金属螯合亲和色谱固定相合成及应用进展

金属螯合亲和色谱因具有高稳定、强金属螯合性能等优点,在重金属的检测与吸附、蛋白质的识别与鉴定、分离纯化中有着重要的研究价值。自金属螯合亲和色谱概念提出以来,该技术得到了极大的发展与应用。基于目前的研究文献报道,本文综述了金属螯合亲和色谱固定相合成及应用等方面的研究进展。

基于金属离子螯合的压电免疫传感器新型固定化方法

提出了一种基于金属离子螯合作用的压电免疫传感器新型固定化方法.先在压电石英晶振表面沉积正丁胺等离子体聚合膜(BA-PPF),再在BA-PPF表面修饰可与金属离子螯合的氨三乙酸基团,用金属铜离子活化后,修饰了二乙三胺五乙酸基团的IgG抗体蛋白质分子即可螯合固定于BA-PPF上.将固定了抗体的压电石英传感器用于正常人免疫球蛋白IgG(NHIgG)的测定,其频率响应与NHIgG浓度在0.36～63.8μg/mL范围内存在良好的线性关系.这种新型压电免疫传感器固定化方法简单快速,具有良好的通用性.

固相萃取技术及固定相络合法富集环境水样中微量金属离子的思路

固相萃取(Solid Phase Extraction SPE)是一种处于迅速发展中的样品前处理新技术,SPE技术在液体试样制备中以突出的优点已成为优先考虑的方法。本文旨在介绍SPE技术,并从配合物基本理论出发,首次提出“固定相络合法”富集环境水样中微量金属离子的思路。

固定化金属离子亲和层析研究进展

固定化金属离子亲和层析(IMAC)作为一种新的亲和层析技术在药物,尤其是生物药物制备上已得到越来越广泛的应用。文章综述了固定化金属离子亲和层析的基本原理、构成及应用现状,对其应用的前景进行了展望。

固定化金属亲和层析富集麦胚蛋白金属螯合肽的研究

利用3种蛋白酶（碱性蛋白酶Alcalase 2.4L、风味蛋白酶Flavourzyme 500MG和木瓜蛋白酶Papain）分别对麦胚蛋白进行酶解,筛选金属螯合率最高的酶解产物,再利用固定化金属亲和层析富集金属螯合肽,并分析金属螯合肽的相对分子质量分布和氨基酸组成。结果表明：在Alcalase 2.4L的酶解作用下,酶解时间200 min时,酶解产物的金属螯合率达到最大值（69.62±0.96）%。以此麦胚蛋白酶解物通过固定化金属离子亲和层析富集得到的组分,相对分子质量集中在180-2 000,谷氨酸（Glu）和天冬氨酸（Asp）的含量分别高达（22.64±1.50）%和（14.93±0.24）%。

壳聚糖固定化金属离子亲和层析法对重组乙醛脱氢酶的纯化

以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。结果表明,制备的壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,能够用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。该方法对重组ALDH的纯化倍数和回收率均高于目前的其他分离纯化方法。

用涂渍聚丁二烯马来酸固定相的离子色谱分析过渡金属离子

分析过渡金属离子的传统方法是阳离子交换色谱或离子对色谱法，二价金属离子是在磺酸型阳离子交换剂色谱固定相上进行分离，用各种洗脱剂洗脱和电导检测器进行检测，但是这种检测方法对过渡金属离子不够灵敏，通常使用的方法是ＵＶ－Ｖｉｓ检测和用有吸收基团的进行柱前或柱后衍生物，这样中以得到较好的分离度和灵敏度，但这一方法繁琐复杂。本文阐述了一种在涂渍聚丁二烯马来酸的固定相上分离过渡金属的方法。

四种金属离子亲和层析纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的效果比较

目的 选择固相金属亲和层析柱的金属离子,以优化分离纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的条件。方法 在同一试验条件下用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白。结果 包涵体经不同离子柱层析时目的蛋白的收获率、纯度、洗脱条件各异。结论 镍离子柱纯化效果最佳。

4种金属离子亲和层析纯化重组类人胶原蛋白的效果比较

对利用金属离子亲和层析纯化重组类人胶原蛋白过程中使用的金属离子进行了比较,从而对分离纯化的条件进行优化。在相同实验条件下,用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白。结果显示,经4种金属离子柱纯化后镍柱的总蛋白收获率最高,铜柱与锌柱居中,钙柱最低;而柱保留时间则为锌柱最高(12.38 m in),钙柱最低(8.25 m in);钙柱洗脱时所需咪唑解离初始浓度最低(100 mmol/L),锌柱最高(200 mmol/L);对SDS-PAGE电泳图进行分析得纯化后类人胶原蛋白的纯度分别为:镍柱82.8%,铜柱83.4%,锌柱96.2%,钙柱94.3%。由此可见锌柱对目标蛋白的亲和力最高,且纯化后类人胶原蛋白的纯度也最高。因此,确定锌离子作为亲和层析纯化重组类人胶原蛋白的金属离子。

聚苯乙烯硫代氨基脲螯合树脂的制备及其对重金属离子的吸附性能研究

以苯乙烯为单体采用分散聚合法合成聚苯乙烯微球,1,4-二氯甲氧基丁烷与聚苯乙烯反应得到氯甲基化聚苯乙烯,用氯甲基化聚苯乙烯与硫代氨基脲反应得到的聚苯乙烯硫代氨基脲螯合树脂。采用红外光谱法、扫描电镜、X射线光电子能谱对其结构及元素组成进行分析。考察了聚苯乙烯硫代氨基脲螯合树脂对Ag+、Cu2+、Pb2+和Cr3+重金属离子的吸附性能。聚苯乙烯硫代氨基脲螯合树脂对Ag+、Cu2+、Pb2+和Cr3+的吸附容量分别为16.38 mg/g、15.25 mg/g、13.69 mg/g和13.12 mg/g。

固定化镍离子亲和层析胶的制备及其性能鉴定

以Sepharose 6B为原料 ,在强碱性条件下用环氧氯丙烷活化 ,再与亚氨基二乙酸 (IDA)的钠盐溶液反应 ,在活化好的胶颗粒表面接上很多手臂IDA ;最后与硫酸镍溶液反应 ,使手臂IDA与Ni2 +发生螯合反应 ,即得到固定化Ni2 +亲和层析胶 (Ni2 + IDA) .采用原子吸收法及从大肠杆菌表达产物中纯化重组人B淋巴细胞刺激因子 (hBLyS)等方法检测制备胶的理化指标和纯化蛋白质的性能 .结果表明用此法制得的亲和胶与相应商品胶的性能完全一致 ,而成本却不到商品胶的十分之一 .

金属螯合亲和层析技术及其应用

固定化金属螯合亲和层析是一种有效的生物分子分离纯化技术,它具有配基简单、吸附量大、分离条件温和、通用强等特点。因此,其在蛋白质纯化、复性和空间定位以及酶的固定化和金属离子清除等方面具有广泛的应用。

基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集

采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。

固定化金属亲和层析介质在蛋白纯化中的应用进展

随着生物制药技术的发展,生物制品的生产规模日益扩大,对下游分离纯化技术也提出新的挑战,为满足高效获得符合要求的产品这一需求,各种快速分离纯化蛋白的技术应运而生,其中固定化金属亲和层析色谱在蛋白纯化中的应用取得了快速发展。固定化金属亲和层析具有配基选择简单且稳定性高、特异性好、蛋白结合载量高、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、制备工艺简单、造价低等多项优点,逐渐成为蛋白质分离纯化及多个相关领域中最有效的分离技术之一。本文对固定化金属亲和色谱的工作原理、构成、应用现状进行了阐述,其中主要对蛋白载量和金属离子泄露问题进行概括,对螯合层析介质在蛋白质纯化中的前景进行了展望。

螯合离子色谱的研究进展

讨论了近 10年来发展较为活跃的螯合离子色谱 (CIC)的原理及其系统组成和分析流程 ,高效螯合离子色谱(HPCIC)的原理 ,高效螯合固定相的类型、应用范围及优缺点等 ,其中包括化学键合、永久涂敷或动态涂敷的高效螯合固定相 ,引用文献 5 3篇。

壳聚糖改性纸色谱法分离金属离子的研究

采用壳聚糖醋酸溶液为固定相的纸色谱法分离重金属离子,探讨了壳聚糖溶液浓度和醋酸溶液浓度对分离效果的影响,用正交法试验建立了分离Fe3+,Co2+,Ni2+,Cu2+离子的最佳固定相的配比方案.该方案分离效果及重现性好,斑点集中、清晰.

高效液相色谱手性拆分中的配体交换色谱手性固定相

综述了高效液相色谱配体交换色谱手性固定相的发展、制备及其在手性拆分中的应用,讨论了洗速、进样量、中心金属离子及其浓度、流动相pH值、柱温、有机改性剂等对对映体分离的影响,阐述了对手性识别机理的认识.

S-烃基异硫脲盐酸盐反相纸层析分离稀土元素的研究

用卤代烃和硫脲合成了Ｓ－ 十六烷基异硫脲盐酸盐和Ｓ－ 苄基异硫脲盐酸盐，通过元素分析、红外光谱等确定了其组成和结构。以它们的乙醇溶液为固定相，以不同浓度的盐酸溶液为展开剂，用反相纸层析法对１１ 种稀土离子的萃取行为进行了研究，并对Ｌａ－ Ｔｂ，Ｅｕ－ Ｐｒ 等１２ 组稀土离子进行了纸上层析分离。

基于液相色谱-串联质谱技术的磷酸化蛋白质组学分析

本文运用稳定同位素双甲基化标记技术、固定相金属离子螯合层析（IMAC）技术并结合液相色谱-串联质谱法研究了仙台病毒感染引起的宿主细胞磷酸化蛋白质组变化。实验发现定量的4 289个磷酸化肽段有~20%的蛋白质磷酸化位点发生了显著变化;通路富集分析表明哺乳动物雷帕毒素靶蛋白（mTOR）通路和剪接体（Spliceosome）通路可能参与宿主细胞对病毒的应答;通过对显著变化磷酸化肽段进行基序分析,发现了9个代表性的磷酸化修饰位点基序。本研究方法对于深入解析抗病毒天然免疫信号通路提供了新线索。