碱性成纤维细胞生长因子与脑膜瘤细胞增殖活性的关系

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在脑膜瘤中的表达及其与细胞增殖活性间的关系,探讨bFGF在脑膜瘤发生和发展中的作用。方法:用免疫组化LSAB法检测38例脑膜瘤组织中bFGF与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,分析在bFGF不同病理级别脑膜瘤中的表达及其与PCNA标记指数(PCNA-L I)的关系。结果:本组38例中有22例bFGF染色阳性,阳性率为86.84%。在良性组29例中,有24例检测到bFGF的表达,阳性率为82.76%;非典型组和恶性组均有表达。与良性组比较,非典型组和恶性组的bFGF表达强度高,其差异具有显著性。PCNA-L I在良性组、非典型组和恶性组的标记指数分别为13.71±6.1%,31.72±10.7%,47.87±14.0%。非典型型组和恶性组PCNA-L I均高于良性组。bFGF的表达强度与PCNA-L I相关,随着bFGF表达强度的升高,PCNA-L I随之增加。结论:bFGF自分泌环在脑膜瘤的发生和发展过程中起重要作用,bFGF的表达与脑膜瘤细胞增殖活性有关。

周围神经损伤后内源性碱性成纤维细胞生长因子的表达

目的 :探讨周围神经损伤后内源性碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的变化规律及与神经修复的关系。方法 :5 6只 Wistar大鼠 ,随机分为坐骨神经钳夹组 (n=4 9)和正常组 (n=7)。采用免疫组化、计算机图像处理技术 ,对正常和损伤后不同时间的坐骨神经中 b FGF的表达进行检测。结果 :1采用钳夹的方式可使坐骨神经 b FGF表达增加。 2神经损伤后 4 h局部 b FGF开始升高 ,7～ 14 d达峰值 ,2 1d开始下降 ,2 8d恢复正常。结论 :1周围神经损伤后 b FGF表达变化与伤后时间有着时效关系。 2周围神经损伤后 b FGF表达明显增高 ,可能介导了神经损伤后一系列的细胞反应 ,以间接和直接的方式促进了周围神经的再生。

叶黄素对H2O2诱导的人视网膜Muller细胞氧化应激干预的作用机制

背景氧化应激是年龄相关性黄斑变性（AMD）的主要因素之一。研究表明叶黄素对AMD有预防作用，但是其抗氧化机制仍不明确。Mμller细胞是视网膜氧化应激反应的靶细胞之一，研究叶黄素对MUller细胞的氧化应激是否具有保护作用及其作用机制对于视网膜疾病的治疗具有重要意义。目的研究叶黄素对视网膜Mμller细胞核因子E2相关转录因子2／抗氧化反应原件（Nrf2／ARE）信号途径的影响。方法人Muller细胞株进行常规培养，将对数生长期的细胞接种于96孔培养板，在培养液中分别加入不同浓度（40、80、160、320、640ixmol／L）HO2，绘制Mμller细胞的凋亡曲线，取H2O2的半数致死量，即160μmol／L制备Mμller细胞氧化应激模型。将模型细胞分为模型对照组和不同质量浓度（12．5、25．0、50．0mg／L）叶黄素组，根据分组情况分别在培养液中加入相应质量浓度的叶黄素，用常规培养的细胞作为空白对照组。采用MTT比色法测定各组中Maller细胞增生值（吸光度，A值）和凋亡率；采用流式细胞仪检测各组细胞中活性氧簇（ROS）的荧光强度；采用实时荧光定量PCR检测细胞中Nrf2mRNA和血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA的相对表达量；采用Westernblot法检测各组细胞中Nrf2和HO-1蛋白的表达水平（灰度值）。结果MTT比色法检测显示，随着H2O2浓度的增加，细胞增生抑制率逐渐增加，各组间总体比较差异有统计学意义（F=43．890，P〈0．01）。空白对照组、模型对照组及12．5、25．0、50．0mg／L叶黄素组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=346．770，P=0．000），其中随着叶黄素质量浓度的增加，细胞凋亡率逐渐下降，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。空白对照组、模型对照组及12．5、25．0、50．0mg／L叶黄素组细胞中ROS含量分别为1．92±0．18、64．89±2．86、52．70±2．80、32．61±4．20和5．68±1．35，随着叶黄素质量浓度的增加，ROS含量逐渐下降，组间总体比较差异有统计学意义（F=324．900，P=0．000）。各质量浓度叶黄素组细胞中Nrf2和HO一1mRNA相对表达量及细胞中HO-1和细胞核中Nrf2蛋白表达量均明显高于模型对照组，各组间总体比较差异均有统计学意义（F=236．960、242．620、186．830、263．120，均P=0．000），随着叶黄素质量浓度的增加，Nrf2mRNA和HO-1mRNA及其蛋白的表达量逐渐增加，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05），但各组间Muller细胞的细胞质中Nrf2蛋白表达量总体比较差异无统计学意义（F=1．790，P=0．210）。结论叶黄素通过上调Nrf2的表达和核转位诱导抗氧化酶的表达，从而抑制Mailer细胞的氧化应激反应。

急性肺栓塞大鼠肺血管内膜VEGF及其受体2的变化

目的:观察血管内皮生长因子及其受体2在急性肺栓塞大鼠肺血管内膜的变化。方法:采用免疫组化技术检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(receptor2,flk-1)在急性肺栓塞大鼠肺小血管内皮的表达情况。结果:VEGF及flk-1均与栓塞早期肺组织中的血管重构呈正相关(P<0.05)。结论:VEGF及f1k-1参与了急性肺栓塞大鼠的血管重构过程并起着重要的作用。

卵巢癌40例化疗前后血清中CA125、TNF-a和SIL-2R检测及意义

目的:探讨血清中糖类抗原125(CA125)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-2受体(SIL-2R)在卵巢癌患者化疗前后检测及意义。方法:观察组选取我院接受化疗治疗的卵巢癌患者40例,对照组选取同期在我院进行健康体检妇女38例,应用放射免疫法与酶联法对观察组患者化疗前后血清中CA125、TNF-α及SIL-2R进行检测,并与对照组进行对比。结果:与对照组比较,观察组患者的CA125、SIL-2R及TNF-α的水平显著升高(P<0.05);与化疗前对比,化疗后观察组患者的CA125、SIL-2R及TNF-α的水平显著降低(P<0.05);与未复发组对比,复发组患者的CA125、SIL-2R及TNF-α水平仍显著升高(P<0.05)。结论:CA125、TNF-a及SIL-2R检测对卵巢癌的早期诊断及病情发展的判断均具有重要意义。

二十二碳六烯酸对人视网膜色素上皮细胞中血红素氧合酶-1表达的诱导作用

背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达HO-1尚未阐明. 目的 观察DHA对体外培养的RPE中HO-1表达的影响及其分子机制. 方法 对人RPE细胞系ARPE-19进行培养,分别用30、50、100和120 μmol/L DHA作用4～24 h,以不含DHA培养的细胞作为对照组.采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测DHA对细胞的毒性;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达;采用比色法分析各组细胞中HO-1酶活性变化情况;采用荧光探针H2DCFDA检测细胞中活性氧簇（ROS）的相对比例,并采用免疫荧光技术检测各组培养细胞中核转录因子-E2相关因子2（Nrf2）的核转位情况;分别采用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预法和Nrf2小干扰RNA（siRNA）转染法作用于培养的细胞,采用Western blot法检测细胞中Nrf2蛋白的表达,并观察其对细胞中HO-1蛋白表达量的影响. 结果 0、30、50、100和120 μmol/L DHA作用于ARPE-19细胞后24 h,培养上清液中LDH漏出率的总体比较差异有统计学意义（F=8.14,P＜0.05）,其中120 μmol/L DHA作用后细胞中LDH漏出率明显高于0、30、50、100 μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后8h,HO-1mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性总体比较差异均有统计学意义（F=16.24,P＜0.05;F=11.34,P＜0.05;F=11.81,P＜0.05）,其中30、50、100 μmol/L DHA组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后4h细胞内ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例的总体比较差异均有统计学意义（F=11.08,P＜0.05;F=16.42,P＜0.05）,其中30、50和100μmol/L DHA组细胞中ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.100 μ.mol/L DHA处理条件下,NAC预处理后细胞中HO-1蛋白的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于单纯100μmol/L DHA组,Nrf2 siRNA转染组细胞中HO-1的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于空白siRNA转染组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 低于100 μmol/L的DHA可能通过ROS/Nrf2途径诱导RPE细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.

2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清Sirt1与炎症因子的相关关系

目的 探讨2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清沉默信息调节因子1（Sirt1）与炎症因子水平及其相关关系.方法 436例2型糖尿病患者根据尿白蛋白排泄率（尿白蛋白与尿肌酐的比值,ACR）分为正常蛋白尿组（D1组168例）、微量蛋白尿组（D2组152例）、临床蛋白尿组（D3组116例）.采用酶联免疫分析（ELISA）法检测血清Sirt1、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、生长应答蛋白1（EGR1）、胰岛素样生长因子-Ⅰ （ⅠGF-Ⅰ）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平.并与正常对照组180例相比较.结果 2型糖尿病患者血清Sirt1水平显著低于对照组,且随着尿白蛋白排泄率增加,D1、D2、D3组Sirt1水平逐渐降低（P＜0.01）.与对照组相比,2型糖尿病患者血清炎症因子（HIF-1α、EGR1、IGF-Ⅰ、MCP-1）水平显著升高,并在D1、D2、D3组逐渐升高（均P＜0.01）.且血清Sirt1与炎症因子水平呈负相关.尿白蛋白/尿肌酐比值对数值[Ln （ACR）]（ACR取自然对数）与年龄、DM病史、FBG、空腹胰岛素（FINS）、HOMA-IR、HbA1c、LDL、TC、TG、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、HIF-1α、EGR1、IGF-Ⅰ、MCP-1呈正相关（P＜0.05）;与Sirt1呈负相关（P＜0.01）.HIF-1α、MCP-1、IGF-Ⅰ、DM病史、BUN、Sirt1、UA、LDL以及EGR1是影响Ln （ACR）的主要因素（P＜0.05）.结论 血清Sirt1或成为糖尿病肾病治疗的新靶点.提高血清Sirt1水平可能具有延缓糖尿病肾病的作用.

长期运动锻炼对2型糖尿病合并稳定型冠心病患者HbA1c及脂肪组织表达趋化因子和MCP-1的影响

目的研究2型糖尿病（T2DM）合并冠状动脉疾病（CAD）患者经过12个月的运动锻炼是否能减少皮下脂肪组织促炎标记趋化因子（CX3CL1）和单核细胞化学引诱物蛋白1（MCP。1）的基因表达。方法共纳入T2DM合并CAD的患者152例，按随机数字表法分为运动锻炼组（结合有氧和力量训练）和常规治疗组各76例。12个月后，抽取空腹血样和皮下脂肪组织样本。从脂肪组织和循环白细胞中提取RNA，RT-PCR方法检测其表达水平。使用酶联免疫吸附试验测定血浆中趋化因子和MCP-1水平。结果运动锻炼干预后，患者的空腹血糖（FBG）和糖化血红蛋白（HbAlc）水平均显著降低，血浆CX3CL1水平升高，与干预前相比，差异具有统计学意义（P〈0．05）；与常规治疗组相比，运动锻炼组患者FBG和HbA1c水平降低更明显，血浆CX3CL1水平升高更明显，差异具有统计学意义（P〈0．01）。然而，血浆MCP-1水平、皮下脂肪组织中CX3CL1和MCP-1mRNA在治疗前后差异无统计学意义（P〉0．05）。结论运动训练可以降低患者FBG和HbA1c及血浆CX3CL1水平，而血浆MCP-1及皮下脂肪中CX3CL1和MCP-1的表达变化没有差异。

E2F3在浸润性膀胱癌中的表达关系以及对患者生存的影响

目的 探讨转录因子家族（E2F）3以及Retinoblastoma（RB）在膀胱癌组织中的表达情况,并明确RB通路失活与E2F3高表达在膀胱癌组织中的关系及对膀胱癌患者预后的影响.方法 通过免疫组织化学法验证E2F3和RB在112例膀胱癌组织中的表达,分析其表达水平与患者的临床分期、病理分级之间的关系.结果 在112例不同分期的膀胱癌组织样本中,有83例膀胱癌样本表现为RB的失活,这种表达差异具有统计学意义（P＜0.01）,E2F3高表达只出现在浸润性膀胱癌中（x2 =8.67,P＜0.01）,并且与RB失活关系密切（r=0.031,P=0.014）.生存曲线显示,E2F3过表达对膀胱癌患者预后有着一定的影响（P＜0.05）.结论 E2F3在浸润性膀胱癌中高表达,并且与RB失活存在着密切的关系,同时E2F3高表达的膀胱肿瘤患者预后更差.

Nrf2在烧伤脓毒症肺中的动态表达研究

-目的探讨Nrf2在烧伤脓毒症大鼠肺组织中的表达规律。方法将Wistar大鼠分为正常对照组、单纯烫伤组、烫伤复合金葡菌脓毒症组和烫伤复合绿脓杆菌脓毒症组。依不同时相（2、8、24h），分为三个亚组，检测肺脏组织中Nrf2mRNA、Nrf2的蛋白质表达情况。结果正常大鼠肺组织中Nrf2mRNA较高表达（74．0±7．0）；单纯烫伤大鼠肺组织中Nrf2mRNA表达明显下调，分别为34．5±1．9、50．4±2．2、32．1±1．4（t=5．69～14．63，P〈0．01）；金黄色葡萄球菌所致烫伤脓毒症大鼠肺组织中Nrf2mRNA明显下调，分别为53．1±5．0、14．4±1．6、48．5±1．9，其中伤后8h达峰值（t=5．59-29．3，P〈0．01）；绿脓杆菌所致烫伤脓毒症大鼠伤后2hNff2mRNA表达无明显下降（71．0±8．1，P〉0．05），但伤后8、24h均明显下调（24．8±2．1、4．1±2．0，t=21．33，68．1，P〈0．01）。结论Nrf2直接参与了烧伤后免疫应答反应。

角质细胞生长因子及其受体在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨角质细胞生长因子及其受体在食管鳞癌组织中的表达规律及其在肿瘤组织发生、发展以及血管生成中的作用。方法采用免疫组织化学S-P染色法检测56例食管鳞癌组织中KGF、KGFR及CD34的蛋白表达,根据CD34染色结果计数微血管密度。结果 KGF及其KGFR蛋白表达定位于胞浆和胞膜;56例食管鳞癌中KGF和KGFR阳性表达率分别为57.1%、64.3%;且均与食管癌的分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论 KGF/KGFR在食管鳞癌发生、演进过程中起着重要作用,并与肿瘤血管生成关系密切。

Pax2和E—eadherin在肾细胞癌中的表达及其相关性研究

目的检测配对盒基因2（Pax2）和上皮性钙黏附蛋白（E—cadherin）在人肾细胞癌组织中的表达，以探讨二者与肾细胞癌临床病理因素的相关性及其与预后的关系。方法利用组织芯片技术构建85例肾细胞癌与35例癌旁正常肾组织芯片，应用免疫组织化学EnVision法检测Pax2和E—cadherin在肾癌及癌旁正常组织中的表达。结果Pax2在肾细胞癌中的阳性表达率[77．6％（66／85）]显著高于癌旁正常肾组织[14．3％（5／35）]，E—cadherin在肾细胞癌中的阳性表达率[30．6％（26／85）]显著低于癌旁正常肾组织[91．4％（32／35）]，差异均有统计学意义（P〈0．01）；Pax2在肾细胞癌组织中的表达与组织学分型和病理分级密切相关（P〈0．05），与肿瘤大小和临床分期无关（P〉0．05）；E—cadherin在肾细胞癌组织中的表达与肿瘤大小、组织学分型、病理分级及临床分期密切相关（P〈0．05）。生存组中E—cadherin的阳性表达率明显高于死亡组（P〈0．05）。结论Pax2和E—cadherin的表达异常可能参与了肾细胞癌的发生发展过程，联合检测两者可用于评估肾细胞癌的恶性程度和预后。

肺结核患者外周血单个核细胞MCP-1表达上升

目的 研究肺结核患者血浆单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的浓度特点及外周血单核细胞（PBMCs）经结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后MCP-1和IFN-γ的表达及相关性.方法 20例活动期肺结核患者和16位PPD阳性健康对照,采集EDTA抗凝血,用结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激PBMCs,采用FlowCytomix流式技术检测血浆和细胞培养液上清上中MCP-1和IFN-γ的表达.结果 肺结核患者血浆MCP-1浓度与对照组比较差异无统计学意义[肺结核组（263.8±25.31）pg/ml,对照组（212.1±18.04）pg/ml,P＞0.05],但肺结核患者的血浆MCP-1水平偏高,尤其是呼吸道症状明显的患者.肺结核患者的PBMCs经结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后,培养液上清中MCP-1的水平比血浆显著升高,肺结核患者与对照组比较差异有统计学意义[（21460±3376）pg/ml vs 10910±2141）pg/ml,P＜0.01],与IFN-γ的分泌无关（spearman r=0.1835,P＞0.05）.结论 肺结核患者血浆MCP-1浓度可能与病情发展相关;结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激外周血单个核细胞产生的MCP-1可能成为新的诊断指标之一.

下调蛋白激酶C－β对糖尿病肾病巨噬细胞的抑制作用研究

目的：明确下调蛋白激酶C－β（ PKC－β）是否可以抑制糖尿病肾病大鼠肾脏的巨噬细胞介导的炎性反应。方法30只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为3组，每组10只，分别为对照组，肾病组和治疗组，肾病组与治疗组用链脲佐菌素（ STZ）注射法制作糖尿病肾病大鼠动物模型。除对照组和肾病组外，治疗组给予PKC－β抑制剂10 mg／（ kg·d）灌胃，共2周。2周后检测大鼠尿蛋白和肌酐，HE染色后光镜观察肾脏组织病理变化，RT－PCR和Western blot方法检测巨噬细胞移动抑制因子（ MIF）和单核细胞趋化蛋白－1（ MCP－1）的mRNA和蛋白表达变化。结果糖尿病肾病建模成功后，大鼠尿蛋白增加，肾脏巨噬细胞浸润增加，肾小管间质明显损害，MCP－1和MIF的mRNA和蛋白水平较对照组明显上升（ P ＜0．05）；经过PKC－β抑制剂治疗后，大鼠尿蛋白明显下降，MCP－1和MIF mRNA和蛋白水平下调，与肾病组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05），相关性分析显示MCP－1、MIF和PKC－β的蛋白表达呈正相关（ P ＜0．05）。结论下调PKC－β通路可以拮抗巨噬细胞介导的炎性反应，降低糖尿病肾病大鼠肾脏MCP－1和MIF水平，可减少尿蛋白的漏出。