溶胶凝胶固定化酶流动注射化学发光法测定人体血清中的胆固醇

采用溶胶凝胶技术分别固定了胆固醇脂酶和胆固醇氧化酶,制成固定化酶柱;人体血清中胆固醇脂在胆固醇脂酶的催化作用下生成胆固醇,胆固醇在胆固醇氧化酶的催化作用下被氧化产生H2O2,将其与鲁米诺发生耦合的化学发光反应,在模拟酶血红蛋白的催化作用下产生较强的化学发光。结合流动注射技术,建立了溶胶凝胶固定化酶流动注射化学发光法测定胆固醇的新方法。实验发现,发光强度与胆固醇的浓度在一定范围内呈良好的线性关系,总胆固醇的线性范围为1.01×10-6～2.02×10-4mol/L(r=0.9975);检出限为7.5×10-7mol/L;游离胆固醇的线性范围为5.0×10-8～2.18×10-5mol/L(r=0.9991);检出限为5.0×10-9mol/L。用生化分析仪(东芝TBA-120FR)与本方法进行对照,两种方法无显著性差异。本方法已应用于临床血清样品中胆固醇的检测。

HPLC-电化学法测定胞磷胆碱钠注射液中游离胆碱含量

目的建立胞磷胆碱钠注射液中游离胆碱含量测定方法。方法采用高效液相色谱电化学检测法,专用色谱柱(ESA ACH-3,250 mm×3 mm ID)和固相胆碱氧化酶反应器(ESA ACH-SPR,3 cm),M5040分析电极和5300型电化学检测器,柱温:35℃,流速:0.35 ml.min-1。结果游离胆碱在0.12～2.89μg.ml-1范围内呈良好线性关系,r=0.9999,平均回收率为100.0%,RSD为2.7%(n=6)。结论该方法简便可行,重复性好,可用于胞磷胆碱钠注射剂中游离胆碱含量测定。

动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的方法

目的 建立动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中乙酰胆碱 (ACh)和胆碱 (Ch)水平的方法。方法 应用脑内微透析与高效液相色谱 (HPLC ) 柱后固定化酶反应器 (IMER ) 电化学检测法 (ED)相结合的技术 ,动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中ACh和Ch水平。结果 大鼠纹状体细胞外液中ACh和Ch浓度在灌流开始时较高 ,然后逐渐降低 ,ACh在灌流进行 2 4 0min后达到较稳定水平 ;Ch浓度则在灌流的 4 5 0min内持续下降。HPLC IMER ED检测ACh和Ch的极限可达 15 0fmol,且至少在 0 12 5～ 1 0 μmol·L-1的范围内线性关系良好。结论 HPLC IMER ED是一种灵敏且可靠的测定ACh和Ch的方法 ,和微透析技术相结合可以动态监测清醒自由活动大鼠脑内细胞外液中ACh和Ch的水平。