TTT活泼酰胺法在固相肽合成中的应用——促生长激素释放肽的合成及其生物活性

通过合成促生长激素释放肽,对四氢噻唑-2-硫酮(TTT)活泼酰胺法在固相肽合成中的应用进行了研究。实验结果表明,TTT活泼酰胺同载体上的氨基组分的缩合反应速度很大,每步缩合反应的产率很高(>99.3%),最终产品的纯度也很令人满意。此外,还报道了合成肽的生物活性。

疏水载体辅助液相法与固相法合成芋螺毒素的工艺对比

目的对芋螺毒素μ-CnIIIC的三种二硫键异构体进行合成工艺研究及表征鉴定。方法通过可溶性疏水载体辅助液相合成法(LPPS)和固相多肽合成法(SPPS)人工合成μ-CnIIIC的三种二硫键异构体的线性肽,采用三步氧化法对线性肽进行氧化折叠,获得三种折叠肽异构体(μ-CnIIIC-Ⅰ、μ-CnIIIC-Ⅱ和μ-CnIIIC-Ⅲ),并对两种合成工艺进行物料消耗量、“三废”产生量、收率进行对比。结果成功合成芋螺毒素异构体并进行了质谱表征;采用SPPS法和LPPS法合成μ-CnIIIC-Ⅰ、μ-CnIIIC-Ⅱ、μ-CnIIIC-Ⅲ平均收率为15.64%、13.27%、10.56%和18.45%、17.62%、15.37%;采用SPPS法和LPPS法合成1 gμ-CnIIIC-Ⅰ、μ-CnIIIC-Ⅱ、μ-CnIIIC-Ⅲ物料平均消耗量为20.65、21.62、24.78 g和61.19、72.17、90.75 g,平均废液产生量分别为1.49、1.57、1.78 L和12.72、15.00、19.16 L。SPPS法和LPPS法比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过对芋螺毒素μ-CnIIIC异构体的合成研究,表明LPPS法的总体收率比SPPS法收率高且物料消耗量及“三废”产生量少,因此LPPS法具有重大的研究意义和商业价值。

胸腺五肽固相合成及免疫增强作用的研究

目的 合成有生物活性的胸腺五肽并研究其免疫增强作用。方法 用Fmoc固相肽合成法合成胸腺五肽 ,用E玫瑰花实验检测生物活性。合成的胸腺五肽经小鼠腹腔注射后进行淋巴细胞转化实验、溶血空斑实验及IL 2活性实验 ,研究其免疫增强作用。结果 合成 2批胸腺五肽 ,精肽产量分别为 2 7mg和 3 4mg ,具有生物活性 ,实验组动物脾淋巴细胞的转化率、空斑形成细胞及IL 2活性皆明显高于空白对照组。结论 用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的胸腺五肽 ,且具有免疫增强作用。

醋酸奥曲肽的固相合成

目的设计并合成醋酸奥曲肽。方法采用固相多肽合成法 ,使用逐步缩合的战略合成奥曲肽。结果与结论合成了醋酸奥曲肽 ,纯品总收率为 3 0 % (以连到树脂上的第一个氨基酸计 )。关键中间体及最终产物的结构经质谱、红外光谱、核磁共振氢谱及碳谱得到确证。

应用2-氯三苯甲基氯树脂固相合成C-末端N-烷基化肽酰胺

以乙胺化多肽亮丙瑞林为模型肽,研究了应用2-氯三苯甲基氯树脂(2Cl-Trt)固相合成C-末端N-烷基化肽酰胺的工艺。首先以Cl-Trt树脂为载体合成出全保护的肽片段,再以HBTU/HOBt/DIEA/乙胺(摩尔比为1∶1∶1∶10)为乙胺化试剂,在25°C下反应仅需5 min,浓缩后直接进行侧链切割,从而连续耦合完成C-末端乙胺化修饰与侧链切割,避免了中间产物的分离纯化步骤,充分继承了固相肽合成快速高效的优点。

微波促进催产素和赖氨加压素环肽的固相合成

以RinkAmide-MBHA树脂为载体,采用Fmoc/tBu正交保护固相合成策略,运用微波照射促进,先快速高效地合成得到载有催产素或赖氨加压素还原型多肽的树脂,再将连接在树脂上的各还原型多肽分别在微波促进条件下和常温条件下环合形成二硫键制得环肽,最后用ReagentK试剂将环肽从树脂上裂解下来得到目标多肽的粗品.利用HPLC法测定不同固相环合条件下得到的多肽粗品纯度,结果显示经微波促进固相环合得到的多肽粗品纯度明显高于常温条件下得到的多肽粗品纯度.粗品最后经过反相制备高效液相系统纯化并冻干得到目标多肽纯品,通过电喷雾质谱法测定了制得的还原型多肽及相应环肽的分子量,验证了它们的结构.

固相合成胸腺五肽(TP5)

采用Fmoc固相多肽合成中的活化酯方法和2,6-二氯苯甲酰氯(DCB)混合酸酐法,对Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH与Wang树脂反应中的反应级数和表观活化能进行了研究,并采用常规方法和微波强化方法分别进行了胸腺五肽的合成.实验结果表明,活化酯方法的反应级数为1.855,表观活化能15.24kJ/mol,混合酸酐法的表观活化能为35.14kJ/mol.与传统方法相比,微波将缩合反应速率提高了30倍以上,氨基酸过量倍数也从传统的三倍降低到两倍.

微波强化固相合成伐普肽

以伐普肽为研究对象,用固相合成方法,并对偶合反应进行微波强化.利用正交实验研究了微波强化对偶合反应的促进作用.正交实验结果用多元非线性回归分析和响应面法优化,确定优化条件为:反应时间5 min,包括1 min升温、4 min维持,最高反应温度60 ℃.与常规偶合反应相比,提高反应效率12～36倍.常规接肽反应保护氨基酸用量与固相合成树脂摩尔数之比为3倍,在优化的微波强化反应条件下,保护氨基酸用量减少为过量1倍;保护氨基酸与树脂的偶合效率明显提高,伐普肽得率从常规合成的48%提高到76%.其结构经质谱、高分辨质谱、红外光谱、核磁共振氢谱证实,与目标化合物的结构一致.

人胸腺肽α_1的固相合成及体外活性研究

目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究 ,并对合成产物进行活性评价。方法采用对碱敏感的Nα 芴甲氧羰基 (Fmoc)作为α 氨基的保护基 ,以Fmoc Asn(Trt) WangResin为起点 ,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1。与Nα Fmoc 基团配套的保护策略还有 :叔丁氧羰基 (Boc)保护Lys的侧链氨基 ,叔丁酯基 (OtBu)保护Asp、Glu的侧链羧基 ,叔丁氧基 (tBu)保护Ser、Thr的侧链羟基 ,三苯甲基 (Trt)保护Asn的侧链酰胺基。采用DCC HOBt缩合剂法进行接肽反应 ,茚三酮定性显色法和水杨醛定量自由氨基检测法控制反应进程 ,肽段最后用TFA DCM(V∶V=1∶1 )定量地从树脂上切除。结果胸腺肽α1总产率为 3 3 2 %。纯化后的产物 ,经SDS PAGE和RP HPLC鉴定 ,纯度为98 8%以上 ,活性与日达仙对照品相当。结论Nα 芴甲氧羰基保护策略的固相合成方法操作简便、条件温和、副反应少 ,产品纯度高、收率高。

穿膜肽TAT的固相合成及体外活性研究

目的以固相合成法合成穿膜肽TAT,并对合成产物进行活性评价。方法采用Nа-芴甲氧羰基(fluorenyl-methyloxyloxycarbonyl,FMOC)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成穿膜肽TAT。应用高效液相色谱和质谱仪测定其纯度及相对分子质量;荧光显微镜观察穿膜肽TAT介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,pEGFP)质粒在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果以评价穿膜肽TAT的生物活性;MTT法检测穿膜肽TAT与质粒DNA复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响。结果高效液相色谱和质谱鉴定所制备穿膜肽TAT的纯度为96.6%,相对分子质量1880。它能够携带质粒DNA穿过细胞膜进行基因转染,并对细胞活性无明显影响。结论采用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的穿膜肽TAT。

西仑吉肽的固相合成

采用Fmoc固相合成法,选用2-氯三苯甲基氯树脂作为固相载,HBTU/HOBt和HATU/HOBt为缩合剂,合成全保护线性肽。以V(DCM)∶V(THF)=1∶1为溶剂,HATU/HOBt为缩合剂,合成全保护环肽。最后脱除保护基得终产物西仑吉肽。

场强化——微波、超声波技术在固相多肽合成中的应用

综述了两种场强化技术——微波和超声波在固相多肽合成中的研究进展,重点介绍了它们的作用机理、在强化多肽合成中的应用及反应器设计进展情况。

固相多肽合成中氨基酸保护的研究进展

介绍了多肽固相合成反应原料———保护氨基酸的制备、应用进展,详细讨论了氨基酸的α-氨基、α-羟基以及侧链活性基团的各种新型保护基团,概括了新型保护氨基酸的结构特点和应用条件,并对保护氨基酸今后的发展方向进行了展望。

六胜肽的固相合成

采用多肽同相合成方法,全程在无水环境中,以Fmoc-保护基保护的氨基酸和氨基树脂为原料,经N-二异丙基乙胺(DIEA)、六氟磷酸苯骈三唑-1-基-氟基三吡咯烷基(PyBoP)、I-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)缩合,再用切割试剂把粗品从氨基树脂上切下来,得到目标粗肽,最后经纯化分离得到纯度在95%以上的目标肽。

抗鹅膏肽直链的固相合成分析

抗鹅膏肽直链由10个氨基酸组成.采用Fmoc固相合成法,以王氏树脂为固相载体,HBTU-HOBT为缩合试剂,50%哌啶的二氯甲烷溶液为脱保护试剂,50%醋酐的吡啶溶液为酰化试剂;配制三氟乙酸∶乙二硫醇∶水体积比为95.0∶2.5∶2.5,用其作为脱除试剂,将肽链从树脂上切割下来以后,用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分析,纯度为64.22%,质谱(MS)进行鉴定,分子量为1 165.结果表明:上述实验方法适合于抗鹅膏肽直链的合成.

固相合成法制备环肽Hymenistatin-1及其含statine的类似物

目的研究固相合成法制备Hymenistatin-1[HS-1,序列为cyclo-(-Pro-Pro-Tyr-Val-Pro-Leu-Ile-Ile-)]及其statine类似物的工艺步骤和影响因素。方法采用Fmoc或Boc保护α-氨基,以HBTU/NMM为缩合剂进行直链肽接肽反应、以BOP/HOBt/DIEA为缩合剂进行环化固相合成HS-1及其类似物。用色谱仪和质谱仪对合成的环肽及其杂聚肽类似物进行纯化鉴定。结果多肽合成收率可达65%,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱对合成的多肽进行纯化后纯度均达到90%以上,通过基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪(MALDI-MS)检测所合成的环肽及环肽类似物的分子质量与理论分子质量相符。结论成功合成出了较高纯度的目标多肽化合物。

固相合成疏水肽纯度的HPSEC评价

目的 快速评价固相合成疏水肽P44的纯度。方法 本文为避开反相梯度色谱可能潜在的影响因素 ,运用高效体积排阻色谱 (HPSEC)原理 ,选用耐一定浓度有机相的Ultrahydrogel 2 5 0高效凝胶分析柱对固相合成疏水肽P44进行分析 ,并通过 996二极管阵列检测器对其纯度进行了客观的评价。结果 Ultrahy drogel 2 5 0高效凝胶分析柱分离P44疏水肽目的肽峰纯度通过 996纯度鉴定 ,目的肽纯度为 70 .91% ;与分子筛柱与反相柱两步纯度评价的结果一致 (70 .90 % )。

Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性

【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。

多肽固相合成法中的3个关键点

多肽固相合成(SPPS)已成为多肽研究的一种常用手段,近年来多肽固相合成发展迅速,利用SPPS法几乎能够高收率地制备多肽。综述了固相合成中3个关键点:合成中常用的树脂载体、保护策略和缩合剂。

精子肽的固相合成及其在免疫性不孕诊断中的应用研究

目的合成特异性精子肽,并对其抗原性进行初步评价,从而探讨检测抗精子抗体的ELISA试剂盒制备。方法应用固相多肽合成技术,以Fmoc基团保护的氨基酸为原料,合成特异性精子肽。以高效液相色谱(HPLC)技术鉴定纯化,并用ELISA检测其抗原性。结果成功合成了所需肽段,HPLC结果显示纯度达95%以上。该合成肽包被的ELISA试剂盒检测抗精子抗体的结果,与商品化试剂盒相比较符合率达90.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度特异性的精子肽,且所合成肽段具有良好的抗原活性,包板建立的ELISA方法可以用于免疫性不孕中抗精子抗体的检测。