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两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5
被引量:
5
1
作者
马泓冰
孙中文
+4 位作者
徐颖
李文香
陶然
陈洁
张学光
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期152-154,共3页
目的建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法。方法将含mAb2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋...
目的建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法。方法将含mAb2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gelfiltration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb2F5纯度的影响。纯化的mAb2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析。结果以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28mAb2F5的纯度大于90%,总回收率达70%。纯化的mAb2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用;而且其促增殖作用的活性优于ProteinG亲和层析法(affinitychro-matography,AC)纯化所获得mAb。结论建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好。
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关键词
固相化金属螯合层析法
凝胶过滤
层析
法
纯
化
单克隆抗体
下载PDF
职称材料
从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C
被引量:
2
2
作者
王宗奎
林方昭
+2 位作者
肖小璞
谢亦武
李长清
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期355-360,共6页
目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和...
目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。结果纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍;固相化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍;蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg。结论串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析可以从Cohn法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物。
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关键词
Cohn
法
组份Ⅳ
蛋白C
分离
纯
化
亲和
层析
固
相
化
金属
螯合
比活性
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职称材料
K_2GeSe_3的中温固相合成
3
作者
靳星瑞
张丽丹
+1 位作者
舒桂明
郭洪猷
《新技术新工艺》
北大核心
2002年第7期49-50,共2页
采用反应性熔盐法 ,K2 Se4、Ge和 Se粉以 2 :1 :3的摩尔比在 5 0 0℃下反应 7d,生成黄色片状晶体 K2 Ge Se3 。对产物晶体的热稳定性进行研究 ,并对其晶体结构和合成方法进行了探讨。
关键词
三元
金属
硒
化
物
中温
固
相
合成
反应性熔盐
法
热稳定性
K2GeSe3
下载PDF
职称材料
钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用
被引量:
2
4
作者
杨渐
俞昌喜
+1 位作者
许盈
廖联明
《药物生物技术》
CAS
2013年第3期220-224,共5页
为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层...
为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层析分离纯化制备较大量的hIGF-1融合蛋白。结果显示,钴亲和层析在分离纯化hIGF-1融合蛋白时表现出更好的可操作性与纯化效果,线性放大条件后分离纯化效果稳定,制备hIGF-1融合蛋白产物纯度约为95%,蛋白获得率约为10.78%。研究初步建立了切实可行的钴金属螯合亲和层析分离纯化制备hIGF-1融合蛋白的工艺。
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关键词
人胰岛素样生长因子-1
金属
螯和亲和
层析
固
相
化
金属
离子亲和
层析
六聚组氨酸
纯
化
镍离子
钴离子
原文传递
题名
两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5
被引量:
5
1
作者
马泓冰
孙中文
徐颖
李文香
陶然
陈洁
张学光
机构
苏州大学医学生物技术研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期152-154,共3页
基金
国家自然科学基金重点项目(30330540)
江苏省干细胞重点实验室基金资助项目(2003年)
文摘
目的建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法。方法将含mAb2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gelfiltration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb2F5纯度的影响。纯化的mAb2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析。结果以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28mAb2F5的纯度大于90%,总回收率达70%。纯化的mAb2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用;而且其促增殖作用的活性优于ProteinG亲和层析法(affinitychro-matography,AC)纯化所获得mAb。结论建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好。
关键词
固相化金属螯合层析法
凝胶过滤
层析
法
纯
化
单克隆抗体
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C
被引量:
2
2
作者
王宗奎
林方昭
肖小璞
谢亦武
李长清
机构
中国医学科学院北京协和医学院输血研究所
China Biologic Products
出处
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期355-360,共6页
基金
四川省科技支撑计划项目(2009SZ0217)
文摘
目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。结果纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍;固相化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍;蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg。结论串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析可以从Cohn法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物。
关键词
Cohn
法
组份Ⅳ
蛋白C
分离
纯
化
亲和
层析
固
相
化
金属
螯合
比活性
Keywords
Cohn Fraction Ⅳ
Protein C
Isolation
Purification
Immobilized metal affinity chromatography
Specific activity
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
R457.14 [医药卫生—治疗学]
下载PDF
职称材料
题名
K_2GeSe_3的中温固相合成
3
作者
靳星瑞
张丽丹
舒桂明
郭洪猷
机构
北京化工大学理学院
北京大学地质系
出处
《新技术新工艺》
北大核心
2002年第7期49-50,共2页
文摘
采用反应性熔盐法 ,K2 Se4、Ge和 Se粉以 2 :1 :3的摩尔比在 5 0 0℃下反应 7d,生成黄色片状晶体 K2 Ge Se3 。对产物晶体的热稳定性进行研究 ,并对其晶体结构和合成方法进行了探讨。
关键词
三元
金属
硒
化
物
中温
固
相
合成
反应性熔盐
法
热稳定性
K2GeSe3
Keywords
ternary metal selenide,solid state synthesis at intermediate temperature,reactive flux,thermal stability
分类号
TB321 [一般工业技术—材料科学与工程]
下载PDF
职称材料
题名
钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用
被引量:
2
4
作者
杨渐
俞昌喜
许盈
廖联明
机构
福建医科大学药学院药理学系
出处
《药物生物技术》
CAS
2013年第3期220-224,共5页
基金
福建省高校产学合作科技重大项目(No.2010Y4002)
文摘
为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层析分离纯化制备较大量的hIGF-1融合蛋白。结果显示,钴亲和层析在分离纯化hIGF-1融合蛋白时表现出更好的可操作性与纯化效果,线性放大条件后分离纯化效果稳定,制备hIGF-1融合蛋白产物纯度约为95%,蛋白获得率约为10.78%。研究初步建立了切实可行的钴金属螯合亲和层析分离纯化制备hIGF-1融合蛋白的工艺。
关键词
人胰岛素样生长因子-1
金属
螯和亲和
层析
固
相
化
金属
离子亲和
层析
六聚组氨酸
纯
化
镍离子
钴离子
Keywords
hIGF-1, MCAC, IMAC,6 x Histidine, Purification, Ni2+, Co2+
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5
马泓冰
孙中文
徐颖
李文香
陶然
陈洁
张学光
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
5
下载PDF
职称材料
2
从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C
王宗奎
林方昭
肖小璞
谢亦武
李长清
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
下载PDF
职称材料
3
K_2GeSe_3的中温固相合成
靳星瑞
张丽丹
舒桂明
郭洪猷
《新技术新工艺》
北大核心
2002
0
下载PDF
职称材料
4
钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用
杨渐
俞昌喜
许盈
廖联明
《药物生物技术》
CAS
2013
2
原文传递
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