内皮固有型一氧化氮合酶基因单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究

探讨内皮固有型一氧化氮合酶(ecNOS)基因的单核苷酸多态性(SNP)与冠心病(CAD)的相关性。提取107例CAD患者和132名健康对照者外周血有核细胞DNA,应用荧光标记单碱基延伸分型技术及寡核苷酸微阵列芯片杂交技术检测ecNOS基因的2个标签SNP(tag SNP)rs7830和rs3918188。结果发现CAD组rs7830的CC基因型频率和C等位基因频率明显低于健康对照组(P<0.05)。两组rs3918188的基因型频率及等位基因频率无统计学差异(P>0.05)。通过对2个SNP进行单倍型分析发现,CAD组和健康对照组的单倍型频率具有统计学差异(P<0.05)。结果提示ecNOS基因rs7830多态性变异及由rs7830和rs3918188构建的CA、AA单倍型是CAD的遗传危险因素。

内皮固有型一氧化氮合酶基因单核苷酸多态性与2型糖尿病的相关性

目的探讨内皮固有型一氧化氮合酶(endothelial constitutive nitric oxide synthase,ecNOS)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的相关性。方法提取210例T2DM患者和196例健康对照者外周血有核细胞DNA,应用荧光标记单碱基延伸分型技术及寡核苷酸微阵列芯片杂交技术检测ecNOS基因的2个标签SNP(tagSNP)rs7830和rs3918188。结果 T2DM组rs7830的CC基因型频率和C等位基因频率明显低于健康对照组(P<0.05)。两组rs3918188的基因型频率及等位基因频率无统计学差异(P>0.05)。通过对2个SNP进行单倍型构建分析发现,T2DM组和健康对照组的单倍型频率无统计学差异(P>0.05)。结论 ecNOS基因rs7830多态性变异是T2DM的遗传危险因素。

固有型和诱生型一氧化氮合酶mRNA在急性肺损伤后不同时间的表达强度

目的:研究大鼠急性肺损伤(ALI)病程中固有型一氧化氮合酶(cNOS)mRNA和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mR-NA表达强度的时相性变化。方法:以静脉注射油酸复制大鼠的ALI模型,用地高辛标记的cNOS和iNOS mRNA的cDNA探针,斑点杂交法分别测定cNOS mRNA和iNOS mRNA表达强度的变化。结果:注入油酸后与对照组比较,cNOS mRNA有下调趋势,5h、12h、1d、3d、5d时分别比对照组降低4.15%、3.37%、4.45%、6.43%、5.79%。注入油酸后与对照组相比,iNOS mRNA表达增强,5h、12h、1d、3d、5d时分别比对照组上升51.90%、60.96%、28.09%、5.79%、4.83%。结论:cNOS mRNA下调提示内皮细胞功能进一步受损,iNOS mRNA上调提示有大量一氧化氮合成,可使ALI进一步加重。

内皮固有型一氧化氮合酶基因4b/a多态性与2型糖尿病并发冠心病的关联性研究

目的本研究探讨内皮固有型一氧化氮合酶(ecNOS)基因第4内含子27bp可变数目串联重复序列(VNTR)插入/缺失多态性(4b/a)与2型糖尿病(T2DM)并发冠心病的关联性。方法观察80例2型糖尿病、92例T2DM合并冠心病患者及119例正常对照组人群,提取基因组DNA并应用PCR技术检测ecNOS基因内含子4VNTR多态性。结果ecNOS基因4b/a多态性与T2DM及T2DM并发冠心病无关。发现1例4a/a纯合子基因型者,位于T2DM并发冠心病组。结论缺失型等位基因4a可能处于非统治地位,是否与T2DM并发冠心病有关仍待更大样本的观察。

基于固有型内聚力模型模拟双层夹胶玻璃冲击断裂行为

为了研究双层夹胶玻璃(LG)在冲击荷载作用下的裂纹扩展规律,采用零厚度固有型内聚力单元裂纹扩展方法建立了球形锤头冲击下两边支撑的LG动力响应的计算模型,内聚力单元使用最大主应力失效准则,探讨玻璃罚刚度K值和厚度对裂纹形成路径、范围和数量以及下面板位移的影响。结果表明:(1)冲击荷载作用下,上玻璃板中心首先产生大量细小裂纹和玻璃颗粒,随后径向裂纹不断向外扩展,同时产生大量环向裂纹;(2)随着玻璃K值的增加,LG裂纹扩展范围缩小、数量减少,下玻璃板中心位移减小;(3)随着玻璃厚度的增大,LG裂纹范围缩小、数量减少,下玻璃板中心位移减小。研究结果为LG抗冲击设计和安全防护提供了直接依据。

2型固有淋巴细胞及相关因子在多发性骨髓瘤患者中的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中2型固有淋巴细胞(ILC2s)水平及相关因子表达的变化特点。方法选取2021年1月—2022年6月在新疆医科大学第一附属医院60例初次诊断为MM的患者和40例健康人群为研究对象。流式细胞术检测ILC2s细胞比例及杀伤细胞凝集素样受体G1(KLRG1)的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测相关因子GATA-3、ST2、IL-5、IL-13、IL-7RB mRNA相对表达量。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析各指标对疗效的预测价值。结果初诊MM患者的外周血单个核细胞中ILC2s细胞的比例、ILC2s细胞上KLRG1的表达及GATA-3、ST2、IL-5、IL-13 mRNA相对表达量较健康人群均上升(P<0.05),且ILC2s细胞比例与ILC2s细胞上KLRG1表达及GATA-3、ST2、IL-5、IL-13 mRNA呈正相关(r=0.831、0.748、0.737、0.702和0.699,均P<0.05)。经过治疗后,缓解组患者ILC2s细胞比例、KLRG1表达及GATA-3、ST2、IL-5、IL-13、IL-7RB mRNA相对表达量较未缓解组患者均下降(P<0.05)。缓解组患者治疗后ILC2s细胞比例、KLRG1阳性表达及GATA、IL-5、IL-13 mRNA相对表达量较治疗前均下降(P<0.05)。未缓解组患者治疗后ILC2s细胞比例及GATA-3、ST2、IL-5、IL-13 mRNA相对表达量较治疗前均上升(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,治疗前ILC2s细胞上KLRG1表达、IL-13 mRNA及两者联合检测对疗效有较好的预测价值。结论ILC2s细胞参与MM疾病的免疫紊乱,具有促肿瘤的作用,ILC2s细胞免疫紊乱可能是通过细胞相关效应分子发生改变引起的。

2型固有淋巴细胞与支气管哮喘

2型免疫反应是支气管哮喘的主要发病机制,在变应原、病原体等因素作用下,气道上皮释放白细胞介素(interleukin,IL)-33、胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)等促使2型固有淋巴细胞(type2 innate lymphocytes,ILC2s)在炎症部位激活、成熟与分化。ILC2s产生IL-4、IL-5、IL-13等核心2型细胞因子,引起支气管哮喘,并与多部位ILC2s、固有淋巴细胞(innate lymphocytes,ILCs)其他亚群及多种类型免疫细胞相互作用,参与支气管哮喘的发生、发展,并与哮喘共病及类固醇抵抗相关。ILC2s受细胞因子、营养物质、脂质介质、神经肽与神经递质、激素等调节,通过干预上述物质作用于ILC2s的调控过程,可为支气管哮喘的治疗提供良好前景。

3型固有淋巴细胞在慢性炎症性疾病中的作用

3型固有淋巴细胞(ILC3)分化于淋巴祖细胞,在机体内分布广泛,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节,而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外,ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC3在慢性炎症性疾病中的作用进行综述。

CD226在小鼠小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)中的表达

目的 观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法 采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠肠炎模型,观察CD226在ILC3上表达的变化情况。结果 小鼠小肠ILC1和ILC3均表达CD226;肠炎模型中ILC3所占比例降低,但CD226在ILC3上的表达水平升高。结论 小鼠小肠表达CD226,DSS诱导的肠炎模型中虽然ILC3比例降低,但CD226在ILC3的表达增加。

2型固有淋巴细胞在急性肾损伤中的作用研究进展

急性肾损伤(AKI)是全球的主要公共健康问题之一,其发病原因复杂,死亡率高。其中,免疫细胞及其分泌的炎症因子是诱导AKI发病的关键因素。2型固有淋巴细胞(ILC2)是参与2型免疫的固有淋巴细胞,在AKI中具有潜在的治疗价值,其在肾缺血再灌注损伤、顺铂或阿霉素诱导的AKI动物模型中发挥重要保护作用。白细胞介素-33是介导肾脏中ILC2扩增的关键细胞因子。然而,其作为一种警报素在自身免疫性疾病中也发挥潜在的致病作用。未来需对ILC2的生物学功能及其在AKI中发挥的保护作用机制进行更深入的研究,以期为AKI的治疗提供新靶点。

脂质及其介质对过敏性气道疾病中Ⅱ型固有淋巴细胞调节作用的研究进展

Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)被认为是辅助性T细胞2(Th2细胞)的“镜像细胞”,它是体内2型细胞因子的又一重要来源。ILC2在体内的数量远少于Th2细胞,但其在过敏性疾病中的作用不可忽视,然而其调节机制在很大程度上未被探索。近年来,有关ILC2的脂质代谢的研究取得了一定进展,其中脂质及其介质有望成为过敏性气道疾病的有效治疗靶点。因此,未来应深入探索脂质及其介质对过敏性气道疾病中ILC2的调节作用,以为进一步认识及诊治疾病提供有利的线索和参考依据。

肥胖变应性鼻炎小鼠模型与瘦素及2型固有淋巴细胞相关性的研究

目的探讨瘦素(leptin)对2型固有淋巴细胞(ILC2)的活化是否促进肥胖变应性鼻炎(AR)小鼠模型的发病。方法高脂饮食及卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立肥胖小鼠AR模型。检测模型中leptin及leptin-R、ILC2及Th2相关因子、神经介素U(neuromedin U,NMU)及NMUR1的表达水平并分析相关指标的相关性;检测leptin干预后模型中ILC2、Th2相关因子及神经肽的变化。结果肥胖小鼠A R组leptin、N M U及其受体的表达均明显高于非肥胖A R组及对照组(P<0.05),其脾脏ILC2细胞数量及IL-4、IL-13水平均显著升高(P<0.05);肥胖AR小鼠中leptin及leptin-R与ILC2呈正相关(P<0.05);肥胖AR组中ILC2、Th2相关因子及神经肽因子的表达经leptin干预后显著升高(P<0.05)。结论leptin对ILC2的活化作用及相关的神经免疫机制可能在肥胖AR的发病中发挥作用。

慢性阻塞性肺病肠道和肺炎性2型固有淋巴样细胞(iILC2)及相关细胞因子含量分析

目的 探讨慢阻塞性肺病(COPD)肠道炎性2型固有淋巴细胞(iILC2)与肺部ILC2及其相关炎症反应的关系。方法采用熏烟法建立COPD小鼠模型,将小鼠随机分为正常组和COPD组。采用HE染色检测小鼠肺、肠组织的病变情况,流式细胞术检测天然ILC2细胞(nILC2)和iILC2细胞数量。使用Wright-Giemsa染色检测正常组和COPD组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中免疫细胞数量,ELISA检测BALF中白细胞介素13(IL-13)和IL-4的含量。结果 COPD小鼠肺、肠组织上皮细胞增生,部分萎缩或缺失,伴随炎细胞浸润,病理评分增加,BALF中中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞显著增加。COPD小鼠肺组织iILC2数量、肠组织nILC2和iILC2数量显著增加,BALF中IL-13和IL-4含量显著升高。结论 COPD肺部iILC2及其相关细胞因子的增加可能与肠道iILC2细胞相关。

基于抑制2型固有淋巴细胞作用的舌下脱敏疗法治疗变应性鼻炎的机制研究

目的:针对舌下脱敏疗法治疗变应性鼻炎的机制与2型固有淋巴细胞(ILC2s)的相关性予以探究。方法:选取变应性鼻炎患者随机分为药物治疗组20例和药物联合脱敏治疗组20例,并以15例健康人作为对照组。检测治疗前后外周血及局部鼻腔灌洗液中损伤相关分子模式DAMPs(TSLP、IL-25)的表达,同时检测外周血中ILC2s及其效应因子(IL-13、IL-5、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白)的水平。结果:变应性鼻炎患者DAMPs、ILC2s及其效应因子水平均显著高于对照组(P<0.05);与治疗前相比,联合治疗组的所有研究指标水平在治疗3个月后均显著降低(P<0.05),治疗1年后,联合治疗组中除DAMPs水平仍高于对照组(P<0.05);其余指标水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:舌下脱敏疗法能调节变应性鼻炎患者过度活跃的ILC2s免疫应答,降低炎症反应,达到缓解和治疗变应性鼻炎的效果。

2型固有淋巴细胞(ILC2)在过敏性呼吸道疾病中的作用研究进展

2型固有淋巴细胞(ILC2)作为2型辅助T(Th2)细胞的“镜像细胞”,其总细胞数量虽远不如机体内的CD4^(+)Th2细胞数量庞大,但活化后的ILC2具有比CD4^(+)Th2细胞更强大的生物学活性,能迅速增强Th2细胞炎性反应,在呼吸道过敏性疾病的发病机制中有着重要作用。激活ILC2的相关递质包括炎性细胞因子:白细胞介素33(IL-33)、IL-25、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-4、IL-9;脂质递质(前列腺素、白三烯)、其他激活递质:诱导性共刺激分子(ICOS)、补体C3a、神经肽受体、血管活性肠肽及降钙素基因相关肽等,活化的ILC2产生大量的IL-4、IL-5、IL-9、IL-13及双调蛋白等炎性递质,诱发气道高反应、黏液分泌和气道重塑等呼吸道过敏反应。因此,通过靶向上游及下游信号抑制ILC2活化可能是治疗呼吸道过敏性疾病尤其是类固醇依赖性哮喘的潜在途径。我们总结了ILC2的免疫生物学、过敏性炎症反应中ILC2的启动、ILC2与呼吸道过敏性疾病的关系、靶向ILC2的生物制剂的研究进展。

2型固有淋巴细胞及其相关因子在支气管肺发育不良中的变化及意义

目的探讨支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)早产儿外周血2型固有淋巴细胞(group 2 innate lymphoid cell,ILC2)及白细胞介素(interleukin,IL)-33、IL-25、胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)、IL-5、IL-13的变化及意义。方法选择2020年9月—2021年12月江苏大学附属医院儿科收治的胎龄<32周且住院时间≥14 d的76例早产儿为研究对象,根据BPD诊断标准分为BPD组(n=30)和非BPD组(n=46),比较两组早产儿生后1 d、7d及14 d外周血ILC2占淋巴细胞百分率,以及IL-33、IL-25、TSLP、IL-5、IL-13水平差异及意义。结果BPD组早产儿出生体重及胎龄低于非BPD组(P<0.05)。生后7d和14 d,BPD组ILC2、IL-33、TSLP及IL-5水平均高于非BPD组(P<0.05),其预测BPD发生的曲线下面积均>0.7(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,校正胎龄和出生体重后,生后7d和14 d外周血IL-33、TSLP及IL-5与BPD发生密切相关(P<0.05)。结论BPD早产儿生后早期固有免疫活化伴随相关因子表达上调,其中ILC2、IL-33、TSLP及IL-5是具有早期诊断价值的生物学指标。

白三烯C4及2型固有淋巴细胞在支气管肺发育不良中的变化及意义

目的探讨白三烯C4(LTC4)、2型固有淋巴细胞(ILC2)及相关细胞因子(IL-4、IL-5及IL-13)在小鼠支气管肺发育不良(BPD)肺组织中的动态变化。方法将C57BL/6小鼠随机分为空气组及高氧组,高氧组暴露于85%的氧气中1、7及14 d,复制BPD模型。HE染色观察小鼠肺组织病理改变;流式细胞测量术检测ILC2及CysLT1R+ILC2百分比;ELISA检测LTC4、IL-4、IL-5及IL-13含量;Western blot检测白三烯C4合酶(LTC4S)蛋白表达;RT-qPCR检测LTC4S及半胱氨酸白三烯1型受体(CysLT1R)mRNA表达。结果与空气组相比,高氧组ILC2及CysLT1R+ILC2百分比增加(P<0.05),且CysLT1R mRNA表达增加(P<0.05);高氧组IL-4、IL-5及IL-13表达水平均增加且高于同时间点空气组(P<0.05);高氧组LTC4含量、LTC4S蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05)。结论在BPD中,LTC4增加并可能通过CysLT1R诱导ILC2及相关细胞因子(IL-4、IL-5及IL-13)增加。

CGRP抑制变应性鼻炎患者外周血2型固有淋巴细胞(ILC2)增殖、活化和细胞因子分泌

目的 探究降钙素基因相关肽(CGRP)对变应性鼻炎(AR)患者外周血中2型固有淋巴细胞(ILC2)的调控作用。方法 提取正常健康人、 AR患者外周血单个核细胞(PBMC),分别给予CGRP、白细胞介素33(IL-33)、 CGRP联合IL-33刺激3 d,以空白刺激为对照。采用流式细胞术检测4组ILC2的比例。分选ILC2后分别给予CGRP、 IL-33、 CGRP联合IL-33刺激3 d,以空白刺激为对照,采用流式细胞术检测ILC2中IL-5、 IL-13阳性细胞百分比,ELISA检测ILC2上清液IL-5、 IL-13水平。结果 AR患者外周血中ILC2百分比明显高于对照组。将PBMC培养后,经IL-33单一刺激,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显上升。加入IL-33联合CGRP刺激后,PBMC中IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显降低;经CGRP单一刺激后PBMC中IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2进一步降低。将ILC2分选后进行培养,经IL-33单一刺激,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显上升,加入IL-33联合CGRP刺激后,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显降低,经CGRP单一刺激,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平进一步降低。经IL-33联合CGRP共同刺激相较于经IL-33单一刺激,IL-5、 IL-13水平明显降低,经CGRP单一刺激,IL-5、 IL-13水平进一步降低。结论CGRP可以抑制AR中外周血ILC2的增殖、活化,在AR中发挥抗炎作用。

三型固有淋巴细胞在肠道免疫中的作用研究进展

肠道免疫在机体免疫中十分重要。目前认为,肠道免疫与固有淋巴细胞(ILC)密切相关,ILC可抑制免疫反应,维持组织稳态,且不同类型ILC之间可以互相转换,但受到多方面因素的限制,其中3型ILC(ILC3)主要分布在肠道固有层,其调节肠道免疫的机制可能涉及与树突状细胞、巨噬细胞、T细胞等免疫细胞之间的相互作用、ILC3与肠道菌群的相互调节、ILC3调节肠道生物节律等方面。ILC3在肠道疾病中发挥多种作用,如控制肠道炎症、诱导糖基化、止血、维持肠道稳态等,探索ILC3在肠道免疫中的作用将为肠道疾病治疗提供新的靶点。

五宝胶囊通过调节Ⅱ型固有淋巴细胞上下游细胞因子抑制哮喘模型小鼠气道炎症的研究

目的研究五宝胶囊通过调节Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2s)上下游细胞因子对哮喘模型小鼠气道炎症的影响。方法40只雌性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(地塞米松1 mg/kg)和五宝胶囊低、高剂量组(0.5、1 g/kg),每组8只,通过卵清蛋白(OVA)致敏、雾化激发的方法建立哮喘模型,并连续灌胃7 d生理盐水或药液。通过酶联免疫吸附试验检测血清中免疫球蛋白E(IgE)、OVA-IgE含量,支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素5(IL-5)、IL-9、IL-13、IL-25、IL-33、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、黏蛋白5AC(MUC5AC)含量;采用苏木精-伊红染色观察小鼠肺组织病理变化;采用过碘酸雪夫染色观察杯状细胞增生变化;通过流式细胞术检测肺组织中ILC2s的数量(除五宝胶囊低剂量组外)。结果与模型组比较,五宝胶囊高、低剂量组小鼠血清中IgE、OVA-IgE含量和BALF中IL-5、IL-9、IL-13、IL-25、IL-33、TSLP、MUC5AC含量均显著降低(P<0.01),肺组织炎症细胞浸润及基底膜增厚均有不同程度的缓解,杯状细胞增生被抑制;五宝胶囊高剂量组小鼠肺组织中ILC2s数量显著降低(P<0.01)。结论五宝胶囊能有效减少哮喘模型小鼠肺组织中ILC2s数量,降低小鼠BALF中ILC2s上下游细胞因子的含量,从而抑制气道炎症,改善哮喘。