固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理、环氧活化、配基偶联、固定化Cu2 + 后制得了大孔纤维素亲和膜 检验了亲和膜的流速与负压、等温吸附、保存方法及使用次数等亲和膜性能指标 结果表明

固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及纯化铜锌超氧化物歧化酶的研究

以大孔纤维素滤纸为基质 ,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Cu2 +,装柱后制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱。对Cu/Zn SOD粗品进行了纯化研究 ,将其比活从 645U/mL提高到 6882U/mL ,纯化倍数为 1 0 7,蛋白回收率为 92 3% ,活性回收率达 985%。设计了一种解决金属离子泄露问题的方案 ,将Cu2 +泄露量降至 86μg/L。

固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理、环氧活化、偶联IDA、固定化Cu++后制得大孔纤维素亲和膜。以BSA为目标蛋白 ,研究亲和膜吸附蛋白质的性能 ,对亲和膜的流速与负压、亲和膜性能的稳定性进行考察 ,并对解决金属离子泄露问题进行探讨。结果表明 ,采用普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜 。

固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理，环氧活化，配基偶联和固定化Cu2+后制得了大 孔纤维素亲和膜，检验了亲和膜的流速与负压，等温吸附，保存方法及使用次数等亲和膜性能指标，设计了一种解决金属离子泄漏问题的新方法，得到的结果明显优于传统的凝胶柱，以上结果表明，普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜色谱介质。

IDA型固定化镍离子金属螯合亲和膜色谱对人血清白蛋白的分离纯化

采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了pH对HAS吸附效果的影响。经一步纯化,商品药用HSA中的许多杂蛋白可被除去,经毛细管电泳分析,纯度与Sigma公司的电泳纯HSA相当,回收率可达85%以上。纯化蛋白液中的镍离子经过自制的N,N,N′三羧甲基乙二胺(TED)型螯合柱处理后可较好地除去。

两种固定化金属螯合复合亲和膜色谱介质制备

以纤维素滤纸为基质 ,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Cu2 +后制得了大孔纤维素亲和膜。另外 ,在活化后的膜上通过共价交联覆盖上琼脂糖 ,制得了具有类似“三明治”结构且性能优良的复合亲和膜 ,装柱后分别制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱。对两种亲和膜进行牛血清白蛋白等温吸附测定显示 ,两者的最大吸附量分别为 1 .1 7mg/cm2 和 1 .3 0mg/cm2 ,与传统的琼脂糖凝胶类介质吸附量相当 ,表明覆盖上的琼脂糖对提高吸附量有一定作用。依据实验结果 ,可初步推断普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜色谱介质 ,有望在大规模分离纯化生物大分子方面得到应用。

固定化金属亲和层析胶与亲和层析膜纯化rhMn-SOD和rhCu,Zn-SOD的比较研究

为比较固定化金属亲和层析膜与亲和层析胶的纯化效果,分别用固定化金属亲和层析胶Cu2+柱、Ni2+柱、固定化金属亲和层析膜Cu2+柱、Ni2+柱分离纯化rhCu,Zn-SOD、rhMn-SOD/24a、rhMn-SOD/28。结果表明,亲和胶与亲和膜分离SOD获得相似的纯化效果,纯化倍数均在3到5之间,亲和膜分离所得SOD比活略高于亲和胶,rhCu,Zn-SOD与Cu2+的亲和能力高于rhMn-SOD。固定化金属亲和层析膜色谱为基因工程产物的快速分离鉴定提供了一个简便的方法。

固定化金属亲和层析富集麦胚蛋白金属螯合肽的研究

利用3种蛋白酶（碱性蛋白酶Alcalase 2.4L、风味蛋白酶Flavourzyme 500MG和木瓜蛋白酶Papain）分别对麦胚蛋白进行酶解,筛选金属螯合率最高的酶解产物,再利用固定化金属亲和层析富集金属螯合肽,并分析金属螯合肽的相对分子质量分布和氨基酸组成。结果表明：在Alcalase 2.4L的酶解作用下,酶解时间200 min时,酶解产物的金属螯合率达到最大值（69.62±0.96）%。以此麦胚蛋白酶解物通过固定化金属离子亲和层析富集得到的组分,相对分子质量集中在180-2 000,谷氨酸（Glu）和天冬氨酸（Asp）的含量分别高达（22.64±1.50）%和（14.93±0.24）%。

Cu^2＋ - IDA金属螯合尼龙-壳聚糖复合膜的制备及其亲和分离性能研究

为获得既具有良好机械强度和化学稳定性又具有大量活性官能团的金属螯合亲和膜介质,以尼龙膜为基膜,采用环氧氯丙烷活化共价偶联壳聚糖,制备尼龙-壳聚糖复合膜,膜上偶联壳聚糖的含量达98.2mg·(g膜)-1,为配基的固载提供了大量活性位点。再次采用环氧氯丙烷活化复合膜,进而偶联亚氨二乙酸(IDA)、固定化Cu2+,获得金属螯合尼龙-壳聚糖复合型亲和膜,配基Cu2+固载量为5.4μmol·cm-2。以牛血清白蛋白为目标蛋白,考察亲和膜的分离性能。研究结果表明:牛血清白蛋白在膜上的吸附行为符合Langmuir吸附等温方程,膜对牛血清白蛋白具有较好的亲和吸附效果,吸附容量达1.09mg·cm-2。该膜具有较长的使用寿命并且容易再生。

金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅲ)混合酶和蛋清(壳)中的溶菌酶提取及纯化新工艺

采用亚氨二乙酸 (IDA) -Cu2 + 亲和膜分离新工艺 ,分离纯化混合酶和蛋壳中的溶菌酶 ,实验结果表明 ,亲和膜对溶菌酶的选择吸附性能良好 ,对葡萄糖氧化酶基本不吸附 ;用亲和膜直接从蛋清 (壳 )中分离提纯溶菌酶 ,通过正交实验 ,找出了最佳操作条件 ,在此条件下提取的溶菌酶纯度大于 175 0

基于金属离子螯合的压电免疫传感器新型固定化方法

提出了一种基于金属离子螯合作用的压电免疫传感器新型固定化方法.先在压电石英晶振表面沉积正丁胺等离子体聚合膜(BA-PPF),再在BA-PPF表面修饰可与金属离子螯合的氨三乙酸基团,用金属铜离子活化后,修饰了二乙三胺五乙酸基团的IgG抗体蛋白质分子即可螯合固定于BA-PPF上.将固定了抗体的压电石英传感器用于正常人免疫球蛋白IgG(NHIgG)的测定,其频率响应与NHIgG浓度在0.36～63.8μg/mL范围内存在良好的线性关系.这种新型压电免疫传感器固定化方法简单快速,具有良好的通用性.

自制纤维素金属螯合亲和膜的部分吸附性能及纯化牛血SOD

自制纤维素金属螯合亲和膜,研究亲和膜对金属离子(Cu2+,Ni2+,Fe3+)和蛋白质的吸附性能,建立一种简便实用的纯化SOD的方法.以纤维素滤纸为原料,经交联制成可螯合金属离子的纤维素亲和膜,筛选确定与亲和膜吸附量最大的金属离子,并以卵清蛋白的吸附-解吸实验考查该膜对蛋白质的吸附性能.结果,在Cu2+,Ni2+和Fe3+中,亲和膜对Cu2+的吸附量最大,多次重复实验Cu2+吸附量稳定维持在4.60×10-6mol/cm2左右.Cu2+亲和膜对生理盐水溶卵清蛋白的吸附量高于无离子水溶卵清蛋白,可达113×10-6g/cm2,但蛋白解吸率前者低于后者,表明一定浓度的NaCl有助于亲和膜对蛋白质的吸附,同时也使被吸附的蛋白的解吸率有所降低.吸附-解吸方式(静态法)分离纯化SOD,解吸样品比活达8770 U/mg,纯度为81%;吸附-洗脱方式(动态法)分离纯化SOD,穿柱流出样品比活达12418 U/mg,纯度为85%.自制纤维素亲和膜有较好的吸附性能和纯化效果,重复使用性能良好,制备和纯化过程简便易行,具有广阔应用前景.

新型生物基金属螯合亲和膜的制备及表征

以碱处理活化纤维素膜,经接枝置入环氧活性基团生成环氧化纤维素,再经亚氨基二乙酸(IDA)希夫碱反应、高碘酸钠氧化生成双醛氧化纤维素-IDA,金属离子螯合制备纤维素基金属螯合膜(Ni2+-IDA型膜)。采用傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、核磁共振(13C-NMR)表征膜的结构,利用热重分析(TG)和差示扫描量热(DSC)分析膜的热性能。结果表明,该合成路线设计合理,成功制备了一种特殊结构的新型纤维素基金属螯合膜,该膜具有良好的热稳定性。

IDA型Cu^(2+)-螯合亲和膜色谱法对牛肝过氧化氢酶纯化的研究(英文)

首次采用以改性纤维素为基质、亚氨二乙酸（ＩＤＡ）为取代配基的铜离子螯合膜色谱法对牛肝过氧化氢酶（ＢＬＣ）的分离纯化进行了研究。缓冲液的ｐＨ值对ＢＬＣ与螯合配基的结合影响显著。在选定的色谱条件下，ＢＬＣ粗酶液经ＩＤＡ型Ｃｕ２＋－螯合膜色谱柱一步纯化，比活性平均提高４．７倍，回收率为６７．７％。金属螯合膜色谱柱可用含０．２ｍｏｌ／Ｌ的咪唑或５０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的缓冲液再生，反复使用，后者比前者对柱子的再生效果更好。

金属螯合亲和层析技术及其应用

固定化金属螯合亲和层析是一种有效的生物分子分离纯化技术,它具有配基简单、吸附量大、分离条件温和、通用强等特点。因此,其在蛋白质纯化、复性和空间定位以及酶的固定化和金属离子清除等方面具有广泛的应用。

壳聚糖-Zn(Ⅱ)亲和层析介质的制备及表征

以自制的壳聚糖微球为载体,环氧氯丙烷(ECH)为活化剂,亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基,Zn2+为螯合金属离子制备壳聚糖-Zn(II)亲和层析介质。最佳活化工艺:M壳聚糖(g)∶VECH(m L)为1∶4、Na OH浓度为1.2 mol/L、活化温度为50℃,活化时间为4 h,测得环氧基修饰密度达0.2472 mmol/g;最佳螯合工艺:IDA作为配基、浓度为0.6 mol/L、反应温度为70℃、反应时间为6 h,Zn Cl2作为螯合金属盐、浓度为0.1 mol/L、反应时间为3 h,Zn2+螯合量达到最大值。通过红外光谱表征,证明壳聚糖与Zn(II)发生了螯合配位反应,生成了壳聚糖-Zn(II)配合物。

重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析

目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。