新鲜肿瘤标本活细胞与固定细胞的DNA含量分析比较

目的:建立一种以新鲜细胞进行临床肿瘤DNA含量分析的方法。方法:血液肿瘤取肝素抗凝外固血或骨髓样本,用淋巴细胞分层液分离纯化单个核细胞;实体瘤组织则用机械法制成单细胞悬液。将细胞分成两份,一份酒精固定过夜,流式细胞术常规方法测定DNA含量,另一份直接用PIPESpiperazineNNbis2ethanesulfonicaciddisodiumsalt缓冲液配制的碘化丙锭(propidiumiodidePI)染色,以流式细胞术进行DNA含量测定,并与同期固定细胞的DNA含量检测结果进行比较。结果:同类型的肿瘤细胞,其固定前后G0/G1期细胞峰的变异系数(coefficientofvariationCV)没有明显差异(t检验,P>0.05)。重复实验结果显示,新鲜细胞DNA含量分析结果稳定。结论:用PIPES缓冲液配制的PI染液染色新鲜细胞,可以对临床肿瘤的细胞增殖状况和DNA倍性进行分析。

采用微囊化固定细胞进行木糖醇发酵的培养基优化

将微胶囊技术用于木糖醇的高细胞密度发酵 ,采用均匀设计和多元逐步回归方法对其发酵培养基进行优化研究 ,得到仅含 6 .8g/L酵母浸膏的优化培养基配方 ,与文献中针对游离发酵的优化培养基相比 ,新的培养基配方使木糖转化率从 82 .9%提高到 88.0 %。

用western blotting方法检测乙醇固定细胞中细胞周期素的表达

用 western blotting法测定乙醇固定细胞中细胞周期素 (cyclin)的表达情况 ,探索 western blotting和流式细胞仪对固定细胞在流式细胞术分选前或分选后对同批标本进行蛋白同步分析的可行性。采用对数生长期的 Molt- 4细胞 ,经两种常规固定方法固定后 ,用 western blotting方法检测 cyclin A、B1 、D和 E的表达。另取乙醇固定经流式细胞仪分选的 G1 期和 G2 / M期细胞裂解后 ,用 western blotting方法检测不同时相细胞中 cyclin B1 的表达。结果显示从固定细胞中提取的蛋白经 western blotting检测可得到清晰且分子量正确的条带 ,两种不同方法固定的细胞中检测到的 cyclins表达未见明显差异。乙醇固定细胞经分选后提取蛋白行 western blotting检测可见 G2 / M期细胞的 cyclin B1 有明显表达而 G1 期细胞不明显。细胞进行固定、洗涤、染色和分选等处理后不影响 western blotting对其 cyclins表达的分析 ,说明用 western

使用经固定细胞的DNA检测Prader-Willi综合征

目的探讨以外周血染色体检查或荧光原位杂交(FISH)检查剩余的固定细胞作为DNA来源,采用甲基化特异性(MS)聚合酶链反应(PCR)与甲基化特异性多重连接探针扩增(MS-MLPA)方法进行Prader-Willi综合征(PWS)分子检测的可行性,为采用少量全血液样本同时开展染色体、FISH和分子检测奠定基础。方法将13例受试样本分为正常对照组(3例)、确诊组(2例)和疑似组(8例)3个组。将所有的冻存固定细胞进行离心,弃固定液,采用基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取,13例PWS样本同时采用MS-PCR与MS-MLPA进行检测。结果 13例DNA样本的A260/A280比值平均为1.94±0.1、浓度平均为(64.0±10)ng/μL、片段大小均在10 kb以上;MS-PCR检测发现正常对照组父源与母源条带均存在,确诊组仅存在母源条带、父源条带缺失,疑似组父源与母源条带均存在;MS-MLPA结果表明除确诊组2例提示为父源缺失型PWS外,其余2个组结果都提示为正常。结论来源于固定细胞的基因组DNA在纯度、浓度及完整性方面均可满足MS-PCR以及MS-MLPA检测的实验要求,可用于PWS临床分子检测及其相关实验。

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验鉴别诊断猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的感染

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对来自丹麦猪的１８０份血清进行了猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）和猪呼吸道冠状病毒（ＰＲＣＶ）感染的鉴别诊断，共检出了ＰＲＣＶ抗体阳性血清１０７份（５９．４％），ＴＧＥＶ抗体阳性血清０份。同时也检测了一些来自国内不同ＴＧＥＶ感染类型的猪场血清。该鉴别诊断方法在我国的建立和应用为从ＰＲＣＶ阳性国家进口猪的ＴＧＥ的检疫提供了一条有效途径。

应用固定细胞法提高厌氧流化床的处理效率

一、前言厌氧法处理高浓度有机废水,既可获得甲烷燃料,又可因污泥量少而节约污泥处理和处置的费用。但厌氧法的反应速率慢,反应器的容积大,因此,提高厌氧反应器中的生物量浓度和生物活性是今后研究的方向。 70年代后期,分子遗传学的重大突破,促进了生物工艺学的发展。到80年代,固定化方法开始发展,主要用在固定人类器官和其它动植物,以取得“长生不老”。在化学工业中,研究了用作有机催化剂的固定化生物酶,并在此基础上,发展了固定细胞。固定细胞比一般生物细胞的寿命长,在一般废水生物处理中。

纤维固定细胞反应器在食醋生产中的应用

为了改善速酿食醋产品风味，采用自流或纤维固定细胞发酵装置生产食醋，各项技术指标都好于速酿食醋。

高产果糖基转移酶的黑曲霉全细胞固定化条件优化

采用包埋法固定化高产果糖基转移酶的黑曲霉全细胞,以海藻酸钠-壳聚糖为载体,分别通过单因素和正交试验优化,获得最佳固定化条件。单因素优化试验结果表明:海藻酸钠最适浓度为2%,菌体包埋量最适为150 g·L^(−1),壳聚糖和CaCl_(2)最适浓度均为4%。正交试验结果表明:海藻酸钠浓度为3%,菌体包埋量为200 g·L^(−1),壳聚糖浓度5%,CaCl_(2)浓度为3%时,酶活回收率可达到最佳的74.7%。验证试验表明该固定化细胞连续进行7个批次合成低聚果糖的催化,仍有96.85%的残余活力,具备很好的应用潜力,为合成低聚果糖提供了新的技术路线。

固定化米根霉全细胞催化α-蒎烯环氧化反应

为推动α-蒎烯的绿色环氧化,同时降低反应成本并提高催化剂的重用性,实验研究了使用固定化全细胞Rhizopus oryzae CGMCC 3.5040催化α-蒎烯环氧化反应的可行性,并采用单因素实验法对反应条件进行优化。结果表明:150 mg的固定化细胞添加量,有机相与30%H_(2)O2溶液的体积比为3∶1,1.5 mmol的辛酸,反应8 h后,α-蒎烯的转化率可达到(99.7±0.1)%,2,3-环氧蒎烷的收率为(95.1±1.1)%。此外,对固定化全细胞催化剂进行重复利用,发现使用甲苯作为清洗剂可以有效保持催化剂的稳定性,催化剂在循环使用7次后仍能保留75.0%以上的转化率。这项研究为环境友好的催化方法提供了一种新思路,也为工业上的化学合成提供了一种新的选择。

不同固定方式对细胞蜡块影响的探讨

脱落细胞学检查是鉴别良恶性胸腹腔积液常用的方法,但由于常规的细胞学涂片存在细胞量少、细胞退变等缺点导致细胞学诊断受到较大的限制[1]。随着细胞病理学技术的发展,细胞蜡块被广泛应用于常规病理学技术中,将胸腹腔积液离心制成细胞蜡块后,可以与常规组织一样进行免疫组织化学及分子检测,不但可提高肿瘤细胞阳性诊断率,同时还可以鉴别细胞良恶性及确定恶性细胞来源[2]。

从固定的细胞和组织中分离DNA研究人tk基因多态性

本文采用乙醇:冰醋酸(3:1)和甲醇:冰醋酸(3:1)两种固定液固定人的细胞和组织,时间从几天至几周不等,从中抽提DNA,并用限制性内切酶酶切后作Southerr印迹杂交研究人的tK基因的RFLP,探针为pHK1.25,得到了清晰的杂交带,与未固定材料的杂交带型完全相同。26名汉族人员中tk基因的KPnI限制性片段为3.1kb和2.6kb,频率分别是0.235和0.765,也与用未固定材料研究的结果一致。这种固定后抽提的方法有利于保存和采集DNA样品,对于从边远地区采集DNA样品进行分子遗传学研究提供了一个便利可行的研究方法。

固定化细胞技术在废水处理中运用研究

立足于固定化细胞技术特点,深入分析技术要点,围绕吸附技术、共价结合技术、交联技术、包埋技术予以阐述,并结合实例应用成果,归纳该项技术在有机废水、含氮废水、重金属废水等场景中的运用方法,充分展现技术价值,为废水净化工作的开展提供技术指引。

一种固定化细胞流化床和活性炭吸附床组合工艺处理低浓度电子废水的实验研究

本实验研究采用固定化细胞流化床和活性炭吸附床组合工艺用于处理含四甲基氢氧化铵污染物的低浓度电子废水。通过菌株筛选获得的四甲基氢氧化铵降解菌和半导体工厂电子废水处理系统活性污泥被置于聚乙二醇甲基丙烯酸酯载体中,在载体填充率60%(v/v),降解菌和活性污泥的生物量比率2∶3(w/w),总生物量7000mg/L的条件下,处理后出水的总溶解有机碳和四甲基氢氧化铵的浓度为最低,分别是1mg/L和0.2mg/L。之后再通过颗粒活性炭深度吸附处理,废水处理后最终出水的总溶解有机碳和四甲基氢氧化铵的浓度分别为1mg/L以下和接近0mg/L。

固定化细胞三相环流反应器处理含酚废水的宏观动力学

用国产卡拉胶固定化热带假丝酵母菌,在喷射环流反应器(JLR)中处理含酚废水,较活性污泥曝气池容积负荷提高3.5倍以上。动力学研究结果表明,苯酚降解规律受喷射环流反应器操作条件的影响;苯酚比降解速度对苯酚是零级,对氧是一级。根据质量守恒原理,考虑液-固传质,失活壳和内扩散的影响,推导出氧消耗的宏观动力学模型。基于本文实验数据,对模型参数进行估计,将模型值与实验值进行比较,结果表明,所得宏观动力学模型是令人满意的。

固定化细胞技术及其在药学领域中的应用

一、前言从六十年代开始,固定化酶技术迅速发展,在很大程度上改变了酶工程的面貌。七十年代以后,作为酶源的微生物菌体本身的固定化,即固定化微生物细胞又引起了各国学者极大的兴趣。固定化细胞因其制备简单。

固定化细胞在废水处理中的应用及前景

综述了固定化微生物在水处理中的应用发展过程和固定化细胞技术在废水生物处理中的应用,包括去除BOD物质、硝化-脱氮、酚、氰的降解、重金属离子的去除或回收以及印染废水的脱色处理等。最后,对固定化细胞应用于废水生物处理的前景及存在的问题进行了评述。

几种固定化细胞载体的比较

以琼脂、明胶、海藻酸钙、聚乙烯醇和丙烯酰铵凝胶为固定化细胞的包埋固定载体,对其主要包埋条件和性能进行了初步的研究比较。其结果表明,海藻酸钙和聚乙烯醇与琼脂、明胶和丙烯酰胺凝胶相比较,具机械强度较高、传质性能较好,生物毒性较低和固定操作容易等优点,为较好的固定化细胞载体,值得进一步深入研究。

聚乙烯醇固定化混合细菌细胞对印染废水脱色的研究

应用聚乙烯醇(PVA)为载体固定化混合细菌细胞以PVA浓度为12％(w/v),细胞浓度为2％(w/v)最好,pH对固定化操作过程影响不大。固定化细胞对印染废水的脱色活性与其自然细胞相似,最适温度为30—40℃,最适pH为7.0;在pH 6.0—8.0温度25—40℃范围内都具有较高的脱色活性,以及好的热稳定性;在连续一个月的印染废水脱色试验中,停留时间小于3.0h,脱色率均可维持在70—80％。

固定化细胞流化床反应器处理难降解有机物喹啉的试验研究

采用PVA 硼酸 纱布法将筛选得到的能够利用喹啉作为唯一碳源、氮源和能源的皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapickettii)固定化 ,将固定化细胞投加到流化床反应器中处理不同浓度的喹啉废水 ,喹啉初始浓度为 1 0 0、350和 50 0mg/L时 ,喹啉完全去除所需时间分别为 2 5、6和 1 2h .动力学试验结果表明 ,固定化细胞流化床反应器内喹啉的降解过程遵循零级反应动力学 .利用固定化细胞流化床反应器连续处理不同浓度的喹啉废水 ,考察了不同水力停留时间 (稀释率 )对处理效果的影响及流化床反应器耐冲击负荷的能力 .