C端带多聚组氨酸标签的重组小鼠基质细胞衍生因子-1α原核系统的表达及分离纯化

在构建SDF-1原核表达系统的基础上,探索对其活性表达产物分离纯化的技术路线。将从小鼠骨髓组织克隆出的SDF-1α成熟肽基因插入原核表达质粒pET101/D-TOPO,用以转化大肠杆菌BL21Star^(TM)菌株,经IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测证实:其表达产物在约11.6kD处有明显条带显示,其大小与预测的重组SDF-1α/His分子量一致。采用Ni^2+-Resin固相亲和层析法对由该系统表达的C端带6Xhis标签的重组SDF-1α/His进行分离纯化,纯度达92％。体外活性检测结果表明:重组小鼠SDF-1α/His对T细胞有明显趋化和促生存作用;能有效诱导Jurkat细胞ERK磷酸化。