固相酶联免疫测定法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用

目的探讨固相酶联免疫测定(ELISA)法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用价值。方法选取登革病毒感染早期患者血清171份,非登革病毒感染发热患者血清11份,正常人血清10份,采用ELISA法检测全部192份血清的登革病毒NS1抗原和IgM抗体;采用逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)技术对发病5 d内的125份血清进行扩增和鉴定分型;并采用C6/36细胞微量培养法对发病第1、2天的41份血清进行登革病毒分离培养。结果登革病毒感染患者发病2 d内、3～5 d以及6～10 d血清NS1抗原的检出率分别是92.7%(38/41)、83.3%(70/84)、10.9%(5/46);IgM抗体的检出率分别是2.4%(1/41)、51.2%(43/84)、97.8%(45/46);非登革病毒感染的发热患者及正常人血清中,有1例疟疾患者血清登革病毒IgM抗体呈阳性,NS1抗原无一例阳性。RT-PCR在登革病毒感染患者发病第1、2天和3～5天的检出率分别是85.4%(35/41)、83.3%(70/84);登革病毒感染患者发病第1、2天血清的病毒分离培养阳性率分别是80.0%(16/20)、38.1%(8/21),总分离率58.5%(24/41);RT-PCR-RFLP分型鉴定技术及间接免疫荧光法(IFA)均证实2006年广州流行株为登革Ⅰ型病毒。结论ELISA法检测登革病毒NS1抗原操作技术成熟,且具有敏感性高、特异性好的特点,对登革病毒感染的早期诊断和疫情的早期控制具有重要意义,适合于基层医疗机构常规应用。

自上而下法评定固相酶联免疫吸附法测定食用油中黄曲霉毒素B_1的不确定度

目的利用自上而下方法评定固相酶联免疫吸附法测定食用油中黄曲霉毒素B_1含量的不确定度。方法在控制不确定度来源或程序的前提下,得出试验数据、质控数据进行评定,通过计算偏移和实验室内复现性2个分量,最后合成得到该方法的测量不确定度。结果按照自上而下法的公式计算,本研究测得食物油中黄曲霉毒素B_1含量为(46.25±6.28)μg/m L,扩展不确定度U_(rel)为14%(k=2)。结论使用自上而下法对固相酶联免疫吸附法测定食用油中黄曲霉毒素B_1含量进评定过程是实用和可靠的,可以为其他同类型的检测方法进行测量不确定度评定时所借鉴,也为实验员在实验质量控制方面提供参考。

固相酶联免疫法测定花生油中黄曲霉毒素B_1的不确定度评定

本文分析利用固相酶联免疫吸附(ELISA)原理测定花生油中黄曲霉毒素B_1所引入的不确定度,根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的规定,评定实验中所涉及的重复测量、样品的称量和稀释、工作曲线、加标回收等引入的不确定度分量。

酶联免疫吸附法测定红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤浓度的方法建立及其初步应用

目的建立检测红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤（methotrexate polyglutamates,MTXPG）的酶联免疫吸附测定法（ELISA）方法。方法将含有MTXPG的红细胞采用冻融法、化学裂解法、酶法、超声破碎法等方法裂解,加入血清与裂解液在抗坏血酸、巯基乙醇保护液作用下将MTXPG转化为甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）,转化液采用高氯酸、三氯乙酸及饱和硫酸铵溶液沉淀蛋白,最后将溶液p H值调整为3.0～9.0,采用ELISA检测MTX浓度。经方法学考核后,检测临床标本对方法准确性进行评价。结果发现冻融法与冻融法裂解红细胞显著优于酶法和化学裂解法（P〈0.05）,抗坏血酸配制的保护液明显优于巯基乙醇（P〈0.05）,转化液37℃孵育3 h时MTXPG转化完全,高氯酸、三氯乙酸、饱和硫酸铵溶液3种蛋白沉淀剂无明显差异（P〉0.05）,最适p H为6～8,最佳p H值为6.8。浓度在0.2～10.0 ng/m L范围内线性关系良好（r=0.9967）,回收率为96.6%～103.3%,RSD为8.0%～14.3%,日内差异为1.7%～11.7%,日间差异为7.4%～13.5%,RSD均小于15%。检测患者红细胞内MTXPG浓度为（64.75±28.45）ng/m L。结论建立的红细胞内MTXPG的ELISA法有良好的准确性和特异性,方法操作简单易行,可用于临床红细胞内MTXPG浓度的监测。

荧光免疫测定法与酶免疫测定法、放射免疫测定法对庆大霉素的测定比较

荧光免疫测定法(FIA):荧光免疫测定试剂盒内含N-二(羟乙基)甘氨酸缓冲液、抗体-酶试剂和荧光基因性庆大霉素试剂等三种试剂。另备有标准液(含硫酸庆大霉素浓度为1.0,4.0,8.0和12.0μg/ml)。测定时,用N-二(羟乙基)甘氨酸缓冲液3.0ml 分别将血清样品液60μl 及标准液60μl 稀释。

人精液免疫抑制因子的固相酶联免疫测定法

本工作首次建立了人精浆免疫抑制因子-DF_2的固相酶联免疫测定法,并用于测定正常人精浆DF_2的含量。结果表明,本法灵敏度1μg/ml,方法稳定,操作简便。53例正常中国人精浆DF_2平均含量为1.32±0.72mg/ml,为今后免疫不育及性传播性疾病研究提供了有价值的技术与基础数据。

血清甲状腺激素（T_3、T_4）的固相酶联免疫测定──方法学探讨及临床应用

本实验用β－半乳糖苷酶分别标记Ｔ＿３及Ｔ＿４，均获得具有良好酶活性及免疫原活性的酶－抗原结合物。以国产聚苯乙烯微孔扳为固相载体，建立了血清Ｔ＿３及Ｔ＿４的固相酶联免疫测定法。方法学检测数据如下：最小检出量，Ｔ＿３为０．２ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｔ＿４４．０ｎｍｏｌ／Ｌ；回收率，Ｔ＿３为１．０２，Ｔ＿４０．９８；批内变异系数，Ｔ＿３为７．２％，Ｔ＿４５．３％；批间变异系数，Ｔ＿３为８．２％，Ｔ＿４１０．５％；两种抗血清对相应抗原的同类物的交叉反应率都极低。用本法与放免法同时测定３０份标本，同一激素的两法测定结果呈显著相关。

脑卒中患者血清超敏C-反应蛋白、神经元烯醇化酶的变化

目的:探讨脑卒中患者血清超敏C-反应蛋白(Hs-CRP),神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与脑卒中病灶大小和预后的关系。方法:收集脑卒中患者200例为病例组,选择200例性别、年龄和种族等与病例组相匹配的无脑卒中者作为对照组,用胶乳增强免疫比浊法检测血清Hs-CRP,并比较两组血清总胆固醇(TC),三酰甘油(TG)水平的差异。用固相酶联免疫法测定脑卒中患者住院时及住院第1天、3天、5天和15天时血清NSE浓度的动态变化。通过CT检查脑出血或梗死病灶体积。结果:脑卒中组Hs-CRP(6.25±0.25mg.L-1)高于对照组(2.42±0.18mg.L-1),差异具有统计学意义(P<0.01),脑卒中组TC(5.54±0.72mmol.L-1)高于对照组(4.42±0.68mmol.L-1),差异具有统计学意义(P<0.05),两组TG水平差异无统计学意义。脑梗死、脑出血组在住院时及住院第1天、3天和5天时的平均血清NSE水平均比对照组显著增高(P<0.01),NSE浓度和梗死出血体积以及神经功能缺损之间存在密切关系(P<0.01),但在第15天脑卒中组血清NSE水平与对照组比较差异无统计学意义。结论:Hs-CRP和NSE水平变化可能是判断脑损伤和评价预后的一个敏感指标。

成都市食品从业人员乙型肝炎病毒标志物检测结果分析

目的 :进一步了解成都市食品从业人员乙型肝炎病毒感染状况及提高对 HBs Ag携带者管理水平。方法 :应用固相酶免疫测定 (EL ISA )法检测了 32 5 2 0名食品从业人员血清中的 HBs Ag、 HBe Ag、抗 - HBc。结果 :检出 HBs Ag阳性194 8人 ,阳性率 5 .99% ,其阳性率男性 (7.6 5 % )明显高于女性 (5 .14 % )差异有极显著性 (P<0 .0 0 5 )。 194 8名 HBs Ag阳性者中 ,HBe Ag阳性 4 74人 ,阳性率 2 4 .33% ,其阳性率随年龄递增而下降 (χ2 =81.4 5 ,P<0 .0 0 1)。抗 - HBc阳性 14 83人 ,阳性率 76 .13% ,阳性率随年龄增长而增高 (χ2 =7.4 8,P<0 .0 2 )。血清标志物组合摸式中以第 1种类型所占比例最高6 0 .93% ,第 2种类型所占比例最低 9.0 3%。结论 :成都市食品从业人员 HBs Ag阳性检出率较 1993年有大幅下降 ,较全国人群低。对 HBs Ag阳性者 ,从血清角度判断 HBV复制和传染性时 ,应从整体出发 。

急性胰腺炎患者vW因子、P-选择素的变化及临床意义

目的 探讨急性胰腺炎(AP)患者血浆von Willebrand因子(vWF)、P-选择素的变化及临床意义。方法 采用双抗体夹心固相酶免疫法测定34例AP患者和30例健康献血者的血浆vWF、P-选择素水平,对其进行相关性分析。结果 AP患者发病24h的血浆vWF、P-选择素水平分别为(214.6±53.2)％和(81.8±17.7)μg/L,显著高于正常对照组的(107.5±29.6)％和(14.7±4.5)μg/L(P<0.01)。重症AP患者血浆vWF、P-选择素水平分别为(251.9±62.7)％和(95.9±21.7)μg/L,显著高于轻型AP患者的(195.8±35.7)％和(73.5±16.1)μg/L(P<0.01)。vWF、P-选择素预测重症AP的敏感性、特异性和准确性分别是91.7％、86.4％、88.2％和58.3％、81.8％、73.5％。结论 AP患者存在血管内皮损伤和血小板的过度活化。测定AP患者血浆vWF水平可早期预测病情的严重程度。

酶免疫测定法对诺卡氏菌病的快速诊断

目前,人类对诺卡氏放线菌病已获得有效的治疗方法,因而对该病准确而及时的诊断显得至关重要。本文作者应用酶免疫测定法(EIA)诊断诺卡氏放线菌病,收到了比较满意的效果。作者采用一种由 Sugar 等人最近鉴定的特异性诺卡氏放线菌55KDa 蛋白质作为抗原。其制备方法为:将47N 诺卡氏放线菌株在Long’s 培养基中生长2周。然后将其离心,其滤过液用65%的硫酸铵沉淀。

溃疡性结肠炎患者血清IL-18的变化及意义

目的 :探讨 IL -18在溃疡性结肠炎 ( U C)发病中的作用。方法 :采用固相酶联免疫分析( ELISA)法检测 36例 U C患者血清 IL-18含量。结果 :U C活动期患者血清 IL-18含量较健康对照组明显升高 ( P<0 .0 1) ,并与病情的轻重和病变的范围有关 ( P<0 .0 5 ) ,而 U C缓解期患者与健康对照组间无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论 :IL-18可能参与 U C的发病 ,血清 IL-18可作为 U C病情判断的参考指标。

婴儿急性下呼吸道感染与呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、肺炎支原体的关系

目的 探讨呼吸道合胞病毒 (RSV)、巨细胞病毒 (CMV)、肺炎支原体 (MP)的病原学特点及其与婴儿急性下呼吸道感染 (ALRI)的关系。方法 采用固相酶联免疫吸附法对ALRI婴儿联合进行血清RSV IgM抗体、CMV IgM抗体、MP IgM抗体进行定性检测。 结果 检测ALRI患儿 189例 ,单一病毒抗体阳性 10 6例(5 6 .0 9% ) ,RSV IgM抗体 5 7例 (30 .16 % )、CM IgM抗体 33例 (17.14 % )、MP IgM抗体 16例 (8.4 7% ) ,两种病原体混合感染 19例。RSV感染发生喘息 4 0例 (5 1.2 8% ) ,明显高于无喘息 (15 .32 % ) (P <0 .0 1)。CMV感染 2 8例喘息发生率显著高于无喘息 (P <0 .0 1)。两组MP感染率 (4.6 0 %和 11.76 % )差异无统计学意义。CMV感染中 5 7.5 8%肝功异常 ,胸片 5 4 .5 5 %呈间质性改变。结论 婴儿ALRI中RSV是其主要病原 ,易致喘息 ,CMV感染是小婴儿ALRI发生喘息的重要原因 ,常伴肝脏损害 。

重视血清乙肝标志物少见模式的临床意义

目的针对乙肝标志物临床检测和结果认读中存在的一些误区,提醒注意和重视。方法选取本院2008年血清乙肝标志物定性检测少见模式中所占比例最大的两种4.5阳性和单5阳性共313例用固相酶联免疫吸附测定(ELISA)法进行乙肝两对半定性检测,用电化学发光(ECL)法进行乙肝两对半定量检测,用聚合酶链反应(PCR)法进行HBV-DNA定量检测,同时进行常规肝功能检测,并对结果加以分析。结果4.5阳性组ECL乙肝两对半定量检测出1.4.5阳性24例,1.2.4.5阳性14例,共占27.74%,HBV-DNA定量阳性12例,占8.76%,肝功能明显异常5例,占3.65%;单5+组ECL乙肝两对半定量检测出1.5阳性39例,1.2.5阳性12例,共占28.98%,HBV-DNA定量阳性18例,占10.23%,肝功能明显异常10例,占5.62%。各种检测数据两组均无显著性差异(P(0.05)。结论HBsAg阴性少见模式中有相当部分病例有传染性和持续肝脏功能损伤,可见ELISA乙肝两对半定性实验中少见模式有着重要的临床意义,不可漏掉和误判。

过敏性紫癜患者可溶性CD_(23)水平的研究

目的 :探讨 s CD2 3 在过敏性紫癜 (H SP)发病中的作用。方法 :采用固相酶联免疫分析 (EL ISA)法检测 5 5例 HSP患者血浆 s CD2 3 的水平。其中急性期 2 8例 ,缓解期 2 7例 ,并以 2 5例健康体检者为对照组。结果 :HSP急性期患者血浆s CD2 3 含量较健康对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,而 HSP缓解期患者与健康对照组间无显著差异。 HSP患者血浆 s CD2 3 水平与ESR呈正相关 (r =0 .46 2 ,P <0 .0 1) ,但与 CRP间无相关性。结论 :s CD2 3 与 HSP的发病密切相关 ,血浆 s CD2 3 水平检测有助于对

过敏性紫癜患儿外周血IL-16、IL-18水平的研究

目的探讨IL-16、IL-18在过敏性紫癜患儿中的应用价值。方法采用固相酶联免疫分析法检测69例过敏性紫癜患儿血清IL-16、IL-18水平。结果过敏性紫癜急性期患儿血清IL-16、IL-18较健康对照组明显升高(P<0.01),而过敏性紫癜缓解期患儿与健康对照组间无显著差异(P>0.05),过敏性紫癜患儿IL-16与IL-18呈正相关。结论 IL-16、IL-18可能参与过敏性紫癜血管炎的发病,IL-16、IL-18的检测与过敏性紫癜病情发展有一定关系。

支气管哮喘患者IL-13的变化及意义

目的 :探讨 IL-13在支气管哮喘 ( BA)发病中的意义。方法 :采用固相酶联免疫分析( EL ISA )法检测 75例支气管哮喘患者血清 IL -13水平。结果 :支气管哮喘急性期患者血清 IL -13水平较缓解期和健康对照组明显升高 ( P <0 .0 1) ,而哮喘缓解期患者与健康对照组间无显著差异 ( P >0 .0 5 )。外源性哮喘患者急性期血清 IL-13水平明显高于内源性哮喘患者 ( P<0 .0 5 ) ,而缓解期无明显差异 ( P>0 .0 5 )。结论 :IL-13可能参与支气管哮喘的发病 ,血清

过敏性紫癜患者IL-18、VEGF水平的研究

目的探讨IL-18、VEGF在过敏性紫癜患者中的应用价值。方法采用固相酶联免疫分析法检测75例过敏性紫癜患者血清IL-18、VEGF水平。结果过敏性紫癜急性期患者血清IL-18、VEGF较健康对照组明显升高(P<0.01),而过敏性紫癜缓解期患者与健康对照组间无显著差异(P>0.05),过敏性紫癜患者IL-18与VEGF呈正相关。结论IL-18、VEGF可能参与过敏性紫癜血管炎的发病,IL-18、VEGF的检测与过敏性紫癜病情发展有一定关系。