沙班类凝血因子Xa抑制剂的研究进展

血栓形成是导致心脑血管疾病的重要诱因,而抗凝治疗在预防血栓栓塞性疾病中起着很重要的作用。凝血因子Xa(FXa)是研究新型抗凝血药的一个重要的靶点,其中,沙班类抗凝血药是最经典的FXa抑制剂,近年来发展迅速,沙班类抗凝血药物具有口服方便、疗效和安全性好,受食物和其他药物影响小及无需监测国际标准化比值(INR)等优点,在临床上广泛应用并弥补了传统抗凝血药的不足。本文对沙班类凝血因子Xa抑制剂的研究进展进行综述。

丹参抑制凝血因子Xa和IIa的活性部位研究

目的确定丹参抑制凝血因子Xa(FXa)和凝血因子IIa(FIIa)的活性部位。方法利用发色底物法,测定丹参乙醇提取物不同极性溶媒萃取部位对FXa和FIIa的抑制百分率。用凝血酶原时间(PT)试剂盒测定丹参提取物活性部位对于大鼠血浆凝血时间的影响。结果丹参提取物的乙酸乙酯部位对FXa和FIIa均有较好的抑制活性,并且能够浓度依赖性延长PT。结论丹参中存在直接抑制FXa和FIIa的化学成分。

埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因片段的克隆测序

目的 :探讨我国登革热的重要媒介蚊种埃及伊蚊唾液中的抗凝血因子Xa基因。方法 :用兼并引物PCR方法从我国的埃及伊蚊基因组DNA扩增抗凝血因子Xa基因片段 ,克隆入测序T载体进行测序。结果 :扩增出抗凝血因子Xa基因片段长度约 30 0bp ,测序后发现与报道的埃及伊蚊的cDNA基因相应序列多了一段 6 3bp内含子 ,并有几个碱基和氨基酸序列变化。结论 :我国海南岛的埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因有一定差异 ,可能对应的是一个新的基因型。

抗因子Xa活性测定在血液透析老年患者中的应用

目的通过监测老年患者血液透析过程中抗因子Xa活性评估低相对分子质量肝素(LMWH)抗凝治疗的疗效。方法选择规律使用LMWH的老年血液透析患者95例,采用发色底物法检测原理一步检测抗因子Xa活性,根据抗因子Xa活性分组:A组30例(抗因子Xa活性<0.4 IU/ml),B组45例(0.4 IU/ml≤抗因子Xa活性<1.0 IU/ml),C组20例(抗因子Xa活性≥1.0 IU/ml);同时检测患者的KT/V值、血红蛋白(HGB),血清白蛋白(ALB),C反应蛋白、Ca、P和甲状旁腺激素(PTH)等,用SF-36健康调查量表进行生活质量评分。结果 KT/V值三组分别为:A组1.10±0.08,B组1.45±0.22,C组1.32±0.16;B组和C组高于A组P<0.05;HGB B组108.45±12.82g/L高于A组98.57±6.43g/L和C组95.79±10.54g/L,P<0.05;血清白蛋白分别为A组31.03±2.36g/L、B组39.03±3.17g/L、C组34.91±5.39g/L,B组高于A和C组,P<0.05;抗因子Xa活性≥0.4 IU/ml的老年患者中SF-36健康调查量表各项生活质量评分中生理功能、活力、社会功能、精神健康得分较高;C组血液透析的老年患者出血率为30%;相关分析显示抗因子Xa活性与kt/v、Alb、Hgb呈正相关,与PTH呈负相关。结论长期血液透析老年患者抗因子Xa活性维持在0.4IU/m^1.0 IU/ml的范围安全有效。

凝血因子Xa直接抑制剂的研究现状及应用

抗凝药物在血栓性疾病的预防和治疗中具有重要地位。抗凝治疗是防治静脉血栓栓塞症(VTE)、心房颤动(AF)和急性冠状动脉综合征(ACS)的重点,由于传统药物的局限性,凝血因子Xa抑制剂成为了研究的热点药物并逐步走向临床。本文对凝血因子Xa直接抑制剂的研究现状进行回顾,并对其临床应用及临床试验研究结果进行综述。

因子Xa依赖的组织因子途径抑制物

组织因子途径抑制物(TFPI)是新近发现的一种生理性抗凝物质,存在于正常血浆中,对组织因子和因子Ⅶa的复合物(TF/FXa)有强大的抑制作用,但其抑制机制需依赖因子Xa(FXa)的存在。本文就该抑制物的体内产生、生化性质、基因结构、作用机制及其临床意义作一综述。

人血凝结因子Xa发色底物的合成研究

利用混合酸酐法和活泼酯法及廉价的试剂较方便地合成了人血凝结因子 Xa的一种发色底物。

心肺功能衰竭患儿体外膜肺氧合支持治疗期间抗因子Xa和APTT与肝素用量的相关性

目的:探讨心肺功能衰竭患儿应用体外膜肺氧合(ECMO)支持治疗期间抗因子Xa、活化部分凝血活酶时间(APTT)与肝素用量的相关性。方法:选取38例严重心肺功能衰竭行ECMO支持治疗患儿,收集ECMO支持治疗肝素使用前、给予肝素10、15、20、25、30、35、40IU/(kg·h)时,检测血浆样本监测抗因子Xa活性和APTT,分析抗因子Xa和APTT在ECMO支持期间的安全范围患儿比例;采用Pearson分析抗因子Xa活性、APTT与ECMO肝素用量的相关性。结果:ECMO支持治疗期间,抗因子Xa、APTT比较,抗因子Xa相较APTT在安全范围内的比例更高、波动性更小(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,抗因子Xa与肝素用量呈强相关(r=0.81,P<0.05),而APTT与肝素用量呈中等相关(r=0.56,P<0.05)。结论:抗因子Xa能反映ECMO支持治疗患儿体内血浆肝素含量并呈强相关。

凝血因子Xa促进巨核细胞系Meg-01分化

目的:探讨凝血因子Xa在成巨核细胞白血病细胞Meg-01分化为血小板样颗粒中的作用及其机制。方法:以Meg-01细胞作为实验对象,凝血因子Xa作为激动剂,采用CCK-8法检测Meg-01细胞增殖活性,采用Alama Blue试剂盒分析血小板样颗粒活性,用Western blot检测MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路,采用Western blot和流式细胞术检测巨核细胞分化标志蛋白CD41b的表达,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡情况。结果:凝血因子Xa抑制Meg-01细胞的增殖,促进其凋亡。凝血因子Xa触发细胞G2/M期阻滞并下调SKP2蛋白表达,凝血因子Xa上调CD41b的表达并激活MAPK/ERK和PI3K/AKT通路,Meg-01细胞经凝血因子Xa刺激后产生了有活性的血小板样颗粒。结论:凝血因子Xa可能在巨核细胞分化为血小板的过程中发挥一定的作用。

新凝血因子Xa抑制剂Bg115-2的抗血栓作用及药代动力学(英文)

目的探讨Bg115-2的抗血栓功效和初步药代动力学性质。方法试剂盒测定小鼠半体内凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT);采用小鼠下腔静脉结扎模型评价对静脉血栓的作用;采用尾尖测定出血时间法;用FⅩa活性测定Bg115-2的血药浓度。结果 sc给予Bg115-2 0.19～3.0 mg·kg-1可明显地、剂量依赖地延长PT(P<0.05,P<0.01)和APTT(P<0.01);Bg115-2 0.75～3.0 mg·kg-1可显著地减轻血栓质量,其抑制50%血栓形成的剂量(ID50)为0.19 mg·kg-1;ig给予Bg115-2 1.5～6.0 mg·kg-1也明显地减轻血栓质量(P<0.01)。Bg115-2的出血反应与那曲帕林钙相似,有较高的出血风险效益比,ED2/ID50为26.8。另外单次sc给予Bg115-2 3.0 mg·kg-1显示出二室模型的药代动力学特点,t1/2为(6.18±1.45)h,cmax为(5.20±0.66)mg.L-1,AUC为(43.75±8.20)mg.L-1.h。结论 Bg115-2为一注射和口服均可的、强效的静脉血栓形成抑制剂,出血不良作用较轻。它具有较长的半衰期和二室模型的分布特征。

一种新型凝血因子Xa抑制剂的合成与活性研究

抗凝血药物是目前预防和治疗心血管疾病的一种主要手段,而凝血因子Xa抑制剂被认为是目前为止最为理想的一种抗凝血药物,具有口服吸收好、耐受性佳、药物代谢动力学和药效学特性可以预测等优点,有极大的希望可以替代华法林和维生素K拮抗剂。本研究对该类化合物进行了合成和活性研究。

选择性凝血因子Xa抑制剂:磺达肝癸钠的临床应用研究进展

磺达肝癸钠为全球首个人工合成的长效选择性凝血因子Xa抑制剂,多项临床前研究证实其是一种有效和安全的抗凝药物,2001年首次在美国上市,随后分别于2002年和2007年在欧洲和日本上市。迄今为止,已被批准用于静脉血栓栓塞症、急性冠状动脉综合征及深静脉血栓的预防和治疗。近几年,磺达肝癸钠在心房颤动抗凝、肝硬化门静脉血栓形成、新型冠状病毒肺炎患者的抗血栓和抗炎、肝素诱导的血小板减少症的临床应用中也有了长足发展。现综述磺达肝癸钠在上述疾病治疗方面的临床应用,以供临床参考。

凝血因子Xa的S4口袋部分关键残基对利伐沙班结合的不同作用机制

通过生物信息学对比、分子动力学模拟和结合自由能计算分析了利伐沙班与凝血因子Xa的S4口袋部分关键残基之间动态相互作用的细节.结果表明,利伐沙班与凝血因子Xa结合不稳定是由S4口袋关键残基突变对疏水盒子完整性的破坏所致.其中Trp215侧链的疏水作用对抑制剂结合的作用较大,但对整体结构的影响短时间内较小. Tyr99虽然在结合自由能中贡献较小,但其突变可能导致99 loop所在结构域的整体构象变化,从而对于抑制剂或底物的结合特异性产生影响. S4口袋关键残基的不同作用在凝血因子Xa直接抑制剂的药物设计及其拮抗剂的开发中应予以充分考虑.

Astellas公司因子Xa抑制剂Ⅱ期试验显希望

Astellas公司报告了其抗凝血药YM150Ⅱ期临床试验ONYX-2的第一个结果：这种口服因子Xa抑制剂对髋置换病人的作用与依诺肝素相当。这一化合物目前正在欧洲、美国和日本进行Ⅱ期试验，用于预防大的矫形手术后的静脉血栓事件（VTE）和预防房颤引起的血栓并发症。

生物技术及产品——口服因子Xa抑制剂有希望

Bayer公司的一个关键的研究性产品，因子Xa抑制剂BAY59—7939（Ⅰ）在预防髋关节及膝关节置换术中的静脉血栓栓塞（VTE）的Ⅱb试验中显示希望。（Ⅰ）将于2005年第四季度进入Ⅲ期试验。

抗Xa因子在高风险患者群体中抗凝给药的监测作用

静脉血栓栓塞症(VTE)是全世界重点关注的公共健康问题,由于其较高的发病率与致死率,国内外多项VTE防治指南提出了预防策略,但仍有VTE事件的发生。低分子肝素(LMWH)是临床上目前抗凝的首要选择,监测其抗凝疗效,可以降低血栓发生的风险。研究表明抗Xa活性水平可以很好地评估LMWH的抗凝效果,本文将对特殊人群在预防性抗凝治疗中抗Xa因子指标的作用进行综述,评估抗Xa因子监测抗凝用药的安全性和有效性。

凝血因子Xa轻链在CaA沸石表面吸附机制的分子动力学模拟研究

凝血因子Xa(FXa)和凝血因子Va(FVa)在血小板细胞膜表面可以结合形成凝血酶原酶复合物(FVa–FXa),并可以快速将凝血酶原转化为凝血酶,从而有助于成功止血.研究表明,钙基沸石可以扮演类似无机血小板细胞膜的角色,使得FXa和FVa在其表面自组装并高效催化凝血酶原转化为凝血酶.然而无机沸石表面FXa与FVa在Ca2+作用下的自组装机制并不清楚.鉴于在Ca2+作用下,FXa轻链中羧基谷氨酸(Gla)结构域在细胞膜表面凝血酶原酶复合物自组装中扮演的重要角色,研究FXa轻链在Ca2+作用下在沸石表面的吸附机制具有重要意义.本工作利用分子动力学(MD)模拟研究了Ca2+作用下,FXa轻链分别与磷脂双分子层(PS)细胞膜以及Ca2+交换的LTA型(CaA)沸石表面的相互作用.结果表明,FXa在PS膜表面的吸附主要是Ca2+参与的配位作用,而在CaA沸石表面的吸附主要是带正电的赖氨酸、精氨酸与带负电的沸石骨架之间的静电相互作用,Gla域结合的Ca2+起到稳定结构以及介导蛋白结合到磷脂膜表面的功能.

用于低分子量肝素治疗监测的抗Xa因子活性的性能验证和校准方法探讨

目的探讨应用抗Xa因子活性监测低分子量肝素(LMWH)的性能验证方法、评价标准和以及监测普通肝素(UFH)和LMWH时,不同校准方法对抗Xa因子活性检测结果的影响。方法参考美国临床和实验室标准化协会文件、我国卫生行业标准和厂家说明书,对STA⁃R Evolution全自动凝血分析仪检测抗Xa因子活性的精密度、线性范围、正确度和检出限进行验证。分别使用UFH校准和混合校准方法后检测含UFH的样品;分别使用LMWH校准和混合校准方法后检测含LMWH的样品,进行Pearson相关性分析,计算偏差和可比性符合率,绘制Bland⁃Altman偏差图。结果精密度验证的批内和批间精密度变异系数分别为1.6%~4.3%和1.6%~6.1%;线性回归方程斜率为1.0245,相关系数r为0.9993,样品的绝对偏差为-0.04~-0.03 IU/mL,相对偏差为-3.7%~2.8%;正确度验证样品的偏倚绝对数为0.00 IU/mL,偏倚相对数为-4.4%~2.5%;检出限验证结果的偏差为-0.03~0.01 IU/mL;UFH校准与混合校准方法比较,临床标本检测结果的绝对偏差为-0.02~0.02 IU/mL,相对偏差为-5.2%~2.7%,可比性符合率为100%;LMWH校准与混合校准方法比较,临床标本检测结果的绝对偏差为-0.02~0.02 IU/mL,相对偏差为-5.7%~3.4%,可比性符合率为100%。结论STA⁃R Evolution全自动凝血分析仪抗Xa因子活性监测LMWH的性能验证结果符合厂家要求或本研究设定标准;UFH校准与混合校准、LMWH校准与混合校准方法用于肝素类药物治疗监测的抗Xa因子活性检测结果相关性良好。

凝血酶及凝血因子Xa诱导血管平滑肌细胞中植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1表达的实验研究

目的研究血管平滑肌细胞中凝血酶及凝血因子Xa对新型的氧化型低密度脂蛋白的清道夫受体,即植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法培养的牛主动脉平滑肌细胞,予凝血酶及凝血因子Xa刺激后,用鼠抗LOX-1单克隆抗体,对细胞裂解液和浓缩的培养基进行Western blot分析,观察LOX-1表达的变化。结果在凝血酶2·0U/ml及凝血因子Xa50nmol/L时,可观察到细胞膜结合型LOX-1表达明显增加。凝血酶3·0U/ml和凝血因子Xa100nmol/L刺激14h后,细胞培养基中可溶型LOX-1表达明显升高。对平滑肌细胞给予1·0U/ml凝血酶及100nmol/L凝血因子Xa刺激,4h后LOX-1表达开始增加,12h后达高峰。AG1478是表皮生长因子受体相关酪氨酸激酶抑制剂。用指定浓度AG1478预刺激后,再予凝血酶和凝血因子Xa,然后对细胞裂解液进行Western blot分析。AG1478可显著抑制凝血酶及凝血因子Xa导致的LOX-1表达增加。结论凝血酶及凝血因子Xa可诱导LOX-1表达增加,此作用由表皮生长因子受体介导。

抗Xa因子活性室间质量评价调查品制备及应用

目的制备抗Xa因子活性室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室抗Xa因子活性检测能力。方法将肝素缓冲液和离心后的新鲜冰冻血浆按不同比例混合,配制成2个浓度水平的调查品,分装冻存。依据《标准物质的定值——通用原则和统计原理》和《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》要求对调查品的均匀性和稳定性进行评价。将自制的抗Xa因子活性EQA调查品发放至上海市14家医院临床实验室,分析各实验室抗Xa因子活性测定结果。结果自制EQA调查品均匀性良好(F<3.02)。复融稳定性结果显示,调查品在室温条件下可稳定5 h;短期稳定性结果显示,调查品在2~8℃条件下可稳定保存14 d。14家临床实验室2个水平调查品检测结果的变异系数(CV)分别为11.97%和9.85%。结论自制的抗Xa因子活性EQA调查品均匀、稳定,可用于评估上海地区临床实验室抗Xa因子活性检测能力。