西维因毛细管电泳免疫分析方法的建立及其与固相酶联免疫分析方法(ELISA)的比较

以氨基甲酸酯农药西维因为研究对象,采用小分子荧光素标记西维因半抗原,建立毛细管电泳荧光免疫分析方法。该方法对抗原抗体结合反应达到平衡的时间为30min,5min即可获得检测结果,对西维因检测的线性范围和最低检测限分别为0.16～50ng/mL和0.05ng/mL,具有快速、灵敏的特点,与固相酶联免疫分析方法相比更适合于食品或环境中痕量西维因残留的分析检测。

用于固相放射免疫分析的一类聚合物NHS酯的合成与表征

将NHS(N 羟基琥珀酰亚胺 )酯功能基团引入高分子载体上 ,合成了几种聚合物的NHS酯 .研究了合成单体NHS酯及聚合物NHS酯的合成条件 ,测试了NHS酯及聚合物NHS酯的基本特性 .该聚合物NHS酯可在温和条件下与蛋白反应 ,使蛋白以共价键结合方式固定在聚合物上 。

固相酶免疫分析用于血清FT_3检测探讨

目的 研究血清游离三碘甲状腺原氨酸 (FT3)测定的固相酶免疫分析方法。方法 用聚苯乙烯固相载体、亲和纯化的兔抗 T3抗体和 T3-β-半乳糖苷酶标记物建立固相管竞争法、固相板竞争法和固相板顺序饱和法。通过对酶标物进行化学修饰、减少标准品或待测样品的上样量、扩大反应体系和采用顺序饱和法 ,避免或减少甲状腺激素结合蛋白 (TBP)的干扰。结果 3种方法的可测范围均为 0 .4 8～ 4 5 .0 0 ng/ L ,其正常值分别为 (4.34± 1.0 3) ,(4.14± 0 .97) ,(4.0 3± 0 .82 ) ng/ L。正常人与甲状腺功能亢进症患者能明显分开。 3种方法的灵敏度分别为 0 .15 0 ,0 .130 ,0 .0 4 5 ng/ L ,平均批内变异系数分别为 6 .2 % ,6 .4 % ,5 .2 % ,平均批间变异系数分别为13.1% ,12 .4 % ,11.0 %。结论 固相酶免疫分析法基本解决了 TBP的干扰 ,其测定结果的灵敏度和精密度均达到放射免疫分析法 (RIA)

固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂(Ⅰ)中间体—4,4′-二溴-6,6′-二甲基2,2′-联吡啶的合成

目的:合成固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂的中间体-4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶。方法:根据自行设计的合成路线,以2-氨基6-甲基吡啶为原料,经重氮化、乌尔曼偶联合成6,6′-二甲基-2,2′-二吡啶,再经氧化、硝化、溴化、脱氧等合成4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶。结果:经元素分析、红外光谱,核磁共振波谱等方法证明:成功的合成了4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶。结论:通过自行设计路线完成了4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶的合成,为固相时间分辨荧光免疫分析的应用提供了有价值的中间体和制备方法。

Leptin固相放射免疫分析法的建立

目的:研究瘦素(Leptin)固相放射免疫分析法的建立。方法:将提取的兔抗人Leptin特异性抗体IgG,包被在活化的塑料试管内壁,建立了简便、快速、高灵敏、特异的固相竞争RIA,测定人血清Leptin。结果:标准曲线范围为(0.5～24)ng/ml;测定69例健康人血清正常值为(3.68±1.46)ng/ml;最小检出值为0.38ng/ml,批内CV%为5.6%,批间CV%为8.8%;回收率为92%。本文所建方法与液相RIA标准曲线具有良好的平行性;使用两种方法平行测定88份血清Leptin浓度(1.00～7.68)ng/ml,经统计学处理两者之间具有良好的直线相关(r=0.987,P<0.001,Y=0.977X)。结论:所建立的Leptin固相放射免疫分析法为科研及临床病人血清Leptin浓度的测定提供了一种新的检测方法。

血清游离甲状腺素(FT_4)双抗固相放射免疫分析方法的建立

利用双抗固化试管建立了检测血清中游离甲状腺素（ＦＴ４）的固相放射免疫分析方法。游离ＦＴ４和１２５Ｉ标记的ＦＴ４类似物竞争与包被管上的固化抗体结合。检测可以在２ｈ内完成。检测范围为０．１２－７５ｐｍｏｌ／Ｌ。批内、批间平均变异系数分别为１．７％－４．４％和３．２％－９．１％。非特异性结合小于１％。该分析与商品ＦＴ４标记抗体ＲＩＡ分析药盒比较，线性回归斜率为１．０８，截距２．３，相关系数为０．８５。该方法操作简便、重复性好，多项分析指标优于常规的放免分析方法，为一种简便、精密和准确的分析方法。

固相放射免疫分析法检测ABO血型

固相放射免疫分析(Solid Phase Radioimmurloflssay，RIA)是一种既具有抗原抗体相结合的特异性好，又具有放射性同位素的灵敏度高的优点的方法。设法在其他学科中已得到某些应用，但在法医生物学领域中尚未见报道。本实验对该法在血液的ABO血型测定的应用作了初步探讨。

睾酮固相放射免疫分析方法的建立

目的建立一种睾酮固相放射免疫分析方法,实现睾酮液相放射免疫分析药盒的固相包被管分离。方法利用本公司专利技术纯化出亲和纯驴抗兔抗体,将其包被于聚苯乙烯试管上,兔抗-睾酮抗体能与驴抗兔抗体结合而被间接包被上,从而制备出睾酮抗体包被管,再采用标准抗原与标记抗原竞争包被在聚苯乙烯试管上定量抗体的技术思路,建立睾酮固相放射免疫分析方法。结果睾酮抗体包被管中亲和纯驴抗兔抗体包被浓度为20μg/m L,兔抗-睾酮抗体包被滴度为1∶5万;本方法的反应条件为37℃温育1h,测量范围为0.1~20 ng/m L,灵敏度为0.02 ng/m L,批内变异为4.37%~6.84%,批间变异为6.31%~9.03%,回收率为93.6%~104.1%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.999;与合格睾酮液相放射免疫分析药盒的相关性方程为Y=1.05X+0.01,相关系数r=0.982;睾酮抗体包被管、125I-睾酮标记物以及睾酮标准品在37℃存放1周稳定性良好。结论本方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。

胶体金标免疫固相膜检测动物性食品中氟甲喹

氟甲喹(flumequine,FLU)是动物专用的抗生素,滥用或超标使用会造成动物性食品中的残留问题,对人类健康造成危害。以活泼酯法制备氟甲喹完全抗原,免疫新西兰大耳白兔获得抗血清,通过间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗血清的效价和亲和性,效价为1∶12 800,纯化后抗体的IC50达到0.055 ng/mL。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并用于标记FLU多克隆抗体制备免疫金。以硝酸纤维素膜为固相载体,包被上包被原和酶标二抗作为检测线和控制线,优化检测条件:封闭液为5%脱脂乳、酶标二抗稀释40倍、包被量1.0μg、免疫金稀释度1∶5(体积比)、金标抗体与待测溶液混合比例1∶5(体积比)。在最优条件下,制成FLU胶体金标记免疫固相膜,最低检出限达40μg/L。建立的胶体金标记固相膜免疫检测方法适于大量样品的快速定性筛查。

氯霉素毛细管电泳免疫分析方法研究

针对目前食品安全领域中氯霉素的检测,建立一种快速灵敏的氯霉素毛细管电泳免疫分析方法。该方法对氯霉素检测的线性范围和最低检测限分别为0.008～5μg/L和0.0016μg/L。与相应固相酶联免疫分析ELISA相比,对氯霉素的检测灵敏提高了约20倍且有效缩短了分析时间。建立的氯霉素毛细管电泳免疫分析方法对动物源性食物(牛奶、鸡肉和鱼肉)进行分析,得到氯霉素在实际样品中的检测限为0.035μg/kg。

应用固相RIA和ELISA测定血浆孕酮浓度监测黄牛产后卵巢机能

应用固相孕酮放射免疫分析法(固相P_4-RIA)和酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定血浆孕酮(P_4)浓度,监测黄牛产后卵巢机能。结果表明,鲁西黄牛产后12.3d前血浆P_4处于基础水平,RIA和ELISA测值分别为0.38±0.12～0.63±0.21和0.17～0.54±0.24ng/mL。其后P_4水平开始上升,母牛出现卵巢活动。代表卵巢活动的P_4曲线可分为4种类型;Ⅰ型,产后10.6±3.9d后,出现3个正常黄体周期;Ⅱ型,产后13.6±4.4d以后首先出现一个8.5d左右的短黄体期,接着出现正常黄体周期;Ⅲ型,产后12.5±3.9d开始出现正常黄体期,接着出现一个短黄体期和一个正常黄体期;Ⅳ型,产后12.5±2.5d后,出现正常黄体期,以后变为短黄体周期。在黄体周期中,最低P_4水平为0.51±0.16(RIA)和0.62±0.21(BLISA)ng/mL,最高P_4水平为5.17±2.15(RIA)和5.09±2.18(ELISA)ng/mL。从方法学上进行比较,固相P_4-RIA和ELISA的测定结果具有很强的相关性 (r=0.9987)。

乙型肝炎核心抗体放射免疫定量试剂盒的研制

以聚苯乙烯小球为固相载体,在小球表面包被一层基因工程制备的乙型肝炎核心抗原(HBcAg),以125I标记的乙型肝炎核心抗体(125I-Anti-HBc)作为标记物,采用固相放射免疫竞争法研制成乙型肝炎核心抗体放射免疫定量试剂盒(Anti-HBc-RIA)。本试剂盒的灵敏度为0.8NCU/mL,批内变异系数<9.9%,批间变异系数<13.8%,回收率为92.6%～109.2%。正常参考值为0～2.0NCU/mL。

IRMA及SP免疫组化染色检测在结肠癌诊断中的意义

目的探讨固相免疫放射分析法(IRMA)及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)免疫组化染色检测在结肠癌诊断中的意义。方法选取在我院手术切除的结肠良性肿瘤患者78例(结肠良性肿瘤组),78例结肠癌患者(结肠癌组),采用IRMA及SP免疫组化染色检测生长抑制因子2(ING2)与基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达水平,判断诊断价值。结果结肠癌组的ING2与MMP-13 IRMA阳性率高于结肠良性肿瘤组(P<0.05);结肠癌组的ING2与MMP-13 SP阳性率高于结肠良性肿瘤组(P<0.05);在156例患者中,IRMA诊断为结肠癌71例,结肠良性肿瘤85例;SP诊断为结肠癌77例,结肠良性肿瘤79例。IRMA诊断结肠癌的敏感性与特异性为89.7%、98.7%,SP诊断的敏感性与特异性为98.7%、100.0%,SP诊断的敏感性高于IRMA(P<0.05)。结论ING2与MMP-13在结肠癌患者IRMA及SP免疫组化染色诊断中都呈现高表达状况,IRMA及SP诊断结直肠癌都有很高的特异性,但是SP诊断的敏感性更好。

多发性硬化患者sFas、sFasL水平的研究

目的 :探讨 s Fas与 s Fas L 在多发性硬化 (MS)发病中的意义。方法 :采用固相酶联免疫分析 (EL ISA)法检测 6 6例MS患者血清 s Fas、s Fas L 水平。结果 :MS患者血清 s Fas、s Fas L 水平均高于健康对照组 ,MS患者活动期 s Fas显著高于缓解期(P <0 .0 1) ,而 s Fas L 水平未见显著差异。在 6 6例 MS患者中 ,有 37例 s Fas和 s Fas L 的水平同时升高。结论 :s Fas水平与 MS的炎症程度有关 ,血清 s Fas、s Fas L 检测有助于对 MS病情进展作出判断 ,并为

探讨老年胃癌患者胃液中TNF-α,CA19-9和CEA联合检测的临床价值

目的:探讨老年患者胃液中TNF-α,CA19-9和CEA联合检测对胃癌的诊断价值．方法:采用放射免疫技术测定42例胃癌和61例良性胃病老年患者胃液中TNF-α,CA19-9和CEA浓度．结果:胃癌组胃液中TNF-α,CA19-9和CEA的浓度显著高于良性胃病组(8．96±2．10 mg／L vs 4．92±1．24．5．66±1．25 mg／L;59．47±10．58 IU／L vs 36．89±11．23．38．73±9．23 IU／L; 31．68±5．58 mg／L vs 1'．55±3．82,19.42±5．19 mg／L,均P<0．001);胃癌组联合检测胃液中TNF-α,CA19-9和CEA,其敏感度和特异度分别97．4％,89．3％,均明显高于单项指标的敏感度和特异度．结论:联合检测胃液中TNF-α,CA19-9和CEA能有助于提高胃癌的诊断．

胃癌及胃癌前病变患者胃液中TNF-α、CA19-9和CEA联合检测的临床价值

目的探讨胃液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、糖类抗原19-9(CA19-9)和癌胚抗原(CEA)联合检测对胃癌的诊断价值。方法采用放射免疫法测定42例胃癌和61例良性胃病患者胃液中TNF-α、CA19-9和CEA的含量。结果胃癌组胃液中TNF-α、CA19-9和CEA的测定值和灵敏度显著高于良性胃病组(P<0.001);胃癌组联合检测胃液中TNF-α、CA19-9和CEA其灵敏度和特异度均明显高于单项指标的灵敏度和特异度。结论胃液中TNF-α、CA19-9和CEA联合检测能有助于提高胃癌的诊断率。

4,4＇-二溴-6,6＇-二(N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基)-2,2＇-联吡啶的合成与表征

以4,4'-二硝基-6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶-N,N'-二氧化物为起始原料,经过三氟乙酸酐酯化、羟甲基化、氢溴酸溴甲基化及亚氨基二乙酸二乙酯氢胺基甲基化合成了4,4'-二溴-6,6'-二(N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基)-2,2'-联吡啶。通过熔点、红外光谱、核磁共振、高效液相色谱、高分辨质谱测试技术表征了该化合物的结构,为合成时间分辨荧光免疫分析新型双功能螯合剂提供了重要中间体。

老年胃癌患者胃液中肿瘤标志物联合检测的临床意义

目的探讨老年患者胃液中TNFα、CA199和CA724联合检测对胃癌的诊断意义。方法采用放射免疫技术测定42例胃癌、30例浅表性胃炎和31例胃癌前病变的老年患者胃液中TNFα、CA199和CA724浓度。结果胃癌组胃液中TNFα、CA199和CA724的浓度分别显著高于浅表性胃炎组、胃癌前病变组(8.96±2.10)ng/mlvs(5.66±1.65)ng/ml,(4.92±1.24)ng/ml;(59.47±10.58)U/mlvs(38.73±9.23)U/ml,(36.89±11.23)U/ml;(37.08±7.06)U/mlvs(25.42±7.26)U/ml,(23.87±6.31)U/ml;P均<0.001);胃癌组联合检测胃液中TNFα、CA199和CA724,其敏感度、特异度分别为86.9%,83.3%,均分别高于3项标志物的敏感度和特异度(TNFα69.1%,75.4%;CA19965.7%,67.2%;CA72466.7%,70.5%)。结论联合检测胃液中TNFα、CA199和CA724等肿瘤标志物能有助于提高老年患者胃癌的诊断准确率。