微胶囊法和交联法固定化磷脂酶A_1的比较

采用不同固定化磷脂酶A1的方法,即交联法和微胶囊法,以壳聚糖和海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂,固定化磷脂酶A1.通过考察固定化载体和固定化酶的性质以及固定化酶的活力回收等,比较两种固定化酶方法的优劣.结果表明,微胶囊包埋法固定化磷脂酶A1工艺较佳.

固定化磷脂酶用于冷榨菜籽油脱胶

以冷榨菜籽油为原料,用海藻酸钠-明胶固定化磷脂进行脱胶,通过单因素实验及旋转正交实验得出反应最佳条件为:固定化酶添加量240mg/kg,反应的起始pH为5·6,反应温度57℃,反应时间6h。在上述最优条件下进行脱胶实验,菜籽油含磷量从352mg/kg降到4·12mg/kg,脱胶效果好。

壳聚糖/海藻酸钠微胶囊固定化磷脂酶A_1及其结构考察

对壳聚糖/海藻酸钠微胶囊固定化磷脂酶A1方法进行优化,利用红外光谱和电子扫描显微镜(SEM),对微胶囊结构进行考察。表明微胶囊具有规则的通孔结构,有很大的内表面积,可增加包埋酶的效率,提高磷脂酶与卵磷脂的接触界面面积和固定化酶的活力回收。

固定化磷脂酶用于菜籽油脱胶

将海藻酸钠-壳聚糖固定化磷脂酶用于冷榨菜籽油脱胶,通过单因素和正交试验,确定最佳脱胶条件组合为:固定化酶添加量240mg/kg,起始pH值6.0,反应温度55℃,反应时间4h。固定化磷脂酶的操作稳定性得到提高。在上述最优条件下进行脱胶试验,测定固定化酶法脱胶油中的磷含量为4.3mg/kg,脱胶效果很好。

固定化磷脂酶A_1水解卵磷脂的研究

对固定化磷脂酶A1水解卵磷脂的条件进行优化,经正交试验确定最佳的酶解条件,即酶解温度为50℃,反应溶液pH为8.0,2%溶血磷脂4mL,酶解时间10h,且酶解溶液中加入溶血磷脂对磷脂的水解影响最显著。

固定化磷脂酶A1催化制备DHA型磷脂

以磷脂酰胆碱(PC)富集物和二十二碳六烯酸(DHA)浓缩液为底物,正己烷为反应介质,在固定化磷脂酶A1(PLA1)的催化作用下,制备DHA型磷脂(PL-DHA)。研究了底物摩尔比、加酶量、溶剂用量、反应温度、水活度、反应时间对PL-DHA制备的影响。通过条件优化,确定最佳条件为:DHA浓缩液和PC的摩尔比为4∶1,加酶量为2种底物总质量的20%,溶剂用量为4 m L,反应温度为40℃,反应时间为2 h。经气相色谱定量分析,得到的磷脂中DHA的含量为17.7 mg/g PL,并用棒状薄层色谱火焰离子检测器(TLC-FID)分析了PC含量随反应的变化。

固定化磷脂酶Lecitase~ Ultra催化合成果糖月桂酸单酯的研究

利用固定化磷脂酶Lecitase Ultra在脱水叔戊醇中催化合成果糖月桂酸单酯。对该酶法合成果糖单酯反应体系进行了优化,考察了加酶量、酸糖摩尔比、分子筛添加量、糖浓度和时间等几个影响酯化反应的因素。结果表明:在4 mL反应体系中,固定化磷脂酶Lecitase Ultra添加量25 g/L、酸糖摩尔比4:1、果糖250 mmol/L、分子筛添加量100 g/L、43℃下反应48 h果糖月桂酸单酯的转化率达到69.45%。

固定化磷脂酶用于大豆油脱胶的研究

将海藻酸钠-壳聚糖固定化磷脂酶用于水化大豆油脱胶,通过单因素实验和旋转正交实验,确定最佳脱胶条件为:固定化酶添加量0.012%,起始pH 5.8,反应温度58℃,反应时间4 h。在最优条件下进行脱胶实验,测定固定化酶法脱胶油中的磷含量为3.85 mg/kg,脱胶效果较好。同时,固定化磷脂酶热稳定性提高,对反应环境的耐受力明显增强,使脱胶反应条件更易控制,是一种非常有效的脱胶方法。

壳聚糖/海藻酸钠微胶囊固定化磷脂酶A_1(PLA_1)的研究

以微胶囊法固定化磷脂酶A1,考察固定化方法、固定化载体和固定化条件与固定化酶的活力回收的关系,结果表明,微胶囊包埋法固定化磷脂酶A1的最佳条件是:壳聚糖(DD%=85%、分子量为1.3×105)浓度为1.5%、海藻酸钠浓度为3%、戊二醛浓度1%、钙离子浓度为0.5mol/L、pH值为6。固定化酶的活力回收达到81%,半衰期为350h。

磁性固定化PLA_1的制备及其在脱胶应用中的研究

本文目的是研究磷脂酶A1的固定化条件并将固定化酶用于脱胶过程。以磁性Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)复合粒子为载体,考察不同的固定化条件对固定化酶相对酶活的影响,然后将制得的磁性固定化PLA1用于大豆油脱胶中,并对其酶活再生进行有益研究。结果表明,最优固定化条件为:酶液添加量20mL,pH6.0,反应时间5h,此时酶活力最高;最佳脱胶条件为:反应时间6h、反应温度55℃、加酶量0.12g/kg、油相起始pH6.0。在最优条件下进行脱胶试验,测定脱胶油中的磷含量为12.5mg/kg,脱胶效果较好。将再生的磁性固定化磷脂酶A1再用于大豆油脱胶中,延长了磁性固定化磷脂酶A1的利用时间,降低了大豆油酶法脱胶的生产成本。

反复分批式反应提高磷脂酰丝氨酸的生产能力

磷脂酶D(PLD)催化大豆磷脂合成磷脂酰丝氨酸(PS)反应是在油-水两相体系中进行的,大豆磷脂(PC)溶于有机相中,L-丝氨酸溶于水相中,但反应过程中产生副产物——胆碱,抑制酶的催化反应速率,需及时移除胆碱。本文主要采用反复分批式反应来解决这一问题。并考察了增大底物PC的浓度,PS的收率大大降低。低底物PC浓度下,添加不同浓度胆碱,转酯速率及PS收率都降低;高底物PC浓度下,采用反复分批式反应去除胆碱,转酯反应速率提高38%,PS收率达67%。研究表明反复分批式操作是一种生产磷脂的新型工艺,其中PS的生产能力明显提高,而且重复10次反应后,固定化酶活力仍保持58%,纳米Si O2固定化磷脂酶D较好地适用于反复分批式反应。

生物传感器在磷脂酶催化大豆油脱胶反应过程中的应用

为更准确地反映磷脂酶在催化大豆油脱胶反应过程中的变化规律,设计了将磷脂酶催化底物所产生的电子转移过程转换为电流输出的电化学生物传感器。以固定化磷脂酶作为生物元件,采集58℃下磷脂酶催化大豆油脱胶试验反应过程的电流变化,4h后测定脱胶油中的磷含量为3.69mg/kg,脱胶效果较好,验证了电流变化过程与催化反应过程的吻合程度。证明通过检测反应过程的电流变化可判断酶催化底物反应的程度,为实现计算机连续在线检测控制反应过程提供理论基础。

果糖月桂酸单酯的分离纯化及鉴定

采用硅胶柱层析色谱对叔戊醇中固定化磷脂酶Lecitase Ultra催化合成的果糖月桂酸单酯进行分离纯化。确定了薄层层析(TLC)条件,并通过反相-高效液相色谱-蒸发光散射检测(RP-HPLC-ELSD)测定柱层析纯化产物的纯度。利用液质联用(HPLC-ESI-MS)、红外光谱(FT-IR)和13C核磁共振(13CNMR)对目标产物进行确认,鉴定目标产物为酯化位点在1位和6位的果糖月桂酸单酯,四种异构体如下:1-月桂酸-β-D-吡喃果糖单酯、1-月桂酸-α-D-吡喃果糖单酯、1-月桂酸-β-D-呋喃果糖单酯和6-月桂酸-β-D-呋喃果糖单酯,且1-月桂酸-β-D-吡喃果糖单酯的比例最高。