固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及纯化铜锌超氧化物歧化酶的研究

以大孔纤维素滤纸为基质 ,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Cu2 +,装柱后制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱。对Cu/Zn SOD粗品进行了纯化研究 ,将其比活从 645U/mL提高到 6882U/mL ,纯化倍数为 1 0 7,蛋白回收率为 92 3% ,活性回收率达 985%。设计了一种解决金属离子泄露问题的方案 ,将Cu2 +泄露量降至 86μg/L。

固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理、环氧活化、配基偶联、固定化Cu2 + 后制得了大孔纤维素亲和膜 检验了亲和膜的流速与负压、等温吸附、保存方法及使用次数等亲和膜性能指标 结果表明

固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理，环氧活化，配基偶联和固定化Cu2+后制得了大 孔纤维素亲和膜，检验了亲和膜的流速与负压，等温吸附，保存方法及使用次数等亲和膜性能指标，设计了一种解决金属离子泄漏问题的新方法，得到的结果明显优于传统的凝胶柱，以上结果表明，普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜色谱介质。

聚偏氟乙烯/磷酸化纳米二氧化硅螯合金属锆杂化膜

结合原位合成法和相转化法,利用正硅酸乙酯(TEOS)和硅烷偶联剂3氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)改性制备聚偏氟乙烯(PVDF)/氨基化纳米二氧化硅(NH 2-SiO 2)杂化膜,然后通过磷酸化处理,固定螯合金属锆(Zr),从而提高杂化膜对卵清蛋白的吸附能力,同时改善了杂化膜的亲水性能。当TEOS质量分数为8%时,改性后的磷酸化Zr+PVDF/NH 2-SiO 2杂化膜对卵清蛋白吸附量达到最大,为150.7 mg/g,且其经过4次吸附洗脱重复循环后对卵清蛋白的解吸附率保持在80%以上,显示该杂化膜具有良好的重复吸附和解吸附能力。

金属螯合亲和层析技术及其应用

固定化金属螯合亲和层析是一种有效的生物分子分离纯化技术,它具有配基简单、吸附量大、分离条件温和、通用强等特点。因此,其在蛋白质纯化、复性和空间定位以及酶的固定化和金属离子清除等方面具有广泛的应用。

基于液相色谱-串联质谱技术的磷酸化蛋白质组学分析

本文运用稳定同位素双甲基化标记技术、固定相金属离子螯合层析（IMAC）技术并结合液相色谱-串联质谱法研究了仙台病毒感染引起的宿主细胞磷酸化蛋白质组变化。实验发现定量的4 289个磷酸化肽段有~20%的蛋白质磷酸化位点发生了显著变化;通路富集分析表明哺乳动物雷帕毒素靶蛋白（mTOR）通路和剪接体（Spliceosome）通路可能参与宿主细胞对病毒的应答;通过对显著变化磷酸化肽段进行基序分析,发现了9个代表性的磷酸化修饰位点基序。本研究方法对于深入解析抗病毒天然免疫信号通路提供了新线索。

壳聚糖-Zn(Ⅱ)亲和层析介质的制备及表征

以自制的壳聚糖微球为载体,环氧氯丙烷(ECH)为活化剂,亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基,Zn2+为螯合金属离子制备壳聚糖-Zn(II)亲和层析介质。最佳活化工艺:M壳聚糖(g)∶VECH(m L)为1∶4、Na OH浓度为1.2 mol/L、活化温度为50℃,活化时间为4 h,测得环氧基修饰密度达0.2472 mmol/g;最佳螯合工艺:IDA作为配基、浓度为0.6 mol/L、反应温度为70℃、反应时间为6 h,Zn Cl2作为螯合金属盐、浓度为0.1 mol/L、反应时间为3 h,Zn2+螯合量达到最大值。通过红外光谱表征,证明壳聚糖与Zn(II)发生了螯合配位反应,生成了壳聚糖-Zn(II)配合物。

重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析

目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。