固定化蛋白酶区域选择性催化合成蔗糖己二酸单乙烯酯

用固定化蛋白酶FG-F在有机溶剂中催化蔗糖和己二酸二乙烯酯（DVA）合成了蔗糖已二酸单乙烯酯。用吸附法以硅藻土为载体研究了蛋白酶FG-F的固定化。固定化条件优化为：pH值8～10，温度为20-40℃，磷酸盐缓冲溶液的浓度范围为0．02-0．06mol／L，酶与硅藻土的质量比为1：6。固定化酶在含水量为0．25％的DMF中，于45℃，220r／min，pH值为8时，转酯化催化活力最高。转酯化反应3d，DVA生成2-O-己二酸单乙烯基蔗糖酯的转化为52％。

固定化蛋白酶在兽医临床的应用

本文介绍俄罗斯科学院西伯利亚分院细胞与基因研究所科研人员用电子束加速器固定胰蛋白酶的情况 ,这种固定化蛋白酶制剂有很强的蛋白水解活力 ,可以分解和杀灭病原体并且对病灶的修复有较大促进作用。因此 ,用该制剂治疗家畜化脓性疾病有显著疗效 ,不仅减少使用抗生素造成畜产品药物残留问题 。

用固定化蛋白酶制剂治疗1059例化脓性疾病分析

目的 用 10 5 9例不同类型的化脓性病例检验 IMMOZIMAZA的治疗效果 (俄科研成果 )。方法 在麻醉剂的协助下 ,打开化脓病灶 ,清除表面的脓物 ,用 3%的过氧化氢或 1∶ 4 0 0 0的氯吩嗪溶液喷洒伤口 ,然后涂抹IMMOZIMAZA制剂 ,伤口上敷上绷带。伤口的愈合速度用公式 (V1- V2 ) / V1× 10 0计算。结果 IMMOZIMAZA使伤口净化速度比对照组快 1.5～ 2 .0倍 ;伤口上使用 IMMOZIMAZA后 ,第 3～ 4昼夜患病一侧皮肤体温与对应健康侧皮肤体温之差等于零 ;到第 5昼夜 ,伤口范围开始缩小 ;从第 3昼夜采集到的脓液中只能检出个别的球菌 ,样品中已经没有杆状细菌 ;第 4昼夜观察到 30 %的中性白细胞 ,而其中的 10 %已经退化 ,另外还检出 5 %的嗜曙红细胞 ,15 %的空泡巨嗜细胞和一些成熟的多胎血纤维蛋白。结论 IMMOZIMAZA治疗化脓性疾病是有效的。由于制剂本身是液体 ,所以将其注射到组织内部之后 ,可以延伸其蛋白水解作用 ,缩短剪裂蛋白的时间 ,促进新生组织生长。

壳聚糖微球固定化蛋白酶的制备及其在羊毛织物抗起毛起球整理中的应用

以壳聚糖微球为载体、戊二醛为交联剂,制备纺织用固定化蛋白酶.考察固定化蛋白酶的最佳制备条件及其稳定性,并将其应用于毛织物抗起毛起球整理中.结果表明:戊二醛用量为1.0%,交联时间为5 h,反应温度30℃,每g载体固定20 mL酶(稀释后),制备的固定化蛋白酶的固载率为84.4%,酶活回收率可达57.2%.与游离蛋白酶相比,固定化蛋白酶的耐酸碱稳定性、耐热稳定性与储存稳定性均有所提高,且可循环使用.将制备的固定化蛋白酶用于羊毛织物的抗起毛起球整理中,其抗起毛起球等级提高1.5级.

用于豆乳生产仿制干酪的固定化蛋白酶反应器

12种离子交换剂和壳聚糖颗粒作为固定化酶的载体进行了试验,比较了固定化酶的酶活稳定性及最佳处理方法。这些载体中,认为多孔强酸性Diaion cation-exchangers(RCP170H和Hpk25)较为理想。用装有75ml固定化酶的反应器处理豆乳,大约能得到2000ml的凝豆乳,如果固定化酶的量提高8倍,同样凝豆乳的量也提高8倍。

固定化蛋白酶对铜绿微囊藻生理机制影响研究

铜绿微囊藻为中国最广泛、最常见的蓝藻水华优势藻种,其产生的微囊藻毒素(microcystins,MCs)对水生生物和人体健康的危害和风险极高,而传统的降解方法很难将其彻底去除。该文选用经L-半胱氨酸修饰的氧化石墨烯作为载体制备固定化鞘氨醇单胞菌蛋白酶(简称"固定化蛋白酶"),在此基础上探究其对铜绿微囊藻生长及主要生理指标的影响,并评价其生态安全性。结果表明,固定化蛋白酶对铜绿微囊藻的抑藻效果优于游离态蛋白酶;当固定化蛋白酶投放剂量为0.5 mg/mL时,铜绿微囊藻生长受到明显抑制,共培养6 d藻细胞的相对抑制率(IR%)已高达71%,群体形态也逐渐解体转化为以单细胞为主;铜绿微囊藻的抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性均呈现先升高后降低的趋势,可见藻细胞受到了明显的胁迫和伤害;实验组MCs含量出现胞内高于空白组、胞外低于空白组且随着时间延长逐渐降低的现象,说明固定化蛋白酶虽能促使藻细胞产生应激反应增加胞内MCs,但不会促进藻毒素的释放,且对胞外MCs具有一定的降解作用;藻毒素合成酶基因mcyA、mcyH相对表达量总体上调,说明在固定化蛋白酶的胁迫下可促进铜绿微囊藻产毒基因的表达。经生物毒性测试发现,固定化蛋白酶对大型溞和斑马鱼均无明显抑制,具有良好的生态安全性,可应用至实际水华治理。

固定化碱性蛋白酶制备麦胚抗氧化肽条件优化

利用冻干麦胚蛋白粉为原料,筛选影响固定化碱性蛋白酶制备麦胚抗氧化肽工艺条件的因素,并利用影响因素优化麦胚抗氧化肽制备工艺。采用Plackett-Burman试验设计,筛选出显著影响因素。利用Box-Behnkeny试验设计,显著影响因素进行响应曲面优化试验。结果显示,显著影响因素从大到小依次为麦胚蛋白悬浊液pH值、酶水解温度、底物浓度;响应面分析试验得到麦胚抗氧化肽对自由基清除率的回归方程,方程达到极显著水平(F=35.62,P=0.000 5),拟和很好(R^2_(Pred)=0.964 5,R^2_(Adj)=0.957)。固定化蛋白酶制备麦胚抗氧化肽优化工艺参数:底物质量浓度为4.92 g/100 mL、麦胚蛋白悬浊液的pH为9.2和酶水解温度为58.5℃;在此条件下,抗氧化肽对自由基的清除率达到55.62%。固定化蛋白酶重复使用,第18次时抗氧化肽的相对产率达到91.47%。

壳聚糖载体柔性固定化木瓜蛋白酶

采用酶柔性固定化模型,以壳聚糖为载体,双醛淀粉为柔性链,对木瓜蛋白酶进行柔性固定化. 通过对固定化条件的优化,得出选用壳聚糖、双醛淀粉制得的柔性载体(Chitosan-DAS50)在酶用量为14.4 mg/g(酶/干球)、pH 8的条件下,固定木瓜蛋白酶18 h,所得的固定化酶活力回收率达72%,相当于采用壳聚糖-戊二醛(Chitosan-GA)手臂载体的3倍. 结果表明,酶的柔性固定化模型可以改善传统共价结合法固定化及手臂固定化酶活力回收率不高的缺陷.

复合纤维素膜固定化胰蛋白酶反应器及其应用于蛋白质酶解

合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯－纤维素复合膜，并以此膜为基质共价键合固定化胰蛋白酶，以Ｎ－苯甲酰－Ｌ－精氨酰乙酯（ＢＡＥＥ）为底物，应用高效液相色谱系统测定了酶固定化膜柱的催化反应特性．研究结果表明：温度、ｐＨ值、离子强度、有机溶剂及蛋白变性剂等都对固定化酶的活力有一定的影响．在最适条件下，固定化胰蛋白酶的活力为 １７ ８００ Ｕ／ｇ干膜，蛋白载量为 ３． ６ ｍｇ／ｇ（≈０． １５ μｍｏｌ／ｇ）干膜，活性回收率达到 ５２％．固定化酶表现出较高的使用和储藏稳定性，在４０℃下，水解ＢＡＥＥ底物２４ ｈ活力无显著变化．固定化酶膜柱在４ ℃冷藏保存 １００ ｄ仍保存 ９０％以上的水解活力．固定化酶反应器被应用于蛋白质酶解的肽谱实验．

超声场对固定化木瓜蛋白酶的影响研究

用壳聚糖-海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶后,超声处理固定化酶能够提高其活力,但对其最适温度与最适pH没有影响。研究了超声温度、超声时间、超声频率及超声强度对固定化酶活力的影响,单因素实验表明,在水浴温度50℃,135kHz,0.45W/cm2条件下超声50min时,酶活力提高最为显著,较未经超声处理的固定化木瓜蛋白酶活力提高了25.85%。研究低频槽式超声处理的固定化酶的动力学,结果显示超声处理使Km值降低,与未经超声处理的固定化木瓜蛋白酶Km值相比下降了31.83%,接近游离酶的Km值,Vmax值升高了8.35%。结果表明,超声场使酶与底物的亲和力增加。

超声对包埋-交联法固定化木瓜蛋白酶催化活性的影响

研究超声对包埋-交联法固定化木瓜蛋白酶催化活性的影响。将醋酸纤维素铺制成膜,包埋木瓜蛋白酶;以戊二醛为交联剂,进行交联反应,制得固定化木瓜蛋白酶。分别研究超声频率、超声功率和超声时间对固定化酶活性的影响,再由均匀试验得到超声强化固定化木瓜蛋白酶催化活性的最优条件。经均匀试验确定最优超声条件为135kHz、0.05W/cm2、25min,相对酶活力为197.22%。验证实验证明最优的超声条件下测得固定化木瓜蛋白酶的相对酶活力为182.68%,相对标准偏差为7.37%,没有显著差异。

固定化木瓜蛋白酶活性的X-射线微区分析

利用X-射线微区分析,对共价法得到的固定化木瓜蛋白酶的活性进行了分析;Na-苯甲酰-L-精氨酰胺盐酸盐作为底物,FeCl_3作为捕捉剂,底物经木瓜蛋白酶催化分解产生L-精氨酸及氨,后者和捕捉剂反应产生沉淀,可以确定固定化木瓜蛋白酶的催化活性部位。结果表明:以大孔结构吸附树脂为固定化酶载体,酶活较高,木瓜蛋白酶分布较均匀。并得到了固定化木瓜蛋白酶的活性定位的最佳条件。并对不同结构载体固定化木瓜蛋白酶的活性进行了研究。

海藻酸钠-壳聚糖固定化木瓜蛋白酶催化内吗啡肽的合成(英文)

反应体系以乙腈作为有机介质,在微水有机溶剂体系中以Boc-Trp-OH和Phe-NH2为底物,用海藻酸钠-壳聚糖固定化木瓜蛋白酶催化合成Trp-Phe-NH2时,产率为27.8%.在这一合成反应中,对pH值、离子强度、溶液含量、反应温度、酶用量和反应时间进行正交试验,证明pH是本合成过程的最重要影响因素.反应体系以乙腈为有机介质,在微水有机溶剂体系中以Boc-Tyr-Pro-OMe和Trp-Phe-NH2为底物,用IPSAC催化合成Tyr-Pro-Trp-Phe-NH2,产率为35.2%.

超声对改性明胶固定化木瓜蛋白酶活力的影响

本文探讨了超声处理对戊二醛改性明胶包埋的木瓜蛋白酶酶解反应条件以及酶学特性的影响。采用均匀实验的方法优化超声处理固定化木瓜蛋白酶的反应条件。利用偏最小二乘回归法分析均匀实验结果,得到最优条件为:135 k Hz、0.05 W/cm2、20 min、40℃,此条件下实测相对酶活为221.25%,与理论值相对误差为3.58%。超声并没有改变固定化酶的最适p H和最适温度,即超声并不改变固定化酶的酶学特性。

用木瓜蛋白酶及固定化木瓜蛋白酶拆分DL-苯丙氨酸(英文)

为了将手性化合物D-苯丙氨酸和L-苯丙氨酸进行分离,利用木瓜蛋白酶及固定化木瓜蛋白酶催化的方法对其拆分.试验结果表明,用DL-苯丙氨酸合成N-乙酰-DL-苯丙氨酸,得率为88.7%.木瓜蛋白酶、海藻酸钠-壳聚糖固定化木瓜蛋白酶(IPSAC)、尼龙布固定化木瓜蛋白酶(IPN)催化合成N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺时,对催化合成过程影响最大的因素分别是溶液中的离子强度、溶液中的离子强度、反应温度;溶液中的离子强度与pH对合成的影响较大.本试验得出分别用木瓜蛋白酶、IPSAC、IPN催化合成N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺的3个最佳方案;用此3个方案合成时,产率分别为61.2%、54.7%、36.3%.N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺水解生成L-苯丙氨酸,产率59.2%,光学纯度为96.6%.N-乙酰-D-苯丙氨酸水解生成D-苯丙氨酸,产率61.7%,光学纯度为95.7%.

应用固定化胰蛋白酶制备大豆肽的研究

采用固定化胰蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆低肽 ,对固定化胰蛋白酶水解工艺参数等进行了系统研究。结果表明 :固定化胰蛋白酶的最适温度为 6 0℃ ,最适pH为 8.7,最佳底物浓度为 2 .0～ 3.0mg/mL ,大豆分离蛋白的最佳流速为 0 .3mL/min ,大豆分离蛋白的水解率达到 4 5 .6 %,酶解液中大豆肽含量为1.4 6 2mg/mL。酶解液多肽分子量大部分在 10 0 0 0以下。

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5%戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5%约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。

不同载体固定化胰蛋白酶酶学特性的研究

目的:研究以壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体固定化胰蛋白酶的酶学特性。方法:通过测定不同载体固定化胰蛋白酶的活力得其最适反应温度值、最适反应pH值和米氏常数(Km)值。结果:以壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体制备固定化胰蛋白酶的最适反应温度分别为70℃、60℃、60℃;最适反应pH值分别为7.5、8.0、8.0;表观米氏常数K’m分别为22.72mg/ml、25.12mg/ml、29.04mg/ml。结论:与游离酶相比,固定化胰蛋白酶均表现出一定的热稳定性、酸碱稳定性,利于工业化生产。

以复合硅胶为载体的胰蛋白酶的固定化

目的 :制备固定化胰蛋白酶 ,用于转肽反应。方法 :以涂敷了壳聚糖的硅胶为复合载体 ,以系统全面反馈优化技术进行优化制备固定化胰蛋白酶。结果 :所制备的固定化胰蛋白酶平均酶活性为 2 2 82U/ g ,酶活性回收在 9%以上。结论 :制备的固定化酶的单位酶活性高 ,带入转肽反应体系的水分少 。