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固定金属离子亲和膜分离技术(Ⅰ)方法和原理 被引量:7
1
作者 柴红 陈欢林 刘茉娥 《膜科学与技术》 CAS CSCD 1999年第4期23-28,共6页
固定金属离子亲和膜是近几年发展起来的纯化生物分子的新技术,综述了31 篇文献,概述了固定金属离子亲和膜分离的基本原理,探讨了螯合剂的选择原则,研究了金属离子与蛋白质的作用机理.
关键词 亲和膜 固定金属离子 蛋白 纯化 膜分离 色谱
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固定金属离子亲和膜分离技术(Ⅱ)研究进展和应用前景 被引量:3
2
作者 柴红 陈欢林 刘茉娥 《膜科学与技术》 CAS CSCD 1999年第5期13-18,共6页
概述了亲和膜及其组件的研究现状以及固定金属离子亲和膜分离技术的研究进展指出了该技术的应用前景.
关键词 亲和膜 固定金属离子 蛋白 纯化 膜分离
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等离子体引发聚合固定金属离子亲和膜的制备及其吸附性能 被引量:2
3
作者 柴红 陈欢林 徐立 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第2期162-166,共5页
An immobilized metal ion affinity membrane was prepared by plasma-induced graft polymerization of glycidyl methacrylate (GMA) onto a porous polypropylene(PP), followed by chemical conversion of epoxide group of the GM... An immobilized metal ion affinity membrane was prepared by plasma-induced graft polymerization of glycidyl methacrylate (GMA) onto a porous polypropylene(PP), followed by chemical conversion of epoxide group of the GMA grafted membrane into an iminodiacetate(IDA) group, and chelation with copper ion. The effect of plasma discharge condition, GMA monomer concentration and grafting time on the degree of GMA grafting was studied and the optimum condition for plasma treatment of membrane was:10 W for 30 s, and that for grafting is 30 h at a concentration of 1 mol· L -1 GMA.Under this condition, a maximum grafting degree of 13.28% was obtained. The spectra of IR and XPS shows that GMA and IDA had been attached to the PP membrane after grafting and coupling. The nonselective adsorption of PP membrane had been significantly reduced after the H 2SO 4 treatment of the IDA coupled membrane. Finally, the isotherm adsorption of bovine serum albumin (BSA) on the immobilized metal ion affinity membrane was measured and the adsorption capacity of BSA increased with the degree of grafting. When BSA concentration was 1080 μg·ml -1 ,the adsorption ability of the affinity membrane with a grafting degree of 5.3% was nearly twice as much as that membrane with a grafting degree of 4.66%. 展开更多
关键词 离子体引发聚合 固定金属离子 亲和膜 固定离子 膜分离 牛血清白蛋白 制备 吸附性能
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蛋白质在固定金属离子亲和色谱中吸附与洗脱研究进展 被引量:3
4
作者 杜涛 赵胜利 +2 位作者 文九巴 李董轩 朱金娥 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第7期4-7,共4页
介绍了固定金属离子亲和色谱(IMAC)吸附蛋白质的基本原理、蛋白质吸附与解吸的影响因素以及洗脱过程中需要注意的问题,并简述了IMAC今后研究的方向。
关键词 固定金属离子亲和色谱 蛋白质 吸附 洗脱
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固定金属离子亲和色谱——蛋白质分离的方法、原理、特性和应用 被引量:21
5
作者 李蓉 陈国亮 赵文明 《化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期352-360,共9页
介绍了固定金属离子亲和色谱法(IMAC)的方法原理、金属螯合柱的制备、固定金属离子与蛋白质的相互作用以及影响这些作用的因素、不同色谱条件下各种作用力对蛋白质保留值的贡献、蛋白质的洗脱原理和IMAC在蛋白质分离纯化中的应用,论述了... 介绍了固定金属离子亲和色谱法(IMAC)的方法原理、金属螯合柱的制备、固定金属离子与蛋白质的相互作用以及影响这些作用的因素、不同色谱条件下各种作用力对蛋白质保留值的贡献、蛋白质的洗脱原理和IMAC在蛋白质分离纯化中的应用,论述了IMAC的特点、不足、克服的方法和今后应解决的问题。 展开更多
关键词 固定金属离子 蛋白质分离 应用 IMAC 亲和色谱法 方法原理 金属螯合 相互作用 色谱条件 分离纯化 保留值 作用力
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磁性脂质微粒固定化金属离子的制备及其吸附特性研究
6
作者 蒙华琳 林春玲 +2 位作者 陆苑 陆玉婷 伍善广 《广州化工》 CAS 2021年第13期56-58,共3页
以磷脂含量及金属离子吸附能力为指标,正交试验优化磁性脂质微粒固定化金属离子(NS-NI^(2+))的制备工艺,考察NS-NI^(2+)对长蛇鲻蛋白酶解物5 kDa渗透液(LFPH-I)的吸附特性。结果表明,NS-NI^(2+)最优制备工艺为:磷脂0.4 g,N-十六烷基亚... 以磷脂含量及金属离子吸附能力为指标,正交试验优化磁性脂质微粒固定化金属离子(NS-NI^(2+))的制备工艺,考察NS-NI^(2+)对长蛇鲻蛋白酶解物5 kDa渗透液(LFPH-I)的吸附特性。结果表明,NS-NI^(2+)最优制备工艺为:磷脂0.4 g,N-十六烷基亚氨基二乙酸钠(HIDA)0.25 g,搅拌速度800 rpm,硬脂酸2.0 g,聚乙烯醇(PVA)浓度2%,Fe 3O 40.33 g。NS-NI^(2+)对长蛇鲻蛋白酶解物5 kDa渗透液(LFPH-I)吸附动力学符合准二级动力学模型。 展开更多
关键词 磁性脂质微粒固定金属离子 工艺优化 吸附 长蛇鲻蛋白酶解物
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壳聚糖固定化金属离子亲和层析法对重组乙醛脱氢酶的纯化 被引量:1
7
作者 包海生 高秀峰 +1 位作者 郑雪妮 李永生 《酿酒科技》 北大核心 2012年第2期27-29,共3页
以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。... 以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。结果表明,制备的壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,能够用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。该方法对重组ALDH的纯化倍数和回收率均高于目前的其他分离纯化方法。 展开更多
关键词 壳聚糖 固定金属离子亲和层析 基因工程 乙醛脱氢酶 组氨酸标签 纯化
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固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子的制备及其用于磷酸化蛋白免疫印迹标记 被引量:1
8
作者 毛雨晓 郑蒙蒙 +2 位作者 刘桂真 安保礼 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期384-390,共7页
发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO_(2))球形纳... 发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO_(2))球形纳米粒子,粒子平均粒径为60 nm。然后通过共聚反应在FITC@SiO_(2)纳米粒子表面生成一层聚合物用于保护纳米粒子,并引入N,N-(双羧甲基)-L-赖氨酸功能基团用于螯合金属离子,从而实现固定化金属离子亲和作用。以α-酪蛋白作为实验模型,用高效液相色谱-质谱研究了螯合不同金属离子的发光纳米粒子对磷酸化蛋白的识别作用。结果表明,螯合了Ti^(4+)金属离子的发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子对α-酪蛋白酶解液中的磷酸化肽段的富集作用最强。利用这种发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子对磷酸化肽段的特异性识别性能,可用于Western Blot实验中标记磷酸化蛋白的条带。结果显示,α-酪蛋白的电泳条带可以被亲和发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子标记,而作为对照的牛血清白蛋白则没有被标记。 展开更多
关键词 免疫印迹 固定金属离子亲和 发光二氧化硅纳米粒子 磷酸化蛋白标记
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基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集 被引量:3
9
作者 申惠莲 卡哈尔.阿里木 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期334-338,共5页
采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click... 采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。 展开更多
关键词 天冬氨酸 固相萃取 固定金属离子亲和色谱 磷酸化肽 富集
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红砖烧成对污泥原料中重金属离子固化的研究 被引量:5
10
作者 刘海弟 孙鲁强 +2 位作者 李伟曼 陈运法 党小庆 《砖瓦》 2021年第8期21-22,25,共3页
研究了关中地区某砖厂的制砖原料(黏土、煤矸石、污泥)和成品红砖中的重金属离子含量,同时利用水浸出和酸浸出的方法表征了污泥和红砖中重金属离子的耐浸出效果,研究发现:污泥中的重金属离子很容易被水浸出,而红砖的烧制过程则将污泥中... 研究了关中地区某砖厂的制砖原料(黏土、煤矸石、污泥)和成品红砖中的重金属离子含量,同时利用水浸出和酸浸出的方法表征了污泥和红砖中重金属离子的耐浸出效果,研究发现:污泥中的重金属离子很容易被水浸出,而红砖的烧制过程则将污泥中重金属离子成功固定于红砖当中,使之可以成功抵御水的浸出,即使在酸性条件下也仅有少量浸出。 展开更多
关键词 烧结 污泥 金属离子固定 浸出
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新型固定化铁离子亲和色谱整体柱的制备及评价 被引量:1
11
作者 张丽媛 王晖 +3 位作者 梁振 单亦初 张丽华 张玉奎 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第5期659-662,共4页
以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、... 以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、回收率高、重现性好。此外,利用该整体柱实现了牛奶蛋白质酶解产物中磷酸化肽段的选择性富集。本实验研制的Fe-IMAC整体柱有望用于磷酸化蛋白质组研究。 展开更多
关键词 固定金属离子亲和色谱 磷酸化肽 选择性富集 整体柱
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铜离子固定金属亲和色谱在生物大分子中的应用 被引量:3
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作者 王燕 李蓉 +1 位作者 陈国亮 王小刚 《化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期838-845,共8页
铜离子固定金属亲和色谱作为一种有效的分析方法,已普遍应用于生物大分子的分离与纯化。本文从理论和应用两个方面就新型基质、螯合配体、色谱动力学、联用技术以及蛋白质分离纯化、复性等方面进行了评述。
关键词 离子固定金属亲和色谱 生物大分子 螯合配体 色谱动力学
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热解油基钻屑/橘皮生物炭钝化修复铜铅污染土壤 被引量:1
13
作者 刘向明 邓小刚 +3 位作者 徐倩霞 罗斌 邱海燕 兰贵红 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第10期2286-2293,共8页
将热解油基钻屑(OBDC)/橘皮(OB)生物炭(OBDCs-OB)加入到Cu(Ⅱ)和Pb(Ⅱ)污染土壤中进行为期83 d的钝化修复实验,探究OBDCs-OB用于钝化修复铜铅污染土壤的效果及其对土壤微生物的影响。结果表明,OBDCs-OB表面具有—OH及—COOH等官能团、... 将热解油基钻屑(OBDC)/橘皮(OB)生物炭(OBDCs-OB)加入到Cu(Ⅱ)和Pb(Ⅱ)污染土壤中进行为期83 d的钝化修复实验,探究OBDCs-OB用于钝化修复铜铅污染土壤的效果及其对土壤微生物的影响。结果表明,OBDCs-OB表面具有—OH及—COOH等官能团、碳酸盐岩和黏土矿物等矿物组成以及多孔结构,可作为吸附剂使用;对比空白土壤,加入OBDCs-OB后,土壤阳离子交换容量(CEC)增加18.29 cmol/kg,维持pH在6.80;土壤中可酸溶态Cu(Ⅱ)和Pb(Ⅱ)含量分别降低18.21%和20.07%;Cu(Ⅱ)和Pb(Ⅱ)的潜在浸出毒性分别降低52.8%和92.8%,有效钝化了Cu(Ⅱ)和Pb(Ⅱ);土壤微生物总数最大值为8.6×10^(10)cfu/g,土壤脱氢酶与脲酶含量最大值为127.10μgTPE/(g·6 h)和167.10 mg_(NH_(3)-N)/(kg·24 h),增加了土壤微生物群落多样性和丰富度,可促进土壤微生物生长。 展开更多
关键词 热解油基钻屑 金属离子固定 微生物群落结构 土壤修复 环境保护
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mPEG修饰固定化金属离子介质的制备及应用研究 被引量:2
14
作者 何跃文 孙丽霞 +5 位作者 廖丹葵 周利琴 吴小园 张茹 罗爱萍 黄彦杰 《食品科技》 CAS 北大核心 2015年第10期221-224,共4页
固定化金属离子亲和层析(IMAC)在生物分离中得到广泛的应用,但介质存在着较强的非特异性吸附,导致亲和介质分离效率下降。为减少IMAC的非特异性吸附,选用聚乙二醇单甲醚5000(m PEG 5000)为原料,经醛基化后修饰磁性壳聚糖微球固定化Cu2+... 固定化金属离子亲和层析(IMAC)在生物分离中得到广泛的应用,但介质存在着较强的非特异性吸附,导致亲和介质分离效率下降。为减少IMAC的非特异性吸附,选用聚乙二醇单甲醚5000(m PEG 5000)为原料,经醛基化后修饰磁性壳聚糖微球固定化Cu2+亲和介质(MCS@Cu2+),得到m PEG修饰固定化Cu2+亲和介质(m PEG@MCS@Cu2+)。以牛血清白蛋白(BSA)作为大分子模型,以修饰的亲和介质对BSA吸附阻拒率为指标,优化了m PEG修饰MCS@Cu2+的工艺条件。结果表明:在反应温度为40℃、反应时间为20 h、n-CHO:n-NH2为4:1时,在m PEG@MCS@Cu2+上修饰的m PEG含量最大为12.5%,与MCS@Cu2+相比,修饰介质对BSA吸附阻拒率可达到37.4%。说明经m PEG修饰的MCS@Cu2+亲和介质在应用于富集活性分子时,可有效减少大分子非特异性吸附,提高IMAC分离效率。 展开更多
关键词 MPEG 固定金属离子 修饰
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固定化金属离子亲和色谱研究进展 被引量:4
15
作者 韩彬 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第22期92-100,共9页
固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具... 固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具有亲和选择性高、生物兼容性好、可逆再生等优势,迄今已发展了40余年,广泛应用于靶分子的特异性富集、分离与纯化,本文综述了近3年固定化金属离子亲和色谱纳米材料、微球色谱基质、棉纤维、分子印迹材料、整体材料、共价有机骨架等方面的研究进展。 展开更多
关键词 固定金属离子亲和色谱 富集 纯化 材料
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基于MALDI-TOF MS的串联富集策略在磷酸化蛋白组学中的应用 被引量:5
16
作者 张传静 吴婷 +2 位作者 任红鑫 张玲帆 杜一平 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1061-1068,共8页
提出一种除盐-富集串联用于磷酸肽富集研究的思路。选用C18柱和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料进行脱盐实验,以制备的基于聚合物基体螯合Fe3+的亲和色谱材料为富集材料。将直接富集和串联策略应用到标准品和血清中,研究结果表明,该富集材料具... 提出一种除盐-富集串联用于磷酸肽富集研究的思路。选用C18柱和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料进行脱盐实验,以制备的基于聚合物基体螯合Fe3+的亲和色谱材料为富集材料。将直接富集和串联策略应用到标准品和血清中,研究结果表明,该富集材料具有高选择性和高灵敏度(1.6 fmol),铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料前提下的串联策略能明显降低样品的复杂性。相比直接富集方法,能够提高磷酸化肽的覆盖率。 展开更多
关键词 脱盐 固定金属离子亲和色谱 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 磷酸肽 串联富集
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蛋白折叠液相色谱法复性和纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞集落刺激因子 被引量:9
17
作者 王超展 王骊丽 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期514-517,共4页
用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线... 用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线性梯度洗脱rhG-CSF。该法仅通过一步PFLC分离,减少了复性过程中rhG-CSF的聚集,复性后的rhG-CSF的比活性为1.8×108IU/mg,纯度为97%,质量回收率为32%。 展开更多
关键词 固定金属离子亲和色谱 蛋白折叠 纯化 重组人粒细胞集落刺激因子 大肠杆菌
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一种双水相亲和分配配基的制备过程优化——亚氨基二乙酸-聚乙二醇 被引量:3
18
作者 文禹撷 林东强 +1 位作者 陆瑾 姚善泾 《化学反应工程与工艺》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期129-134,共6页
 考察了不同亚氨基二乙酸(IDA)取代度的亚氨基二乙酸-聚乙二醇(IDA-PEG)的制备,并进行了条件优化(BF3浓度,NaOH浓度,反应时间,IDA结合条件等)。通过控制环氧氯丙烷与聚乙二醇的摩尔配比,得到了不同Cu( )含量的固定化金属亲和配基:Cu( )...  考察了不同亚氨基二乙酸(IDA)取代度的亚氨基二乙酸-聚乙二醇(IDA-PEG)的制备,并进行了条件优化(BF3浓度,NaOH浓度,反应时间,IDA结合条件等)。通过控制环氧氯丙烷与聚乙二醇的摩尔配比,得到了不同Cu( )含量的固定化金属亲和配基:Cu( )-IDA-PEG(A)(0.24molCu2+/molPEG)、Cu( )-IDA-PEG(B)(0.51molCu2+/molPEG)、Cu( )-IDA-PEG(C)(0.75molCu2+/molPEG),并初步探讨了固定化金属亲和配基的添加对PEG4000-(NH4)2SO4-H2O双水相系统相图的影响。 展开更多
关键词 双水相亲和分配配基 制备过程 优化 亚氨基二乙酸 聚乙二醇 固定金属离子亲和层析 分离 蛋白质
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蛋白质组衍生肽段文库用于鉴定酪蛋白激酶2的底物模体 被引量:2
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作者 张曼玉 王春丽 +4 位作者 边阳阳 程凯 卫晓鸾 叶明亮 邹汉法 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期706-711,共6页
模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了... 模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库。该肽段文库是大量非磷酸化肽段的混合物,将此混合肽段与酪蛋白激酶2和三磷酸腺苷作用30min后,通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段,采用反相液相色谱-串联质谱分析,成功地鉴定到472条非冗余底物肽段,包含451个非冗余磷酸化位点,并由此得到底物模体S/T-D/E-x-D/E。该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体,对研究激酶-底物识别以及信号转导过程具有重要意义。 展开更多
关键词 固定金属离子亲和色谱 反相液相色谱-串联质谱 模体 激酶 肽段文库 蛋白质组学
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基于亲和色谱的肺癌细胞磷酸化蛋白质组研究及其应用 被引量:4
20
作者 张宝会 王晨桐 +1 位作者 郭淼 肖华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期77-86,共10页
磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,其异常往往会导致细胞内信号通路的紊乱和疾病的发生。固定化金属离子亲和色谱(IMAC)是磷酸化肽段的高效富集技术,在磷酸化蛋白质组研究方面应用广泛。该研究以金属钛离子(Ti^4+)螯合IMAC材料(T... 磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,其异常往往会导致细胞内信号通路的紊乱和疾病的发生。固定化金属离子亲和色谱(IMAC)是磷酸化肽段的高效富集技术,在磷酸化蛋白质组研究方面应用广泛。该研究以金属钛离子(Ti^4+)螯合IMAC材料(Ti^4+-IMAC)为载体,进行磷酸化肽段富集。比较了10μm Ti^4+-IMAC通过振荡法和固相萃取法(SPE)富集磷酸肽的效果,发现振荡法可以富集到更多的磷酸肽;对比了两种尺寸(10μm和30μm)Ti^4+-IMAC在磷酸化肽段富集中的差异,发现小尺寸材料富集效果更佳。进一步采用优化的策略比较了不同转移能力肺癌细胞的磷酸化蛋白质组,免标记定量蛋白质组学结果表明,优化的Ti^4+-IMAC方法可以从正常的肺成纤维细胞MRC5、低转移肺癌细胞95C和高转移肺癌细胞95D中分别鉴定到510、863和1108种磷酸化蛋白质,其中317种为3组所共有。该研究共鉴定到1268种磷酸化蛋白质上的7560个磷酸化位点,其中1130个为差异磷酸化位点,文献报道显示部分异常表达的激酶与癌症转移密切相关。通过生信对比分析发现,异常表达的磷酸化蛋白质主要与细胞侵袭、迁移和死亡等细胞迁移方面的功能有关。通过优化磷酸化肽富集策略,初步阐明了磷酸化蛋白质网络的异常与肺癌转移之间的相关性,该方法有望用于肺癌进展相关的磷酸化位点、磷酸化蛋白质及其信号通路研究。 展开更多
关键词 固定金属离子亲和色谱 磷酸化 蛋白质组 癌症转移 肺癌细胞
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