固定化金属亲和层析富集麦胚蛋白金属螯合肽的研究

利用3种蛋白酶（碱性蛋白酶Alcalase 2.4L、风味蛋白酶Flavourzyme 500MG和木瓜蛋白酶Papain）分别对麦胚蛋白进行酶解,筛选金属螯合率最高的酶解产物,再利用固定化金属亲和层析富集金属螯合肽,并分析金属螯合肽的相对分子质量分布和氨基酸组成。结果表明：在Alcalase 2.4L的酶解作用下,酶解时间200 min时,酶解产物的金属螯合率达到最大值（69.62±0.96）%。以此麦胚蛋白酶解物通过固定化金属离子亲和层析富集得到的组分,相对分子质量集中在180-2 000,谷氨酸（Glu）和天冬氨酸（Asp）的含量分别高达（22.64±1.50）%和（14.93±0.24）%。

金属螯合亲和层析技术及其应用

固定化金属螯合亲和层析是一种有效的生物分子分离纯化技术,它具有配基简单、吸附量大、分离条件温和、通用强等特点。因此,其在蛋白质纯化、复性和空间定位以及酶的固定化和金属离子清除等方面具有广泛的应用。

琼脂糖-Zn(Ⅱ)亲和层析分离纯化罗非鱼水解多肽初探

以广州大学生化课题组自制琼脂糖微球为载体、环氧氯丙烷(ECH)为活化剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基、Zn(Ⅱ)为螯合金属制备琼脂糖-Zn(Ⅱ)亲和层析介质。最佳活化工艺:DMSO 6 mL、ECH 10 mL、活化温度35℃、活化时间3.0 h;最佳螯合工艺:IDA 0.9 g、反应时间4.0 h、ZnSO_4浓度0.25 mol/L,Zn^(2+)螯合量达到最大值。通过用0.05 mol/L EDTA缓冲液洗脱,有效地分离纯化罗非鱼水解多肽,得到适合与Zn(Ⅱ)螯合的目标多肽组分,并制备出多肽-Zn(Ⅱ)配合物。

壳聚糖-Zn(Ⅱ)亲和层析介质的制备及表征

以自制的壳聚糖微球为载体,环氧氯丙烷(ECH)为活化剂,亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基,Zn2+为螯合金属离子制备壳聚糖-Zn(II)亲和层析介质。最佳活化工艺:M壳聚糖(g)∶VECH(m L)为1∶4、Na OH浓度为1.2 mol/L、活化温度为50℃,活化时间为4 h,测得环氧基修饰密度达0.2472 mmol/g;最佳螯合工艺:IDA作为配基、浓度为0.6 mol/L、反应温度为70℃、反应时间为6 h,Zn Cl2作为螯合金属盐、浓度为0.1 mol/L、反应时间为3 h,Zn2+螯合量达到最大值。通过红外光谱表征,证明壳聚糖与Zn(II)发生了螯合配位反应,生成了壳聚糖-Zn(II)配合物。

重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析

目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。