固定化瑞士乳杆菌蛋白酶酶解乳清蛋白生产ACE抑制肽的条件优化

以乳清浓缩蛋白WPC-80为原料,研究固定化瑞士乳杆菌蛋白酶酶解WPC-80生产血管紧张素转化酶(angiotensinⅠ-converting enzyme,ACE)抑制肽的工艺条件。通过单因素试验和响应面方法研究了酶解温度、酶解p H值、底物与酶质量比([S]/[E])、酶解时间对固定化瑞士乳杆菌蛋白酶制备ACE抑制肽的影响,确定了酶解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:温度37℃、p H 7.5、[S]/[E]=15%、酶解时间8 h。在此条件下,酶解产物的水解度为(6.05±0.36)%,ACE抑制率为(59.54±0.61)%。

壳聚糖固定瑞士乳杆菌蛋白酶的条件研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法对瑞士乳杆菌蛋白酶的固定化条件进行研究。在单因素试验基础上,以固定化酶活力为主要指标,研究凝结液、壳聚糖质量浓度、酶用量、交联时间、戊二醛质量浓度对瑞士乳杆菌蛋白酶固定化的影响。运用响应面对固定化条件进行优化,确定瑞士乳杆菌蛋白酶的最优固定条件:凝结液为4g/100mL NaOH-甲醇(体积比3:1)、壳聚糖质量浓度2.89g/100mL、酶用量2.95mg、交联时间1h、戊二醛质量浓度0.40g/100mL,此时固定化酶活力为28.67U。

瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶提取研究

瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶是其蛋白水解系统中一个非常重要的蛋白酶。本实验采用螯合Ca2+的方法对瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取进行了研究,并确定了细胞壁蛋白酶提取的最佳实验条件。菌体用含有30mmol/LCaCl2的50mmol/LTris-HCl(pH7.10)缓冲液洗涤三次,然后用含有45mmol/LEDTA-Na2的50mmol/LTris-HCl(pH6.50)缓冲液悬浮,43℃保温,蛋白酶就会释放出来,90min后取出离心(4500r/min,20min,4℃),上清液即为粗酶液。粗酶液再经DEAE Sepharose CL-6B纯化,比酶活力提高了1.8倍。

瑞士乳杆菌高活力蛋白酶发酵条件的优化

本研究采用正交试验的方法对瑞士乳杆菌TS6024发酵乳清蛋白相关发酵条件进行优化,以达到瑞士乳杆菌分泌高水平蛋白酶能力的目的。实验结果表明,优化的发酵条件为:温度35℃、发酵初始pH6.5、接种量2.0%、静置发酵16h后,发酵液中生成游离氨基酸的水平达到994.170×10-5mol/L,分泌蛋白酶的活力达到62.136U。

响应面法优化瑞士乳杆菌产蛋白酶培养条件

为充分应用乳酸菌的产蛋白酶特性,本研究采用响应面分析法对瑞士乳杆菌产蛋白酶的培养条件进行优化。首先通过Plackett-Burman试验从7种因素中筛选发酵温度、发酵时间、起始pH为影响瑞士乳杆菌产蛋白酶的重要因素。进一步通过响应面分析得出最优产酶条件:发酵温度36℃、发酵时间16h、起始pH 6.65,瑞士乳杆菌的产蛋白酶活力为16.81U/mL和22.59U/mL,提高了34.4%,与预测结果接近,表明培养条件的优化有效,该发酵液为瑞士乳杆菌和所产蛋白酶的同步固定化研究提供了原料,也为瑞士乳杆菌产蛋白酶的应用研究奠定了基础。

产共轭亚油酸瑞士乳杆菌L7固定化条件的研究

对瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)L7发酵生产c9,t11-CLA的固定化条件进行研究。应用响应面法对细菌固定化的条件进行优化,得到的优化条件为:海藻酸钠质量浓度1.78g/100mL、氯化钙质量浓度3.13g/100mL、固定化时间60.30min,利用在此条件下制备所得的固定化胶珠发酵,c9,t11-CLA的产量达到561μg/mL。固定化细胞重复利用5次后活力没有明显变化,c9,t11-CLA产量保持在549μg/mL。电镜观察发现,固定化胶珠表面及内部为错综复杂的网状通道结构,能够很好的满足物质的传递。结果表明菌体细胞经海藻酸钠固定,可以有效提高菌体的重复利用率,从而降低c9,t11-CLA的生产成本。

酪蛋白水解物对瑞士乳杆菌生长的影响

利用胰蛋白酶水解酪蛋白,以水解物对瑞士乳杆菌增殖效果为指标,优化水解条件,并研究最佳增殖效果。结果表明:胰蛋白酶水解酪蛋白的最佳水解条件为水解温度37℃、底物质量分数5%、酶与底物质量比1:600、pH8.0,此条件下制备的水解产物添加量为1g/100mL时对瑞士乳杆菌生长增殖效果最好,而添加量大于4g/100mL时,对瑞士乳杆菌生长呈现抑制作用。

海藻酸钠固定瑞士乳杆菌条件优化

采用海藻酸钠固定瑞士乳杆菌,制备具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的酸乳,通过单因素试验和L9(34)正交试验确定其最优固定条件。结果表明,最优固定条件是1.5g/100mL海藻酸钠溶液、菌液浓度1:10(m/V)、0.1mol/L CaCl2溶液、固定时间1h。将固定化的瑞士乳杆菌与传统酸乳发酵剂(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)复配接入到11g/100mL牛乳中,在37℃条件下发酵至凝乳,凝乳时间为8h,pH值为4.2,凝乳状态好,口感柔和、细腻,成品酸乳ACE抑制活性为70.3%。

瑞士乳杆菌发酵乳制备ACE抑制肽的条件优化

本研究以脱脂乳为主要原料,对瑞士乳杆菌发酵产生血管紧张素转化酶(angiotensinI-converting enzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素试验和响应面试验设计,确定瑞士乳杆菌发酵脱脂乳生产ACE抑制肽的最佳工艺条件为:脱脂乳浓度9.67%(m/V)、底物灭菌时间30min、接种量3%(V/V),温度38.82℃、发酵时间6.26h,测得ACE抑制率为92.26%。研究结果证实利用发酵法生产乳源ACE抑制活性肽对控制高血压具有重要意义。

牛乳浓缩蛋白源多肽的制备工艺参数优化

采用牛乳浓缩蛋白为原料,以中性蛋白酶为水解酶类、瑞士乳杆菌作为发酵菌种的菌酶协同方式制备多肽,在酶添加量、温度、时间的单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合原理进行响应面试验设计,以多肽产率为指标,优化制备工艺参数。结果表明,在酶添加量90.45 U/mL、发酵温度45.30℃、发酵时间3.25 h的条件下多肽质量浓度最高,可达46.34 mg/mL,与理论预测值46.13 mg/mL相比,相对误差约为0.46%,说明此响应面模型拟合良好。

响应面法优化乳源蛋白水解工艺

本文在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合原理进行响应面实验设计,利用瑞士乳杆菌与蛋白酶结合的方式水解乳蛋白,以水解度为指标,进一步优化了工艺条件。结果表明最佳工艺条件为:复合胰蛋白酶是乳源蛋白最佳水解酶,发酵时间13 h,蛋白酶用量83 u/mL,发酵温度39℃。在此条件下蛋白水解度比单纯用瑞士乳杆菌发酵,水解度提高50.90%,实际水解度为72.21±2.12%。

响应面法优化酪蛋白源多肽制备工艺

以酪蛋白为原料,采用瑞士乳杆菌和蛋白酶组合的发酵方法,研究菌酶协同发酵方式对多肽产量的影响,并通过响应面法(Response Surface Methodology, RSM)进一步优化工艺参数。以多肽产量为检测指标,从酸性蛋白酶、复合胰蛋白酶、胃蛋白酶3种酶中确定酸性蛋白酶为最佳蛋白酶。在单因素实验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,研究发酵时间、酶用量、发酵温度对多肽产量的影响。结果表明,最佳工艺参数为发酵时间8.8 h,酶用量59 U/mL,发酵温度39.6℃。在此条件下多肽产量为(7.11±0.07)g/L,与单纯用瑞士乳杆菌发酵相比,多肽产量提高73.84%。