运用PCR-DGGE分析比较瘤胃中不同饲料固相粘附微生物区系

通过研究奶牛瘤胃中苜蓿、青贮玉米和羊草3种饲料固相粘附微生物菌群结构,分析比较附着于不同粗饲料微生物区系的差异。选择3头健康且体质量相近的装有永久性瘤胃瘘管的中国荷斯坦奶牛,将苜蓿、青贮玉米和羊草分别装入尼龙袋,在瘤胃中孵育24h后取出,PBS洗脱获得固相粘附微生物,提取总DNA,采用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)分析群落结构,选取清晰条带测序后构建系统发育树。不同样品的DGGE图谱条带的数目和条带颜色深浅有一定差异;苜蓿与青贮玉米和羊草间相比相似性较低,青贮玉米与羊草间的相似性较高;3种饲料及瘤胃内容物固相粘附微生物的Simpson多样性指数差异显著(P<0.05),Shannon-Wiener多样性指数差异不显著(P>0.05);3种饲料固相粘附微生物条带近源种分别归属Butyrivibrio sp.、Fibrobacter sp.、Prevotella sp.、Succiniclasticum sp.、Pseudobutyrivibrio sp.5个属。3种饲料固相粘附微生物的种群构成存在差异。

应用PCR-DGGE比较奶牛瘤胃中不同粗饲料固相粘附细菌的多样性

为了比较奶牛瘤胃中不同粗饲料粘附细菌菌群结构,选择3头体况相近、健康、装有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛,将苜蓿与全株玉米青贮混合粗饲料日粮(MF)和单一玉米秸秆日粮(CS)分别装入尼龙袋,在瘤胃中孵育24h后取出,用磷酸缓冲液洗脱获得饲料固相粘附部分,剩余的饲料残渣是固相超紧密粘附部分,提取总DNA,最终获得固相紧密粘附细菌和固相超紧密粘附细菌,利用PCR-DGGE分析细菌群落结构.结果表明:不同粘附程度的固相细菌的DGGE图谱条带数目和颜色深浅存在较大的差异,而粘附程度相同的不同粗饲料的DGGE图谱条带相似.2种饲料的瘤胃固相紧密粘附细菌的Shannon-Wiener多样性指数,CS高于MF(P<0.05),相比于固相紧密粘附细菌,固相超紧密粘附细菌的Shannon-Wiener多样性指数更高(P<0.01).不同粘附程度的固相细菌差异条带近源种分别归属于Brevundimonas,Prevotella,Pseudobutyrivibrio,Clostridium.因此认为,粗饲料类型和粘附程度影响细菌多样性,其中固相超紧密粘附细菌的多样性较高.

玻片固相粘附醛化童虫的间接免疫荧光技术及其应用

本文介绍一种玻片固相粘附固定童虫的间接免疫荧光法,并将其用于抗日本血吸虫童虫单克隆抗体的筛选。经甲醛固定6小时以上的童虫,无抗原性改变,无自发荧光,无明显非特异性吸附蛋白的现象;能一次大量制备和低温长期保存。经明胶-铬矾涂底的玻片,增强童虫粘附于玻片的能力,童虫脱落率为10％左右,用于筛选杂交瘤孔的上清时,最低上清用量为10μl,与试管荧光法相比,该法省时、省事,且敏感。

嗜酸乳杆菌细胞壁提取物对致病性大肠杆菌粘附鸡肠纹状缘膜的影响

为研究嗜酸乳杆菌细胞壁提取物对致病性大肠杆菌(E.coli)粘附鸡肠纹状缘膜的影响,本实验以雏鸡小肠纹状缘膜为模型,以嗜酸乳杆菌和鸡致病性E.coli O78为研究对象,提取嗜酸乳杆菌表层蛋白、肽聚糖及E.coli O78菌毛,雏鸡小肠纹状缘膜,采用固相粘附试验和生物素标记法从分子间相互作用的关系评价了嗜酸乳杆菌细胞壁提取物对菌毛粘附的抑制作用,结果表明:表层蛋白和肽聚糖对菌毛粘附具有明显的抑制作用,呈浓度依赖性抑制菌毛与纹状缘膜的结合,具有竞争性拮抗作用,这主要是由空间占位造成的。肽聚糖的抑制作用相对较小。

CAT和SPRCA技术在不规则抗体筛查试验中的应用

目的评估柱凝集技术(CAT)、固相红细胞粘附技术(SPRCA)技术与试管PEG-IAT技术在不规则抗体筛查中检测结果的一致性及对不同稀释度阳性样本的检出能力。方法对199例申请输血患者随机样本分别采用CAT、SPRCA与试管PEG-IAT3种技术平行进行不规则抗体筛查试验,分析阳性检出率,对检测结果进行一致性检验(kappa检验)。对4例阳性样本分别采用3种技术进行稀释度研究,比较可检测到红细胞同种抗体的最大稀释度差异。结果 CAT、SPRCA与试管PEG-IAT技术在199例不规则抗体筛查中检测结果完全一致(kappa=1)。SPRCA技术可检测到红细胞同种抗体的最大稀释度高于其他2种技术。结论 3种技术均可用于不规则抗体筛查试验。对于弱反应抗体或低效价抗体的检测,应选择灵敏度较高的检测技术。