固相酶联免疫斑点技术检测递增负荷过度训练大鼠细胞免疫机能变化研究

目的:建立大鼠脾脏淋巴细胞中Th1/Th2型淋巴细胞亚群表达的固相酶联免疫斑点(ELISPOT)技术检测方案,进一步比较Th1/Th2淋巴细胞和CD4+/CD8+在大鼠递增负荷过度训练过程中的改变,为筛选最佳免疫学评价指标提供参考。方法:雌性SD大鼠进行9周递增负荷跑台训练,分别在训练的第1周、第3周、第9周训练结束后的36小时,以及恢复1周后处死大鼠。采用不同种类刺激剂、不同刺激剂浓度刺激不同数量大鼠脾脏淋巴细胞,建立最佳ELISPOT检测方案。检测大鼠血红蛋白、睾酮、皮质酮,评估疲劳模型的建立,并对Th1/Th2型淋巴细胞亚群以及传统免疫学指标CD4+/CD8+进行动态观察。结果:建立最佳ELISPOT技术检测方案:PMA和Ionomycin联合刺激。刺激物浓度:检测γ干扰素(IFN-γ)时PMA浓度为2.5ng/ml,检测白细胞介素4(IL-4)时PMA浓度为10ng/ml;检测IFN-γ时Ionomycin浓度为0.05μg/ml,检测IL-4时Ionomycin浓度为0.2μg/ml。细胞浓度:3×104cells/孔(IFN-γ),60×104cells/孔(IL-4)。运动后36小时,运动组血红蛋白、睾酮、皮质酮均较对照组显著下降;经1周恢复后,和对照组相比无显著性差异。递增负荷运动第1周跑台训练后,运动组Th1型细胞因子IFN-γ与对照组相比显著升高;第3周跑台训练后,运动组和对照组相比显著下降;恢复1周后,运动组IFN-γ与对照组相比显著下降。递增负荷训练结束后的恢复期,运动组Th2型细胞因子IL-4较对照组升高了1.44倍(P<0.01)。CD4+/CD8+在整个训练期及恢复期均无显著性变化。结论:递增负荷过度训练过程中,与CD4+/CD8+相比,采用ELISPOT技术检测SD大鼠Th1/Th2淋巴细胞亚群的改变具有较高的灵敏性。

动物肌肉中四环素族药物多残留的固相萃取-酶联免疫分析

研究确立了动物肌肉中四环素族药物多残留分析的基质固相萃取净化-酶联免疫分析方法,交叉反应分析表明其对每千克动物肌肉中四环素、土霉素和金霉素的检出限分别为8、8.5和70μg,回收率为80％～110％,是监控动物源性食品中四环素族多抗生素残留的优选方法。与常用的液相色谱法相比,此方法更简便、高效,能实现自动化和高通量分析。

西维因毛细管电泳免疫分析方法的建立及其与固相酶联免疫分析方法(ELISA)的比较

以氨基甲酸酯农药西维因为研究对象,采用小分子荧光素标记西维因半抗原,建立毛细管电泳荧光免疫分析方法。该方法对抗原抗体结合反应达到平衡的时间为30min,5min即可获得检测结果,对西维因检测的线性范围和最低检测限分别为0.16～50ng/mL和0.05ng/mL,具有快速、灵敏的特点,与固相酶联免疫分析方法相比更适合于食品或环境中痕量西维因残留的分析检测。

固相酶联免疫测定法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用

目的探讨固相酶联免疫测定(ELISA)法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用价值。方法选取登革病毒感染早期患者血清171份,非登革病毒感染发热患者血清11份,正常人血清10份,采用ELISA法检测全部192份血清的登革病毒NS1抗原和IgM抗体;采用逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)技术对发病5 d内的125份血清进行扩增和鉴定分型;并采用C6/36细胞微量培养法对发病第1、2天的41份血清进行登革病毒分离培养。结果登革病毒感染患者发病2 d内、3～5 d以及6～10 d血清NS1抗原的检出率分别是92.7%(38/41)、83.3%(70/84)、10.9%(5/46);IgM抗体的检出率分别是2.4%(1/41)、51.2%(43/84)、97.8%(45/46);非登革病毒感染的发热患者及正常人血清中,有1例疟疾患者血清登革病毒IgM抗体呈阳性,NS1抗原无一例阳性。RT-PCR在登革病毒感染患者发病第1、2天和3～5天的检出率分别是85.4%(35/41)、83.3%(70/84);登革病毒感染患者发病第1、2天血清的病毒分离培养阳性率分别是80.0%(16/20)、38.1%(8/21),总分离率58.5%(24/41);RT-PCR-RFLP分型鉴定技术及间接免疫荧光法(IFA)均证实2006年广州流行株为登革Ⅰ型病毒。结论ELISA法检测登革病毒NS1抗原操作技术成熟,且具有敏感性高、特异性好的特点,对登革病毒感染的早期诊断和疫情的早期控制具有重要意义,适合于基层医疗机构常规应用。

表面微粒化酶联免疫固相载体的开发研究

目的:比较表面微粒化酶联免疫固相载体与平整光滑聚苯乙烯固相载体对HCV实验的影响。方法:在相同条件下,在采用华大吉比爱丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)原理的前提下,运用表面微粒化酶联免疫固相载体包被酶标板,与华大吉比爱试剂盒对照检测企业内部质控血清。结果:用表面微粒化酶标板包被的酶标板试验灵敏度、特异性及精密度明显好于华大吉比爱聚苯乙烯酶标板。结论:表面微粒化酶联免疫固相载体包被酶标板的开发研究应用将是未来发展的新趋势。

血清T_4固相酶联免疫法测定方法的建立

目的 以T4 (3,5 ,3’ ,5’ -四碘 -L -甲状腺素 )测定为模式 ,研究建立血清激素固相试管酶免测定方法。方法 将抗T4 抗体包被到固相试管壁 ,血清中的T4 和T4 标记物竞争结合固相抗体 ,标本的浓度通过内插法从标准曲线上求得 ,并和磁酶免测定法平行对比测定。结果 该种方法和磁酶免测定法进行对比实验并作了直线回归分析 ,提示两种方法高度相关 ,r=0 .92 1,直线回归方程为 :Y =0 .46 8+0 .86 4X。配对样本t检验双侧P >0 .0 5 ,提示两种检测方法无显著性差异。结论 以T4 测定为模式 ,研究建立的固相试管酶免测定方法简便、准确 ,具有较高的灵敏性和稳定性。

双特异抗体在固相酶联免疫测定中的应用初探

目的 了解双特异抗体在固相酶联免疫方法中对抗原或抗体的固相化是否有优化作用。方法 通过血型糖蛋白A（GPA），将抗GPA，抗HIVp24抗原的双特异抗体间接包被到固相上，建立检测HIVp24抗原的“间接”双抗夹心ELISA方法，并把“间接”双抗夹心EISA方法对HIVp24抗原的检测结果与抗HIVP24抗原单克隆抗体直接包板的“直接”双抗夹心EISA方法进行比较。结果 用双特异抗体建立的“间接”双抗夹心ELISA方法对HIVp24抗原的检测下限为3.2ng/ml，抗HIVp24单克隆抗体直接包板的“直接”双抗夹心EISA方法对HIVp24抗原的检测下限为6.3ng/ml。结论 结果表明双特异抗体对ELISA方法的检测效果有改善作用。

磁性氧化石墨烯固相萃取酶联免疫吸附法测定芝麻油中黄曲霉毒素B_1含量

通过共沉淀法合成磁性氧化石墨烯作为磁固相萃取材料,结合酶联免疫吸附法(ELISA)建立测定芝麻油中黄曲霉毒素B_1含量的新方法。试验考察了萃取条件和洗脱条件等参数对黄曲霉毒素B_1吸附效率的影响,在最优的试验条件下,检出灵敏度为0.05μg/kg,日内和日间相对标准偏差分别为3.75%～5.14%和5.26%～7.15%,实际样品加标回收率在80.6%～92.3%。结果表明,该方法稳定性好、测定准确,适用于芝麻油中黄曲霉毒素B_1含量的检测。

自上而下法评定固相酶联免疫吸附法测定食用油中黄曲霉毒素B_1的不确定度

目的利用自上而下方法评定固相酶联免疫吸附法测定食用油中黄曲霉毒素B_1含量的不确定度。方法在控制不确定度来源或程序的前提下,得出试验数据、质控数据进行评定,通过计算偏移和实验室内复现性2个分量,最后合成得到该方法的测量不确定度。结果按照自上而下法的公式计算,本研究测得食物油中黄曲霉毒素B_1含量为(46.25±6.28)μg/m L,扩展不确定度U_(rel)为14%(k=2)。结论使用自上而下法对固相酶联免疫吸附法测定食用油中黄曲霉毒素B_1含量进评定过程是实用和可靠的,可以为其他同类型的检测方法进行测量不确定度评定时所借鉴,也为实验员在实验质量控制方面提供参考。

酶联免疫吸附测定中固相化方法概述

酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一项应用广泛的固相酶免疫测定技术。抗原或抗体等反应物的固相化在ELISA检测系统中有着十分重要的作用,可直接影响检测结果。应用稳定性好、固相化物质变性率低及固定效率高的ELISA操作体系,可显著提高检测分析的灵敏性、特异性和可靠性。现就ELISA技术中不同固相介质和固相化方法作一概述。

磁性均相酶联免疫技术测定血清TSH、FT3、FT4的方法学探讨及临床应用

目的 探讨磁性均相酶联免疫技术及SEROZYME-Ⅲ型吸光值测定仪性能的可靠性。方法 测促甲状腺激素(TSH)用磁性均相酶联免疫夹心法；测游离碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4)用磁性均相酶联免疫竞争法。结果 最小检测量FT3<0．26pg/ml，m<0．1pg/ml，TSH<0．03μiu／ml，回收率FT3为95．93％，FT4为96．53％，TSH为96．36％；批间变异系数(CV)FT3为4．2％，FT4为4．8％，TSH为4．5％；批内变异系数(C．V．％)FT3为3．4％，FT4为3．2％。TSH为2．9％。用放免法(SPRIA)和免放法(IRMA)与本法同时测定30份标本中的TSH、FT3、FT4，两法结果符合率FT3r达0．927、FT4r达0．935、TSHr达0．936。均呈显著相关。结论 磁性均相酶联免疫技术及SEROZYME-Ⅲ型吸光值测定仪的灵敏度、精密度、准确度、特异性均达到标准要求，宜中小型医院临床推广应用。

固相酶联免疫法测定花生油中黄曲霉毒素B_1的不确定度评定

本文分析利用固相酶联免疫吸附(ELISA)原理测定花生油中黄曲霉毒素B_1所引入的不确定度,根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的规定,评定实验中所涉及的重复测量、样品的称量和稀释、工作曲线、加标回收等引入的不确定度分量。

磁性均相酶联免疫技术对内分泌激素的方法学评价及临床应用

目的探讨磁性均相酶联免疫技术及SEROZYME-Ⅲ型吸光值测定仪性能的可靠性。方法测促甲状腺激素(TSH)用磁性均相酶联免疫夹心法;测游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4)用磁性均相酶联免疫竞争法。结果最小检测量:FT3<0.26pg/mL,FT4<0.10pg/mL,TSH<0.03μIU/mL;回收率:FT3为95.93%,FT4为96.53%,TSH为96.36%;批间变异系数(CV):FT3为4.2%,FT4为4.8%,TSH为4.5%;批内变异系数(CV%):FT3为3.4%,FT4为3.2%,TSH为2.9%。用放射免疫法、免疫放射法与本法同时测定30份标本中的TSH、FT3、FT4含量,两种方法结果符合率FT3达0.927、FT4达0.935、TSH达0.936,均呈显著相关性。结论磁性均相酶联免疫技术及SEROZYME-Ⅲ型吸光值测定仪的灵敏度、精密度、准确度、特异性均达到标准要求,适宜中、小型医院临床推广应用。

半自动生化仪在磁分离均相酶联免疫分析技术中的应用

本文对近年来兴起的磁分离均相酶联免疫分析技术(MAIA)中使用的Serono测定仪与半自动生化仪在测定性能上做了系统比较，尝试了用半自动生化仪开展MAIA技术的可能性。结果显示：如果对半自动生化分析仪比色方式做合理调整，完全可以替代Seronp专用测定仪开展MAIA技术，并且，在准确性上，很可能优于Serono仪，这对无Serono仪而需开展此项技术的实验室具有指导意义。

酶联免疫快速检测技术应用的研究

近几年,随着人民生活水平的提高,畜产品作为食品在人民的生活中所占的比例越来越大,其质量安全也越来越受到人们的关注。为了确保可食性畜产品的质量安全,需要一种快速、简便、灵敏度高的检测技术,酶联免疫吸附试验具备这些优点。酶联免疫吸附试验3个基本构成条件为：1）抗原抗体的固相化,即使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

精子抗原肽的合成及其在酶联免疫吸附法检测抗精子抗体中的应用价值

目的:以合成精子抗原肽为抗原建立酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测抗精子抗体(AsAb)。方法:通过PS3全自动合成仪合成精子肽P10G、YLPl2和SP17抗原肽,经反相高效液相色谱(HPLC)纯化和质谱鉴定,分别包板制备ELISA试剂盒,并检测血清标本。结果:成功合成3种目的肽,质谱分析结果主峰分子量与理论值基本一致,HPLC结果显示其纯度为97.5%、97.78%和95.5%。以3种合成肽为抗原建立ELISA检测AsAb,与商品化试剂盒比较,均显示极好的一致性(Kappa值>0.75)。结论:全自动固相多肽合成技术可用于高纯度的精子抗原肽合成,所合成的P10G、YLPl2和SP17抗原肽均具有较好的抗原活性,可作为ELISA的包被抗原用于AsAb检测。

聚联苯乙烯和石墨化碳黑固相萃取用于污水中雌激素的定量分析

研究了聚联苯乙烯(SDB)和石墨化碳黑(GCB)固相萃取用于样品前处理对污水样中雌二醇(E2)和乙炔基雌二醇(EE2)的酶联免疫吸附检测(ELISA)定量分析可靠性的影响。采用GCB固相萃取可对E2和EE2进行分步洗提,相比SDB固相萃取在污水厂原水样中E2和EE2的加标回收率分别从181.4%和122.6%降至113.3%和109.4%,相对标准偏差均降至10.0%以下;在污水厂尾水样中E2的加标回收率则分别从144.2%降至93.5%,而EE2无明显变化,相对标准偏差均从接近10.0%降至8.0%以下。利用液相色谱-飞行时间质谱联用对污水厂原水样的平行分析的结果表明采用GCB固相萃取可比采用SDB固相萃取降低38%的E2检测假阳性和15%的EE2检测假阳性。

单克隆抗体酶联免疫方法检测人血清胰岛素原及其应用

目的:建立灵敏、特异的检测人血清中胰岛素原的酶联免疫吸附试验并应用于临床与流行病学研究. 方法:选择2种mAb并引入生物素与亲和素放大系统来建立酶联免疫分析方法,一种抗C肽mAb结合到酶反应板上作为固相抗体,另一种生物素标记的抗胰岛素抗体作为液相抗体,将该检测方法应用于流行病学研究(n=1196). 结果:本法灵敏度0.83 pmol/L,与1 200 pmol/L胰岛素、3 960 pmol/L C肽无交叉反应,线性标准范围0.83-142 pmol/L.批内变异系数小于11.4%,批间变异系数小于11.2%.流行病学研究结果显示胰岛素原的含量与体重指数、腰围、收缩压、舒张压、胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、危险因素数目呈正相关, 与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关. 结论:本法适用于在临床研究及流行病学研究中检测人血清中胰岛素原的含量.β细胞功能受损与纤溶功能的紊乱可能是高胰岛素原与心血管危险因素关联的原因.

应用圆斑酶联免疫吸附试验检测呼吸道合胞病毒抗体

本文介绍的圆斑酶联免疫吸附试验是以微孔滤膜代替ELISA法中的固相载体,从而建立起来的一种方便可行的、检测病毒或其对应抗体的新方法。

精子肽的固相合成及其在免疫性不孕诊断中的应用研究

目的合成特异性精子肽,并对其抗原性进行初步评价,从而探讨检测抗精子抗体的ELISA试剂盒制备。方法应用固相多肽合成技术,以Fmoc基团保护的氨基酸为原料,合成特异性精子肽。以高效液相色谱(HPLC)技术鉴定纯化,并用ELISA检测其抗原性。结果成功合成了所需肽段,HPLC结果显示纯度达95%以上。该合成肽包被的ELISA试剂盒检测抗精子抗体的结果,与商品化试剂盒相比较符合率达90.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度特异性的精子肽,且所合成肽段具有良好的抗原活性,包板建立的ELISA方法可以用于免疫性不孕中抗精子抗体的检测。