基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集

采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。

固定化金属离子亲和色谱法纯化猪铜锌超氧化物歧化酶

以Ｃｕ^（２＋）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ固定化金属离子亲和色谱法纯化猪铜锌超氧化物歧化酶，考察了不同的洗脱缓冲溶液及其ｐＨ对纯化效率的影响，显示了方法的有效性。

金属螯合亲和色谱固定相合成及应用进展

金属螯合亲和色谱因具有高稳定、强金属螯合性能等优点,在重金属的检测与吸附、蛋白质的识别与鉴定、分离纯化中有着重要的研究价值。自金属螯合亲和色谱概念提出以来,该技术得到了极大的发展与应用。基于目前的研究文献报道,本文综述了金属螯合亲和色谱固定相合成及应用等方面的研究进展。

IDA型固定化镍离子金属螯合亲和膜色谱对人血清白蛋白的分离纯化

采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了pH对HAS吸附效果的影响。经一步纯化,商品药用HSA中的许多杂蛋白可被除去,经毛细管电泳分析,纯度与Sigma公司的电泳纯HSA相当,回收率可达85%以上。纯化蛋白液中的镍离子经过自制的N,N,N′三羧甲基乙二胺(TED)型螯合柱处理后可较好地除去。

固定化金属离子亲和色谱研究进展

固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具有亲和选择性高、生物兼容性好、可逆再生等优势,迄今已发展了40余年,广泛应用于靶分子的特异性富集、分离与纯化,本文综述了近3年固定化金属离子亲和色谱纳米材料、微球色谱基质、棉纤维、分子印迹材料、整体材料、共价有机骨架等方面的研究进展。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定水蛭药材中11种重金属元素

采用微波消解法联合ICP-MS法,以钪、锗、铟、铋为内标元素,采用KED模式对样品中重金属元素的含量进行测定,建立电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)同时测定水蛭药材中11种重金属元素的含量。数据显示11种重金属元素具有良好的线性关系,线性系数(r)均大于0.999 0,重复性测试RSD小于2.8%,精密度测试RSD为0.86%~4.0%,回收率为85.2%~110.0%。结果表明本法简单高效、精密度佳、准确性好,可为水蛭药材中11种重金属元素的测定提供技术参考。

离子色谱技术在水环境中重金属污染检测中的应用

水环境中的重金属污染已成为全球关注的重大问题,准确、快速、便捷的重金属离子检测技术对于水环境保护具有重要的意义。离子色谱技术(Ion Chromatography,IC)作为一种高效的离子分析技术,其优点在于可同时对多种重金属离子进行定性定量分析,并具有高灵敏度和高精度。在本文中,我们研究了离子色谱技术在水环境中重金属污染检测的应用,对离子色谱技术的基 principle、操作步骤进行了梳理,然后重点介绍了它在检测水中重金属污染(如铅、镉、汞、铬等)方面的应用,并对比了其与传统分析方法的优势。通过案例研究,我们发现离子色谱技术在水中重金属离子检测的准确性、选择性以及分析速度等方面展现出显著的优势。本研究的结果对于理解和推广离子色谱技术在水环境重金属离子检测中的应用具有重要的科学价值和实际意义。

新型固定化铁离子亲和色谱整体柱的制备及评价

以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、回收率高、重现性好。此外,利用该整体柱实现了牛奶蛋白质酶解产物中磷酸化肽段的选择性富集。本实验研制的Fe-IMAC整体柱有望用于磷酸化蛋白质组研究。

固定化铜离子亲和膜色谱柱吸附血红蛋白的研究

将纤维素滤纸进行碱处理及环氧活化、偶联亚氨基二乙酸、固定化铜离子等处理,并将其装入自制的色谱柱管,制得固定化铜离子亲和膜色谱柱。该柱可用于吸附血红蛋白(hemoglobin,Hb),吸附率可达到90%以上。考察了上样量、pH值、温度、上样速度等因素对固定化铜离子亲和膜吸附Hb的影响。实验结果表明,固定化铜离子亲和膜色谱柱吸附血红蛋白的最佳条件为:室温下实验,缓冲体系的pH值控制在6～8,上样速度0.5～1.0mL/min,上样量为3.16～7.90mg/g。

固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及纯化铜锌超氧化物歧化酶的研究

以大孔纤维素滤纸为基质 ,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Cu2 +,装柱后制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱。对Cu/Zn SOD粗品进行了纯化研究 ,将其比活从 645U/mL提高到 6882U/mL ,纯化倍数为 1 0 7,蛋白回收率为 92 3% ,活性回收率达 985%。设计了一种解决金属离子泄露问题的方案 ,将Cu2 +泄露量降至 86μg/L。

两种固定化金属螯合复合亲和膜色谱介质制备

以纤维素滤纸为基质 ,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Cu2 +后制得了大孔纤维素亲和膜。另外 ,在活化后的膜上通过共价交联覆盖上琼脂糖 ,制得了具有类似“三明治”结构且性能优良的复合亲和膜 ,装柱后分别制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱。对两种亲和膜进行牛血清白蛋白等温吸附测定显示 ,两者的最大吸附量分别为 1 .1 7mg/cm2 和 1 .3 0mg/cm2 ,与传统的琼脂糖凝胶类介质吸附量相当 ,表明覆盖上的琼脂糖对提高吸附量有一定作用。依据实验结果 ,可初步推断普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜色谱介质 ,有望在大规模分离纯化生物大分子方面得到应用。

蛋白质在固定金属离子亲和色谱中吸附与洗脱研究进展

介绍了固定金属离子亲和色谱(IMAC)吸附蛋白质的基本原理、蛋白质吸附与解吸的影响因素以及洗脱过程中需要注意的问题,并简述了IMAC今后研究的方向。

离子色谱技术在水环境检测中的应用思考

随着工业化和城市化进程的加快,水污染问题日益严峻,对人类健康和生态环境构成了巨大威胁,所以需要对水环境进行监测。离子色谱技术作为一种高效、灵敏的分析方法,在水环境质量监测中显示出不可替代的作用。本文综合探讨了离子色谱技术的基本原理,并深入分析了其在水环境检测中的广泛应用,如常规阴阳离子、有机污染物、重金属的检测等。同时,文章也详细讨论了离子色谱技术的优势。离子色谱技术在实际应用中也存在着一些挑战和问题,例如高昂的设备与耗材成本、部分离子的检测效果不理想以及样品前处理步骤的复杂性等。针对这些问题,本研究提出了一系列改进措施,旨在进一步提升离子色谱技术在水环境监测中的效能和准确性。

金属螯合亲和色谱中固定金属与蛋白质的作用

在不同pHNaCl的磷酸缓冲体系 ,比较了牛血清蛋白 (BSA)、核糖核酸酶 (RNase)、细胞色素C(Cyt C)和溶菌酶 (Lys)在IDA裸柱和一些金属螯合柱上的保留特性 ,考察了固定金属对蛋白质保留行为的影响。指出蛋白质在强结合IDA Cu柱上的保留主要受固定金属和蛋白质间配位作用支配。在弱亲和的IDA Ni、IDA Co和IDA Zn柱上的保留主要受静电作用控制 ,配位作用为辅。讨论了金属螯合亲和色谱中影响蛋白质和金属配位的主要因素 :金属离子的电荷和半径、配位原子对中心离子外层d轨道的影响 ,以及蛋白质表面配位的组氨酸数目、离解常数和取向。影响金属螯合配体和蛋白质静电作用的主要因素为溶液的pH和蛋白质的等电点pI。

蛋白质在固定Zn^(2+)金属螯合亲和色谱中的变性热力学

在15~85℃宽温度范围,研究了蛋白质在固定Zn2+金属螯合色谱系统中的热行为和变性热力学。实验结果表明,蛋白质在色谱过程都有一个固定的热转变温度:核糖核酸酶(RNase)、α-胰凝乳蛋白酶原A(α-Chy)的热转变温度约为55℃,细胞色素C(Cyt-C)和溶菌酶(Lys)约为65℃;,热转变温度的出现标志蛋白质构象发生变化;利用Van′tHoff作图测定了蛋白质在色谱系统热变性时的标准焓变ΔH°和标准熵变ΔS°,提出用标准熵变ΔS°和自由能变ΔG°判断蛋白质构象变化;利用ΔH°-ΔS°的线性关系估算了蛋白质热变性时的补偿温度,鉴定了蛋白质各变体在金属螯合色谱中保留机理的同一性,RNase、Cyt-C、Lys和α-Chy的补偿温度分别为55℃、65.8℃、65.2℃和54.8℃;根据蛋白质热变性时的补偿温度和构象变化熵变Δ(ΔS°)的大小,讨论了蛋白质在阳离子交换色谱和固定Zn的金属螯合色谱体系中的热稳定性。实验证明,在IDA裸柱引入Zn2+后蛋白质在色谱系统中的热稳定性减小,平均补偿温度从65.3℃降低到59.7℃,而构象变化熵变的绝对值大幅度升高。

一种新型金属螯合亲和色谱固定相的制备及评价

采用溶胶-凝胶法,在正庚烷乳液中生成1.5μm的无孔脲醛树脂-二氧化锆复合微球基体,其与丙烯酸甲酯进行迈克尔加成反应后,通过亲核取代反应与螯合剂亚氨基二乙酸(IDA)键合,制成IDA-UF-ZrO2固定相,此固定相与铜离子(Ⅱ)螯合后,形成金属螯合亲和色谱固定相(Cu-IDA-UF-ZrO2).以牛血清白蛋白(BSA)为样品,考察了两种新合成的固定相的色谱性能,结果表明BSA在Cu-IDA-UF-ZrO2上的保留时间比在IDA-UF-ZrO2上的保留时间有所增加,同时BSA在Cu-IDA-UF-ZrO2上的保留主要受固定金属离子与蛋白质侧链上氨基酸间配位作用的影响.

高效离子色谱柱后衍生法测定环境水体中过渡金属离子含量

建立了可同时分析饮用水中铁、铜、镍、锌、钴、镉、锰等过渡金属离子的方法。优化后的离子色谱条件:选用Dionex IonPac CS5A色谱柱(4 mm×250 mm),以7.0 mmol/L吡啶-2,6-二羧酸+66 mmol/L KOH+74 mmol/L HCOOH+5.6 mmol/L K 2SO_(4)为淋洗液,流速为1.2 mL/min,柱温为30℃;以0.5 mmol/L 4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚+1.0 mol/L 2-二甲醇胺+0.5 mol/L氨水+0.3 mol/L NaHCO_(3)为衍生液,流速为0.7 mL/min,紫外检测器波长为520 nm。结果表明,该离子色谱柱对以上过渡金属具有很好的保留和分离效果,衍生后的紫外检测手段具有优异的灵敏度和选择性。该方法稳定性良好,连续进样5针的相对标准偏差均小于0.79%;标准曲线线性关系良好,r≥0.9988;方法检出限低,Fe 3+为0.8μg/L,Fe 2+为4μg/L,Cu 2+为0.8μg/L,Ni 2+为3μg/L,Zn 2+为2μg/L,Co 2+为0.9μg/L,Cd 2+为16μg/L,Mn 2+为6μg/L;检测结果准确,低、中、高3个水平的加标回收率均大于91.5%。该方法适用于环境水体中过渡金属离子的定量分析。

固定化金属离子亲和层析研究进展

固定化金属离子亲和层析(IMAC)作为一种新的亲和层析技术在药物,尤其是生物药物制备上已得到越来越广泛的应用。文章综述了固定化金属离子亲和层析的基本原理、构成及应用现状,对其应用的前景进行了展望。

基于离子色谱技术的岩矿中金属元素测试系统研究

离子色谱技术属于一项实用性和精确度均较高的测试技术手段,能够为地质岩矿中的金属元素测试提供有力支持。在社会科技持续进步的背景条件下进行岩矿测试时,需要遵循更加严格的规范要求,优化测量工作落实效果。为了进一步提高地质岩矿测试工作的整体精准性,利用先进的科技手段开展金属元素测试工作势在必行。鉴于此,文章从离子色谱技术的基本概念入手进行分析,在明确该技术的基本作用原理基础上,结合岩矿测试的实际内容分析技术应用方向,进而提出行之有效的技术应用优化对策。

壳聚糖固定化金属离子亲和层析法对重组乙醛脱氢酶的纯化

以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。结果表明,制备的壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,能够用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。该方法对重组ALDH的纯化倍数和回收率均高于目前的其他分离纯化方法。