固相致敏红细胞吸附技术快速检测肝硬化患者血清中TIMP-1

目的 建立一种改良固相致敏红细胞吸附技术(SPASE)用于快速检测肝硬化患者血清中 TIMP- 1.方法 用 TIMP- 1单克隆抗体包被微量血凝板 ,加热冲洗后加入待检血清标本 ,最后加入单克隆抗体致敏红细胞 .应用致敏红细胞作为指示系统 ,观察红细胞吸附状况来判定结果 .结果 SPASE法全过程仅需要 2 .5～ 3h,40 8例肝病患者血清检测 TIMP- 1结果为急性肝炎组检出阳性率 16 .4% ;慢性肝炎组阳性率为 33.3% ;肝硬化组阳性率为 73.6 % .结论 血清中 TIMP- 1的变化可作为肝纤维化较为有用的诊断指标 .SPASE法具有较高的敏感性、特异性和快速性 ,试剂用量少 ,且不需复杂的仪器设备 ,实验程序又简单 。

固相致敏红细胞吸附技术快速检测肝硬化患者血清中TIMP-1

目的 建立一种新的固相致敏红细胞吸附技术(SPASE)用于快速检测肝硬化患者血清中TIMP-1。方法 用TIMP-1单克隆抗体包被微量血凝板,加热冲洗后加入待检血清标本,最后加入单克隆抗体致敏红细胞。应用致敏红细胞作为指示系统,观察红细胞吸附状况来判定结果。结果 SPASE法全过程仅需要2.5～3小时,408例肝病患者血清检测TIMP-1结果为急性肝炎组检出阳性率16.41％;慢性肝炎组阳性率为33.31％;肝硬化组阳性率为73.58％。结论 血清中TIMP-1的变化可作为肝纤维化较为有用的诊断指标。SPASE法具有较高的灵敏性、特异性和快速性,试剂用量少,且不需复杂的仪器设备,加之实验程序简单,更适于医院及基层医疗单位应用。

自动固相红细胞吸附系统测定弱D抗原

背景 微板凝集法（MAMs）和柱凝集技术广泛应用于红细胞分型，这些技术能够实现自动化。一些检测项目，如弱D的测定，需要手工检测。本文报道在一台全自动系统中，研究用固相红细胞吸附技术（SPRCA）测定弱D的可能性。设计和方法2609份标本表现为D-或不完全凝集反应，分析其是否存在弱D表型。以弱D试管测试法（抗球蛋白法）和新的SPRCA法对这2609份标本进行测定。如果检测出弱D，还要测定有关的D抗原决定簇，以及是否为部分D表型。

酶联免疫吸附试验在兽药残留检测应用中的体会

酶联免疫吸附试验(ELISA)是当前应用广泛的一项定性/半定量检测抗体(抗原)的免疫酶检测技术。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合,将待测物质(违禁物或兽药小分子)作为抗原与其特异性抗体反应,再利用酶的高效催化性将此反应效果放大,用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,存在一定的线性相关关系,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。目前,已广泛应用于兽药残留检测、生物毒素检测、农药残留检测、微生物检测、转基因产品检测等多个领域。

酶联增敏试验——一种低麻风菌抗体检测法

在间接ELISA中使用了增敏剂(SR)。用增敏的(SM)与未增敏的(OM)ELISA比较,结果表明:1.对高抗体(OD≥2)和高BI(≥4^+)血清,增敏效果不明显,但用于中抗体(OD<2和>1)、低抗体(OD<1)和低BI(≤3^+或0)血清则增敏明显,且有随血清释度增高而增效的趋势;2.两法均高度敏感(OM在MB中阳性率100％,在PB为84％;SM在MB和PB均为100％)和特异(两法均100％地特异),但SM比OM更敏感,这使在PB中(u=2.08,p<0.05)检测低抗体有了可能;3.显色剂 TMB可望代替OPD[t=0.333(OM)和0.101(SM),p>0.05],这对保护试验者的健康有好处,4.用SM可将整个试验缩短1小时而不影响结果。作者认为SM比OM敏感、特异、简单而快速,对检测低抗体血清有相当潜力。

精子肽的固相合成及其在免疫性不孕诊断中的应用研究

目的合成特异性精子肽,并对其抗原性进行初步评价,从而探讨检测抗精子抗体的ELISA试剂盒制备。方法应用固相多肽合成技术,以Fmoc基团保护的氨基酸为原料,合成特异性精子肽。以高效液相色谱(HPLC)技术鉴定纯化,并用ELISA检测其抗原性。结果成功合成了所需肽段,HPLC结果显示纯度达95%以上。该合成肽包被的ELISA试剂盒检测抗精子抗体的结果,与商品化试剂盒相比较符合率达90.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度特异性的精子肽,且所合成肽段具有良好的抗原活性,包板建立的ELISA方法可以用于免疫性不孕中抗精子抗体的检测。

酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验（以下简称ELISA）：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。

血清学诊断肝纤维化新指标——金属蛋白酶组织抑制因子检测方法学建立及应用评价

目的 自行建立一种改良固相致敏红细胞吸附技术 (SPASE)用于快速检测肝硬化病人血清中金属蛋白酶组织抑制因子 1,2 (TIMP 1和TIMP 2 ) ,同时研究TIMP 1和TIMP 2在肝硬化病人肝组织中的定位及表达状态 ,以及肝组织TIMPs与血清TIMPs的相关性。探讨血清中TIMP 1和TIMP 2可否作为肝纤维化的血清学诊断新指标。方法 应用自行建立的SPASE检测 10 82例肝病病人 (其中肝硬化 3 10例 )血清标本中的TIMP 1和TIMP 2。用原位杂交及免疫组织化学技术分别检测 40例肝硬化病人活检肝组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原的表达 ,并与病人自身血清检测结果对比。另检测 2 0例正常肝组织作为对照。结果 SPASE法特异性中和抑制试验示中和抑制率均在 70 %以上 ,检测 3 10例肝硬化病人血清中TIMP 1和TIMP 2的阳性率分别为 79.68%和 65 .16%。 40例肝硬化病人肝组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原表达阳性率为 10 0 % ,TIMP 1表达强度高于TIMP 2 (P <0 .0 1) ;阳性信号主要位于肝细胞胞质内 ,未见细胞核表达。 40例肝硬化肝活检病人血清检测结果 ,TIMP 1阳性率为 10 0 % ,TIMP 2阳性率为 77.5 % ( 3 1/4 0 )。正常肝组织无一例有TIMPs相关抗原表达。结论 TIMPs定位于肝硬化病人的肝细胞胞质内 。

以精子抗原肽为抗原的抗精子抗体ELISA检测方法的建立

目的建立组合多个精子抗原肽为抗原的检测抗精子抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法用PS3全自动多肽合成仪合成4个特异精子肽,并经反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化和质谱鉴定。用ELISA检测4个合成肽的抗原性,基于对这些合成肽抗原活性的评价,将4个精子抗原肽混合后(组合肽)作为抗精子抗体(AsAb)检测用抗原。结果合成了实验所需要的抗原性肽段,RP-HPLC结果显示纯度达95%以上。以组合肽为抗原建立的检测AsAb的间接ELISA方法,与商品化试剂盒相比符合率为95.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度的精子抗原肽,以组合的精子抗原肽作为包被抗原建立的ELISA方法可提高AsAb检测的灵敏度。

两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比

为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。

人精子蛋白17抗原肽的合成及其在抗精子抗体检测中的应用研究

目的:合成人精子蛋白17的线性B细胞表位肽(118-127aa),并以此为抗原建立抗精子抗体(AsAb)检测的ELISA方法。方法:用PS3全自动多肽合成仪合成人精子蛋白17抗原肽,并经反相高效液相色谱纯化和质谱鉴定。该合成肽作为ELISA法的包被抗原来检测血清中的AsAb(IgG)。结果:合成了实验所需要的抗原性肽段,高效液相色谱法(HPLC)结果显示其纯度为95.5%。以该合成肽为抗原建立的检测AsAb(IgG)的间接ELISA方法,与商品化试剂盒相比符合率为93.3%。结论:所合成的人SP17抗原肽具有较好的抗原活性,可作为间接ELISA法的包被抗原用于抗精子抗体的检测。

常用血小板抗体检测方法的临床应用比较

目的选用国内外常用的单克隆抗体固相血小板抗体技术(MASPAT)、抗原捕获酶联免疫吸附技术(MACE)、固相红细胞黏附技术(SPRCA)和微柱凝胶技术(MGIA)检测血小板抗体,对4种方法的结果进行比较研究,为临床开展血小板抗体检测提供有价值的参考。方法选择80例输注血小板达3次及3次以上者和15例正常献血员(对照组),以MASPAT法为参比方法,使用MACE、SPRCA和MGIA检测标本血小板抗体。结果 MACE法、SPRCA法与MASPAT法结果差异无统计学意义(P>0.05),MGIA与MASPAT法结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MACE与SPRCA法敏感度与特异度均高于MGIA法,而SPRCA法较MACE法实验时间短,不需特殊仪器,且能进行血小板交叉配合实验,适于临床广泛应用。

高海拔低氧环境人血清肌钙蛋白I调查分析

目的 探讨在高海拔低氧环境时人心肌变化。方法 采用固相酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,测定海拔 4 70 0米地区 10 0名健康男性的心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量。结果 10 0名健康男性血清cTnI测定值均 >1ng/ml,为 (1.37± 0 .18)ng/ml,与该方法正常人参考值比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 提示在高海拔低氧环境时 ,人的心肌存在一定程度的损伤。

儿童葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原检测参考范围的建立

目的建立儿童葡萄糖-6-磷酸异构酶（G6PI）抗原浓度检测的临界值。方法采用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）检测775名正常对照者[分别按年龄（≤3岁、4-6岁、7-9岁和〉9岁）和性别（男、女）分组]及53例类风湿关节炎（RA）患儿G6PI抗原浓度。采用受试者工作特征（ROC）曲线确定G6PI的临界值。结果≤3岁、4-6岁、7-9岁和（9岁正常对照者G6PI抗原浓度分别为0.126±0.069、0.127±0.079、0.129±0.072和（0.126±0.072）mg/L,各组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。以性别分组,男、女G6PI抗原浓度分别为0.124±0.089和（0.123±0.065）mg/L,2组间差异无统计学意义（P〉0.05）。RA组G6PI抗原浓度[（0.517±0.298）mg/L]显著高于正常对照组[（0.127±0.073）mg/L,P=0.00]。当临界值在0.27 mg/L时,G6PI抗原用于RA诊断的特异性为95.1%,敏感性为79.2%;当临界值在0.32 mg/L时,其特异性为96.2%,敏感性为65.4%。结论深圳地区儿童G6PI抗原检测当临界值在0.27和0.32 mg/L时,具有较好的诊断符合率,且无年龄、性别差异。

血清金属蛋白酶组织抑制因子-1和抑制因子-2在不同肝病中的意义

目的 建立一种改良固相致敏红细胞吸附技术 (SPASE) ,用于快速检测各种肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制因子 1 , 2 (TIMP 1 ,TIMP 2 ) ,了解血清TIMP 1和TIMP 2在各种肝病患者中的意义。方法 用TIMP 1和TIMP 2单克隆抗体分别包被微量血凝板 ,加热冲洗后加入待检血清标本 ,最后加入单克隆抗体致敏红细胞。用致敏红细胞作为指示系统 ,观察红细胞吸附状况来判定结果。结果 SPASE法全过程仅需要 2 5～ 3h ,共检测 6 5 4例肝病患者血清标本 ,TIMP 1和TIMP 2阳性率分别为急性肝炎组 1 7 3 9%、1 4 1 3 % ;慢性肝炎组 3 3 1 9%、2 7 88% ;肝硬化组 82 84%、6 7 1 6 % (P <0 0 0 1 )。结论 TIMP 1和TIMP 2表达的变化可作为肝纤维化较为有用的诊断指标 ,TIMP 1的诊断意义更大。SPASE法具有较高的敏感性、特异性和快速性 ,不需复杂的仪器设备 ,操作简单 ,尤适于医院及基层医疗单位。

单克隆抗体酶联免疫方法检测人血清胰岛素原及其应用

目的:建立灵敏、特异的检测人血清中胰岛素原的酶联免疫吸附试验并应用于临床与流行病学研究. 方法:选择2种mAb并引入生物素与亲和素放大系统来建立酶联免疫分析方法,一种抗C肽mAb结合到酶反应板上作为固相抗体,另一种生物素标记的抗胰岛素抗体作为液相抗体,将该检测方法应用于流行病学研究(n=1196). 结果:本法灵敏度0.83 pmol/L,与1 200 pmol/L胰岛素、3 960 pmol/L C肽无交叉反应,线性标准范围0.83-142 pmol/L.批内变异系数小于11.4%,批间变异系数小于11.2%.流行病学研究结果显示胰岛素原的含量与体重指数、腰围、收缩压、舒张压、胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、危险因素数目呈正相关, 与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关. 结论:本法适用于在临床研究及流行病学研究中检测人血清中胰岛素原的含量.β细胞功能受损与纤溶功能的紊乱可能是高胰岛素原与心血管危险因素关联的原因.