL18mRNA的表达上调,添加C1-INH后,相应mRNA的转录水平下调。结论:凝血因子Ⅻ能诱导外周血MO分化成表型为CD14highCD163highIL-10highCCL18highIL-8high的单核巨噬细胞,类似TAM特征的巨噬细胞亚型,Ⅻ因子可能参与EOC腹膜微环境中浸润的MO分化,从而调控EOC的腹膜转移。

凝血因子Ⅻ缺陷症1例报道

凝血因子Ⅻ（coagulationfactorⅫ，FⅫ）缺乏在临床极为少见，遗传性FⅫ缺陷症呈常染色体隐性遗传，部分也可表现为显性遗传。近期我们发现1例遗传性FⅫ缺陷症，现报道如下。

抗磷脂抗体及凝血因子Ⅻ缺乏与视网膜静脉阻塞的相关研究

目的观察抗磷脂抗体(APA)及凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺乏在视网膜静脉阻塞(RVO)发病中的作用。方法对RVO患者33例(33眼)及正常对照组30例(30眼),采用ELISA法检测抗心磷脂抗体(ACA)(IgG、IgM、IgA);APTT法检测LA;一期法测定FⅫ活性。采用Fisher检验进行统计学分析。结果RVO组APAs总阳性率24.24%(8/33)与对照组6.67%(2/30)比较差异无统计学意义(P=0.085)。RVO组ACA阳性率18.18%(6/33)与对照组(0/30)比较差异有统计学意义(P=0.025)。≤50岁组及>50岁组RVO患者LA总阳性率与同年龄对照组相比差异均无统计学意义(P=0.160,P=0.206)。RVO组FⅫ缺乏率42.42%(14/33)与对照组13.33%(4/30)比较差异有统计学意义(P=0.013)。≤50岁组及>50岁组RVO患者FⅫ缺乏与同年龄对照组比较差异无统计学意义(P=0.206,P=0.052)。结论研究表明ACA阳性及FⅫ缺乏引起的凝血障碍与RVO发病相关。

凝血因子Ⅻ作为出血性脑卒中患者预后危险标志物的研究

目的探讨凝血因子Ⅻ(FⅫ)对出血性脑卒中患者预后的预测价值。方法选择2015年1月至2017年12月来本院接受手术治疗的出血性脑卒中患者100例。根据患者出院时格拉斯哥预后评分(GOS)分为预后良好组(n=60)和预后不良组(n=40)。比较两组患者在入院时临床特征方面的差异。绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析各因素预测出血性脑卒中患者预后的准确性。应用单因素、多因素非条件Logistic回归分析出血性脑卒中患者预后的危险性因素。结果预后良好组患者在D-二聚体、血栓调节蛋白、内皮素^(-1)、纤溶酶原激活剂抑制物^(-1)方面显著高于预后不良组(P<0.05),在年龄、体质量指数(BMI)、有高血压病史、血肿破入脑室、血肿体积、收缩压、白细胞计数、空腹血糖、C-反应蛋白、FⅫ方面显著低于预后不良组(P<0.05)。单因素、多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、血肿体积≥20.25cm3、D-二聚体<0.38μg·L^(-1)、内皮素^(-1)<1.08pg·mL^(-1)、FⅫ≥1.02IU·mL^(-1)是影响出血性脑卒中患者预后不良的危险性因素(均P<0.05)。结论入院时FⅫ水平与出血性脑卒中患者预后密切相关。

7例凝血因子Ⅻ缺乏症患者临床报道和文献复习

目的回顾性分析2016年2月~2020年1月就诊于本院的凝血因子Ⅻ缺乏症7例病例患者临床表现、实验室特征,以提高对此类疾病诊治方法的认识。方法对7例病例凝血因子Ⅻ缺乏患者的临床资料进行分析,并复习相关文献。结果 7例患者均以APTT明显延长为主要表现,无出血、血栓表现,有1例有阳性家族史,有1例为肿瘤继发的获得性凝血因子Ⅻ缺乏症。结论临床工作中APTT延长但无出血表现患者需全面筛查相关内外源凝血因子和获得性因素非常必要,以避免漏诊,误诊以及过度治疗。