液相阻断ELISA和固相阻断ELISA检测O型口蹄疫抗体的比较

口蹄疫抗体检测是评价口蹄疫疫苗免疫效果和病毒感染状况的重要指标。液相阻断ELISA是检测口蹄疫抗体的经典方法,而固相阻断ELISA以其简便、快速的检测特点被广泛应用。为比较液相阻断ELISA和固相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的应用效果,采用改进型液相阻断ELISA和固相阻断ELISA对273份临床猪血清样品进行O型口蹄疫抗体检测,并对两种方法检测结果进行统计学分析。结果表明:固相阻断ELISA检测抗体阳性率为77%,液相阻断ELISA检测抗体阳性率为75%,两者检测结果符合率为95%,Kappa值为0.86,属于完全符合。进一步分析156份样品的液相阻断ELISA效价与固相阻断ELISA S/N值对应关系,发现S/N值随效价的升高而减小,阴性组(效价<64)S/N值对应中位数0.568,弱阳性组(1∶64≤效价<1∶720)S/N值对应中位数0.093,强阳性组(效价≥1∶720)S/N值对应中位数0.045。结论:两种ELISA方法对猪血清样品的检测结果高度一致,固相阻断ELISA可替代液相阻断ELISA用于O型口蹄疫样品的检测。

O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。

固相阻断ELISA法检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度评定

目的:以口蹄疫病毒O型抗体(固相阻断ELISA法)检测的不确定度评定为例,以两种方法评定检测的不确定度。方法:分别使用“影响因素分析法”和“对照样品法”对检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度进行评定。结果:“影响因素分析法”的合成不确定度为0.1297,扩展不确定度为0.2593;“对照样品法”的合成不确定度为0.1040,扩展不确定度为0.2080。结论:对新方法进行不确定度评定时,“影响因素分析法”更适用,可帮助检测员更了解试验过程及注意事项,而“对照样品法”直接评估该试验过程的合成不确定度,减少大量计算过程,快速得出结论。

口蹄疫病毒O型中和抗体检测固相阻断ELISA方法的建立

[目的]为评价O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)灭活疫苗免疫后中和抗体(neutralizing antibodies,NA)水平,建立检测中和抗体的固相阻断ELISA(neutralizing antibodies solid-phase blocking ELISA,NA-SPBE)方法。[方法]本研究以本实验室前期制备的FMDV广谱反应性牛源单克隆抗体E32作为捕获抗体,以生物素标记的FMDV O型型内广谱中和牛源单克隆抗体C4作为检测抗体,经过条件优化建立了检测FMDV O型中和抗体的固相阻断ELISA方法,并对该方法进行了敏感性、特异性、重复性、交叉反应性与病毒中和试验(virus neutralization test,VNT)相关性等试验。[结果]抗体E32最佳包被浓度为0.5μg/mL,O型FMDV灭活抗原最佳稀释浓度为0.25μg/mL,生物素标记抗体C4-Bio最佳工作浓度为0.06μg/mL,链霉亲和素-HRP的最佳稀释度为1:40000。以1.35 log10作为效价判定临界值时,敏感性和特异性分别为97.14%和98.84%。利用该方法分别检测FMDV A型、FMDV Asia1型、BVDV、PRRSV、CSFV、PPRV抗体阳性血清时,均为阴性,未出现交叉反应。该方法批内和批间重复试验的变异系数均<10%,表明其重复性较好。利用该方法与VNT分别对160份血清样品进行检测,二者的相关系数r为0.8075,P<0.0001,相关性显著。[结论]该方法可以检测FMDV O型中和抗体,为FMDV O型灭活疫苗免疫效果评价提供有力技术支撑。

2种口蹄疫O型抗体阻断ELISA检测试剂盒应用比较

为评估2种常用口蹄疫O型抗体检测试剂盒的性能差异,对2020年春季随机抽检的3家规模养殖场提供的60份猪血清分别用液相阻断ELISA试剂盒和抗体阻断(固相)ELISA试剂盒进行了检测,并比较了2种试剂盒的阳性检出率和符合率。结果表明,2种方法检测结果总符合率为91.67%,符合程度高。在基层畜牧兽医部门日常定性检测中,推荐使用抗体阻断(固相)ELISA检测试剂盒。