新洋葱伯克霍尔德氏菌YM12的分离鉴定及其对黄瓜软腐病的防治效果

黄瓜软腐病是由巴西果胶杆菌Pectobacteriumbrasiliense引起的一种细菌性病害,该病害发生严重且难防难控,以筛选具有高效抑菌作用的生防微生物为目的,本研究在黄瓜根际土壤中分离得到了一株对巴西果胶杆菌具有显著抑制效果的菌株YM12。经形态学观察、生理生化特征测定及多基因系统发育树分析,鉴定其为新洋葱伯克霍尔德氏菌Burkholderia cenocepacia;抗生素合成基因检测结果表明,菌株YM12具有产生硝吡咯菌素pyrrolnitrin与藤黄绿脓菌素pyoluteorin的能力;其他生防性状分析表明,YM12具有溶磷能力,还可产生蛋白酶及嗜铁素。经抑菌谱分析,菌株YM12能够抑制5种病原细菌及3种病原真菌的生长。盆栽试验结果表明,菌株YM12对黄瓜软腐病具有明显的防治效果,防效可达62.84%,优于对照药剂春雷霉素。综上,菌株YM12是目前首次报道的对细菌性软腐病具有良好生防效果的新洋葱伯克霍尔德氏菌。

响应面法优化固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶回收工艺的研究

酶法制备生物柴油工艺引起了越来越多的关注。本文以脂肪酶回收前后脂肪酸甲酯得率之比作为检测指标,采用响应面法对自行制备的固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的回收工艺参数进行了优化,并利用软件SAS 9.0对实验数据进行分析。确定的最佳回收条件:回收溶剂用量20.4 mL,回收温度40.2℃,回收时间20 m in。此条件下,验证试验脂肪酶回收率最大可达98.26%,与回归模型预测最优条件下脂肪酶回收率99.59%非常接近,且使用30次后,其回收效率依然接近100%。R2=96.63%显示该回归模型在分析脂肪酶回收率方面具有极高的准确性和可信度。

树木伯克霍尔德氏菌DHR18诱导橡胶树抗病性相关防御酶分析

为探究树木伯克霍尔德氏菌(Burkholderia arboris)DHR18诱导橡胶树对胶孢炭疽菌优势种(Colletotrichum siamense)的抗性,以橡胶树苗GT1为材料,检测不同浓度的树木伯克霍尔德氏菌DHR18发酵液处理以及DHR18与胶孢炭疽菌CH-1协同处理下橡胶树叶片中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、过氧化物酶(peroxidase,POD)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanin ammonialyase,PAL)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)5种防御相关酶的活性变化。结果表明:经3个浓度(1×10^(8)、1×10^(7)、1×10^(6) CFU/mL)的DHR18发酵液处理后,橡胶树叶片中CAT、POD、PAL、SOD和PPO活性均高于对照,其中1×107CFU/mL浓度处理的5种防御酶活性最高,防御酶活峰值分别为1 009.14、29 138.67、110.24、902.42、148.00 U/g,分别是对照的2.68倍、3.35倍、1.88倍、3.97倍、4.51倍。树木伯克霍尔德氏菌DHR18与胶孢炭疽菌CH-1协同处理下,先喷施DHR18处理组的5种防御酶活性均高于其他处理组,显著高于对照,其CAT、POD、PAL、SOD和PPO活性峰值分别为1 230.85、45 504.67、117.53、1342.17、134.40 U/g,分别是对照的4.56倍、3.10倍、2.04倍、3.28倍、5.98倍;菌株DHR18对胶孢炭疽菌的平板抑制率为71.56%,在橡胶树苗上对胶孢炭疽病预防效果为81.79%,防治效果为44.35%。研究结果表明,树木伯克霍尔德氏菌DHR18可促使橡胶树防御相关酶的活性提高,诱导橡胶树产生系统抗性,诱导抗病性可能是树木伯克霍尔德氏菌DHR18拮抗胶孢炭疽病的原因之一。

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007产脂肪酶发酵条件优化及酶学特性

为提高内生生防菌吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007发酵产脂肪酶的能力,并确定该菌株脂肪酶的酶学性质,通过单因子试验和正交设计试验,优化该菌株产脂肪酶的发酵培养条件,初步考察了温度、pH、金属离子和有机溶剂对其活性的影响。结果显示:JK-SH007菌株产脂肪酶最优培养基组成及发酵条件为:葡萄糖15 g/L,蛋白胨20 g/L,K2HPO42.5 g/L,花生油400μL/50 mL,初始pH 8.0,发酵温度33℃。该脂肪酶反应最适温度为60℃,且在50~60℃条件下具有良好热稳定性;反应最适pH为8.0,在pH 5.0~10.0活性稳定;该脂肪酶对甲醇、乙醇、乙酸乙酯的耐受性好,具有较高甲醇抗性。研究结果表明,该酶对温度和pH均具有较宽的适应度,具有开发成生物催化剂的潜力。

环境中洋葱伯克利霍尔德菌群对化妆品的影响及其检测方法分析

本文通过对各国药典、法规、指导原则、行业标准和行业指南等文件进行梳理,简要介绍了洋葱伯克利霍尔德菌群对化妆品安全性的影响及其影响机制、目前的研究进展、在各领域中已经建立的检测方法、检测结果的分析,以及应用前景。研究发现,洋葱伯克利霍尔德菌群在化妆品中存在一定的风险,需要对其进行有效的检测和控制。本文旨在为相关研究提供参考和指导,以确保化妆品的使用安全性。

纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检查方法及结果分析

建立纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群(BCC)的检测方法,并对市售常见55批次纯露类化妆品进行BCC检测和鉴定。采用SIMCA软件对结果进行处理,运用主成分分析法(PCA)寻找微生物污染的规律。结果35批次样品检出洋葱伯克霍尔德菌,检出率为63.6%;PCA结果表明BCC的污染呈现一定的企业聚集性。该方法可用于纯露类化妆品中不可接受微生物BCC的检查,且多批次样品检出BCC表明消费者使用具有一定的风险,应引起高度重视。

洋葱伯克霍尔德菌复合群耐药机制及药物治疗进展

洋葱伯克霍尔德菌复合群(Bcc)是免疫功能低下患者的重要机会性致病菌,最早在肺囊性纤维化(CF)患者的痰液中分离发现,被认为是一种重要的CF相关气道病原体。随着抗菌药物使用、血液透析以及静脉导管、支气管镜等侵入性操作增加,Bcc感染不再局限于呼吸道感染,还可引起血流感染、化脓性关节炎及胸膜炎等其他部位感染。Bcc对不同类别的抗生素具有高度耐药性,治疗药物选择有限。因其耐药广泛,且耐药机制复杂,给临床治疗带来严峻挑战。现就其耐药机制及治疗进展进行综述。

基于体温扩增的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种3种可视化快速检测方法的建立

为实现食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种(Burkholderia gladioli pv. cocovenenans)的快速检测,基于体温扩增技术——酶促重组等温扩增(enzymatic recombinase amplification,ERA),并根据唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种bonM基因序列设计和筛选了ERA检测引物和探针,分别建立ERA显色法、荧光法、试纸条法3种可视化快速检测方法,并评估其特异性和灵敏度,以及在市售样品检测适用性和准确性。结果显示,建立的方法对3株唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病型菌株均有扩增,其他常见的食源性致病菌以及其他唐菖蒲伯克霍尔德氏菌均无扩增,说明检测方法的特异性良好。3种方法的检出限均为10^(-2)ng/μL,灵敏度较好。采用建立的3种可视化快速检测方法对15份市售样品进行检测,检出阳性2份,检出率为13.3%。该结果与国标方法的检测结果一致,说明方法具有较好的适用性和准确性。本研究建立的基于体温扩增技术的显色法、荧光法和试纸条法具有较高的特异性及灵敏度,37℃体温扩增15 min左右即可获取检测结果,且裸眼可视,可为食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种的现场可视化快速筛查提供新型简便的策略。

响应面法优化洋葱伯克霍尔德菌固定化脂肪酶催化合成生物柴油工艺

以自制的洋葱伯克霍尔德菌固定化脂肪酶为催化剂,在微水相、无溶剂体系中研究了大豆油和甲醇合成生物柴油的工艺。在系统考察了酶用量、醇油比、含水量、反应温度、反应时间、甲醇流加方式等因素对甲酯得率影响的基础上,利用响应面试验设计优化了各主效因子,建立甲酯得率的二次回归方程,获得了最优的工艺条件:加酶量2.4%、加水量7.1%、反应温度40.4℃、反应时间10.7 h、醇油比4.5。在此条件下,实验测得甲酯得率为97.2%,与响应面模型预测值96.9%非常吻合,说明该优化方法有效、可靠。

海藻酸-SiO_2杂化凝胶固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的研究

利用四乙氧基硅烷(TEOS)原位水解法将S iO2掺杂于海藻酸(ALG)凝胶中,通过双交联制备出新型ALG-S iO2杂化凝胶以固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶。结果表明,固定化酶的最优条件:质量分数为2.0%的ALG、0.2 mol/L CaC l2、V(ALG)/V(TEOS)为5、加酶量为1 g ALG加100 mg酶粉、固定化60 m in、采用直径为0.8 mm的针头滴定、真空冷冻干燥。在此条件下,酶蛋白的包埋率可达100%,酶活回收率可达91%。固定化酶的最适pH为8.0,最适作用温度为50℃,重复使用8次后,酶活性仍能保持80%以上。ALG-S iO2杂化凝胶的场扫描电镜(FESEM)观察发现凝胶的整体构造仍然是海藻酸凝胶骨架;与ALG凝胶平滑的内部相比较,杂化凝胶仍具有完整的网络结构,但内部更为粗糙,结构更为致密。

临床药师参与洋葱伯克霍尔德菌肺炎个体化用药治疗的临床实践

目的:探讨临床药师在复杂性医院获得性肺炎诊疗方案制定中的作用。方法:在对1例主动脉夹层术后继发医院获得性肺炎患者的诊治中,基于患者临床情况、微生物检查及抗菌药物治疗效果等临床信息,临床药师帮助医师为该患者提供个体化的抗感染治疗建议。结果:通过调整抗菌药物治疗方案,临床治疗获得了良好的效果,且治疗过程中无明显药物不良反应发生。结论:临床药师采用临床思维参与抗感染方案的制定及调整,并开展药学监护,有助于确保临床用药安全、有效。

洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶:一种应用前景广阔的生物催化剂

洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶对有机溶剂(醇)、热、氧化剂、表面活性剂、去污剂、蛋白酶等具有良好的抗性,在有机合成、对映体拆分、非水相催化等领域应用十分广泛。综述了洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵生产、分离纯化、基因克隆与表达、固定化与生物印迹、蛋白质结构解析及应用研究等,并展望了其未来发展方向,以期为该工业酶的研发与广泛应用提供参考。

洋葱伯克霍尔德氏菌Lu10-1产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究

旨在对洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)Lu10-1产脂肪酶的发酵条件及酶学性质进行研究。通过单因素和正交实验探讨了碳源、氮源、诱导物、初始p H值、温度等主要发酵参数的影响,并初步考察了温度、p H、金属离子和有机溶剂等对其催化反应的影响。结果表明,B.cepacia Lu10-1产脂肪酶最佳培养基组成和发酵参数为:可溶性淀粉1.5%,蛋白胨1.5%,橄榄油3 g/L,K2HPO4 2 g/L,发酵温度32℃,初始p H 9.0,培养48 h酶活达12.4 U/m L,比初始酶活提高了2.7倍。酶的最适温度和p H值分别为60℃和9,在60℃以下保持100 h酶活仍保持在80%以上,在p H5.0-10.0之间活性稳定,对甲醇、乙醇等有机溶剂耐受性好。

土壤中产脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌的分离与鉴定

洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)在生物防治、生物降解等农业领域有着广泛的应用,它产生的脂肪酶则在有机合成、精细化工等领域潜力巨大。采用改良的TB-T平板筛选法从土壤中初步筛选出300株洋葱伯克霍尔德菌,然后用脂肪酶活性检测平板对300株菌进行筛选,最终获得6株脂肪酶产量高的菌,通过发酵发现6株菌均有较好的产脂肪酶能力。随后通过16S rDNA比对的方法将6株全部鉴定为B.cepacia。在此基础上,采用HaeⅢ-recA RFLP和基因种特异性PCR对6株菌进行了基因种鉴定,结果表明JWT16、G63YL、WJ158和JWT137属于Burkholderia cenocepacia菌,JWP9属于Burkhold-eria vietnamiensis,JWT267则属于Burkholderia multivorans。

洋葱伯克霍尔德氏菌产邻苯二酚2,3-双加氧酶的研究

对洋葱伯克霍尔德氏菌L 68生长及产邻苯二酚2,3 双加氧酶(C23D)的条件进行了研究,其最适产酶pH7.2;最适生长温度30～35℃;最适培养时间48h;苯酚浓度0.09%最有利于菌体产酶.对菌株L 68产生的C23D酶进行了纯化,超声波破碎后的细胞提取液经硫酸铵分级沉淀、DEAESepharoseFastFlow层析、Hydroxyapatite层析、SephadexG 150层析后,收率为20%,酶比活力提高了230倍.SDS PAGE检测得到了分子量为(34±1)kDa的蛋白.

基于BP神经网络的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵软测量建模

为建立洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)脂肪酶发酵过程的软测量模型,运用BP神经网络对洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵过程进行软测量建模,并利用遗传算法对神经网络的初始权值和阈值进行优化,实现模型加快收敛速度,达到全局最优解效果。该模型能够比较精确地模拟菌体生长、底物消耗以及发酵产酶的过程动态,具有良好的泛化能力,说明BP神经网络结合遗传算法在洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵过程的模拟与预测中是一种高效快速的方法。

24株洋葱伯克霍尔德菌耐药性分析及β-内酰胺酶耐药基因检测

目的了解洋葱伯克霍尔德菌耐药情况及耐药基因,为临床用药提供指导。方法琼脂稀释法检测洋葱伯克霍尔德菌对10种抗生素的最低抑菌浓度(M IC);PCR法测定β-内酰胺酶耐药基因。结果洋葱伯克霍尔德菌对头孢呋辛耐药率最高,达71.5%,其次氨曲南69.9%,左旋氧氟沙星66.7%,美罗培南66.6%,氯霉素62%;耐药率最低的是米诺环素28.6%,其次头孢哌酮/舒巴坦31.6%,头孢吡肟33.3%,哌拉西林/他唑巴坦和头孢他啶分别为36.4%和40.3%。β-内酰胺酶耐药基因IMP-1和VIM-1为阳性,未检出OXA23、OXA10 OXA24、DHA1、VIM-2基因。结论洋葱伯克霍尔德菌对多种抗生素耐药率较高,临床应根据药敏结果合理选药。IMP-1和VIM-1的存在是导致洋葱伯克霍尔德菌对β-内酰胺抗生素耐药的重要机制。

PICU儿童洋葱伯克霍尔德菌感染20例临床分析

目的探讨儿童重症监护室(PICU)洋葱伯克霍尔德菌感染患儿临床特点,以加深对该菌的认识。方法回顾分析2015—2020年在本院PICU分离到洋葱伯克霍尔德菌的患儿临床资料及药敏结果,并对死亡组及存活组进行统计分析。结果死亡组与存活组比较,C反应蛋白、有创通气时间、入住PICU时间、免疫缺陷病例百分比及血培养阳性例数有统计学差异(P<0.05)。分离到的洋葱伯克霍尔德菌对头孢他啶、复方新诺明、美罗培南、头孢哌酮舒巴坦敏感性较高,对亚胺培南、氨苄西林、头孢呋辛等抗生素耐药性较高。结论长时间有创机械通气和入住PICU的患儿感染洋葱伯克霍尔德菌的风险增加;培养出该菌的患儿尤其应注意免疫缺陷的可能,且死亡率高;该菌对多种抗生素天然耐药,需要严格做好隔离措施,避免出现院内感染。

洋葱伯克霍尔德氏菌L68邻苯二酚2,3-双加氧酶基因克隆、表达和纯化

采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE(邻苯二酚2,3-双加氧酶)基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中。经双向测序,证实构建过程中未出现突变。重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶。选择26℃进行重组蛋白诱导。薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%。利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%。

洋葱伯克霍尔德菌0107产脂肪酶发酵条件优化研究

[目的]对洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)0107产脂肪酶发酵条件进行优化。[方法]探讨碳源、氮源、诱导物和pH值等条件对产脂肪酶的影响。[结果]较为合适的培养基组成为玉米粉1.50%,蛋白胨1.50%,橄榄油1.00%,K2HPO40.20%,MgSO40.05%。较优化的培养条件为:起始pH值9.0,30℃培养60h,酶活达9.15U/ml,与初始相比酶活提高1.7倍。酶的最适pH值和温度分别为8.5和所60℃,70℃保温2h酶活稳定,这些性质都有利于对动植物油脂的转酯化。[结论]该研究为洋葱伯克霍尔德菌0107所产酶的广泛应用奠定了基础。