用固相pH梯度等电聚焦分析Gc蛋白亚型

用固相ｐＨ梯度等电聚焦技术及免疫固定技术对２０１名北京地区无关汉族群体的人血清Ｇｃ蛋白亚型进行了分型鉴定及基因频率的调查．Ｇｃ￣（ｌＦ）为０．３６９８．Ｇｃ￣（ｌｓ）为０．２８１２．Ｇｃ￣２为０．３４９０．观察值与期望值吻合良好（Σｘ￣２＝１．０５７，Ｐ＞０．７０）

缓冲液成分对固相pH梯度等电聚焦的影响

分别从水质、DTT(二硫苏糖醇)含量及含盐缓冲液三个方面对等电聚焦过程进行了对比。通过电学参数变化,研究了三者对聚焦进程的影响。结果表明:高质量的水、低含量的DTT和盐可以缩短聚焦时间,从而提高聚焦质量。可以把电学参数的变化作为优化和控制等电聚焦过程的指标,为正确设计合理的双向电泳实验流程提供依据。

温敏核不育水稻双低-S单胞期花药蛋白质的固相双向电泳分析

对温敏感核不育水稻双低-S不同温度下的单胞期花药蛋白质进行固相双向电泳分离,经银染后,获得了清晰而稳定的图谱。以300ug左右的蛋白质进行电泳,分离开的蛋白点(多肽)可超过500个.在32℃温度下的花药蛋白点要比19℃温度下多,其中蛋白质点(MW14KD,pI5.4)在19℃可育条件时稳定出现。32℃不育条件时却缺失;而蛋白质点(pI7.6)和蛋白质点(pI7.8)非常明显的在不育条件下出现,而在可育条件下缺失。

小细胞肺癌细胞系NCI-H446蛋白质表达谱的建立

背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳技术(IPG-DALT)分离NCI-H446细胞总蛋白,凝胶银染显色,ImageMaster2D图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶平均蛋白质点数为1506±74,匹配点数为1412±56,匹配率达93.4%,三块胶蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是(0.96±0.27)mm,在SDS-PAGE方向偏差是(1.24±0.41)mm。胶内酶解-肽质指纹图分析鉴定了58个蛋白质,其中有原癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:建立了小细胞肺癌细胞系NCI-H446双向电泳参考图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。

成年和老年小鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较

使用双向电泳 (2 DE)比较成年和老年小鼠脑蛋白质差异 ,从分子水平初步探索老年脑蛋白整体变化规律 .以固相 pH梯度等电聚焦为第一向 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶水平电泳 (PAGE)为第二向进行 2 DE .图象分析软件Imagemaster 2DElite分析电泳图谱 .重复性实验结果显示 ,同组样品在三次不同实验中所得蛋白质斑点数目的相对标准差 (变异系数 )为 4 43%± 0 2 5 % ;同一蛋白质斑点在三次实验中等电点、分子质量和蛋白质量的相对标准差分别为 8 76 %± 5 14% ,13 0 0 %± 4 2 2 %和 10 84%± 9 16 % .成年和老年小鼠脑组织 2 DE图谱分别获得 996和 12 5 6个蛋白质斑点 ,其中 8个蛋白质在老年脑组织中含量降低 ,2 0个蛋白质斑点含量增加 .另至少有 4个蛋白质斑点在老年脑组织中缺失 ,14个蛋白质点为老年脑特有 .

中药益气解毒颗粒对鼻咽癌裸鼠移植瘤蛋白质表达的影响

目的 :探讨中药复方益气解毒颗粒抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制。方法 :将鼻咽癌细胞系HNE1接种至BABL/c裸小鼠 ,2 0只 ,每只 0 .5× 10 7个 ,待移植瘤生长至一定大小 (约 1cm× 1cm× 1cm) ,随机分为两组。中药组灌喂益气解毒颗粒药液 ,对照组灌喂生理盐水 ,30d后处死裸鼠 ,解剖获取肿瘤组织 ,测量瘤体体积大小 ,称量瘤体重量。取 10 0mg瘤体组织 ,常规提取总蛋白质 ,用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离移植瘤组织的总蛋白质 ,银染显色 ,ImageMaster 2DElite 4 .0 1软件分析差异蛋白质点。随机选取表达差异点共 19个 ,4个点为只在中药组表达 ,4个点仅在对照中表达 ,余下 11个为表达相差 5倍以上的点 ,进行质谱鉴定和生物信息学分析。结果 :益气解毒颗粒药液能明显抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长 ,灌喂中药组瘤体积和重量分别为 (0 .2 0 7± 0 .0 2 3)cm3和 (0 .132± 0 .0 2 1) g ,对照组为 (1.342± 0 .2 98)cm3 和 (1.0 17± 0 .0 15 ) g(P <0 .0 5 ) ;制率为 84 .5 8%。双向电泳图像分析蛋白质表达 ,益气解毒颗粒药物处理组平均蛋白质数为 5 6 7± 4 9,未处理组的平均蛋白质数为 6 79± 5 9;差异蛋白质有 2 4 3个 ,其中有 112个表达增强 ,有 131蛋白质表达下降 ;差异蛋白质的质谱鉴定和生物?

蛋白质组双向电泳实验中一些常见失误的分析

从以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS PAGE电泳为第二向进行的蛋白质组双向电泳实验中挑选了一些常见的硝酸银染色2 DE失误图谱,将它们进行分类,初步分析造成各类失误的可能原因,探讨相应的解决方法和总结实验操作中应该注意的事项.

侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的蛋白质差异表达谱的建立(英文)

目的:建立分辨率高和重复性好的侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出其差异表达的蛋白质。方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的总蛋白质,凝胶经银染显色后,运用ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及数据库搜索鉴定部分差异蛋白质点。结果:得到了分辨率较高、重复性较好的侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳图谱,将同一侵袭性垂体腺瘤组织和非侵袭性肿瘤组织分别进行了3次双向凝胶电泳,3块凝胶的蛋白质点数分别为1080±24和1035±28,匹配点数分别为975±45和918±56,匹配率分别达90.3%和88.7%。同一组织的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(IEF)方向的偏差是(1.563±0.259)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的偏差为(1.088±0.206)mm。比较分析侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤凝的双向凝胶电泳图谱,发现两者间的99个表达有明显差异的蛋白质点。初步对其中30个差异蛋白质点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出一些与细胞周期调控、信号转导等有关的蛋白质。结论:建立了分辨率较高且重复性较好的侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出一些侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤之间差异表达的蛋白质,为进一步筛选侵袭性垂体腺瘤的蛋白质表达数据库提供了基础。

大肠癌双向电泳分离条件的建立及其初步分析

采用固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS PAGE垂直电泳为第二向建立了大肠癌双向电泳分离技术实验条件,对样品的处理、水化、等电聚焦、凝胶平衡等步骤进行了优化,成功地获得了大肠癌分辨率高、重复性好的双向电泳图谱.癌组织样品经3次重复实验共获得蛋白质斑点数1186±46个,蛋白质斑点位置在IEF方向平均偏差为1.67±0.29mm,在SDS PAGE方向为1.41±0.16mm,蛋白质表达量的相对标准差为6.67%±2.25%.经ImageMaster2DElite软件初步分析后发现了一些差异表达的蛋白质.

拟南芥蛋白质组研究中双向电泳技术条件的优化

双向电泳技术是蛋白质组学研究中的关键技术,是目前分辨率最高的工具之一。而提高双向电泳图蛋白质点的数目和分辨率,可以提高蛋白质组技术平台的信息完整性。通过对拟南芥双向电泳技术过程中的适当改进,如蛋白质的提取与溶解方法、上样量和聚丙烯酰胺凝胶浓度,加入硫脲,硫代硫酸钠等,对拟南芥双向电泳技术进行了优化,提高了双向电泳图谱的蛋白质点数目与分辨率。

虎纹捕鸟蛛粗毒双向凝胶电泳分析及部分蛋白质点的N端序列测定

采用固相 p H梯度等电点聚焦 - SDS双向聚丙烯酰胺凝胶电泳对虎纹捕鸟蛛粗毒进行了分析 ,通过考马斯亮蓝与银染法显色 ,电脑软件识别出约 30 0个蛋白质点 .约有 35个含量较高的蛋白质点分布在分子量 1 0 k D以下区域 ,通过印迹法将凝胶上蛋白质点转移到 PVDF膜上以后 ,对上述分子量 1 0 k D以下的组分进行了 N端序列测定 ,鉴定到了虎纹捕鸟蛛毒素 HWTX- ,HWTX- ,HWTX- 和 SHL- 1在凝胶上的位置 ,同时发现了 5种新的肽类毒素组分 .

老年性白内障与正常晶状体蛋白质双向电泳的差异

目的:应用双向电泳技术对比研究老年性白内障与正常晶状体,寻找差异表达的蛋白质。方法:分别收集老年性白内障和正常晶状体,采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向电泳技术进行蛋白质分离,使用ImageMaster图像分析软件分析电泳图像,对比分析蛋白质表达的差异。结果:大部分晶状体蛋白质分布在Mr14000～97000,等电点(pI)5～9的范围内;高丰度蛋白质斑点分布在Mr20000～31000、等电点(pI)6～8的区域内。经软件分析正常组共识别出133±7个蛋白质斑点,白内障组共识别出136±8个斑点,两组之间的匹配率为87%(115个),其中有8个点蛋白质表达量增加了300%以上,其中44号增加了480%,有6个点蛋白质表达量减少了300%以上,其中125号减少了336%。结论:老年性白内障与正常晶状体存在差异表达的蛋白质。

一种新的双向电泳蛋白样品制备方法

目的探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采用8 mol/L Urea,2 mol/L Thiourea,4%CHAPS,1%NP-40,4%TritonX-100,65 mmol/L DTT,0.5 mmol/L PMSF,0.5%pharmalyte 3-10,能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品,从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。

人胃黏膜组织蛋白质组二维电泳图像的获得

目的初步建立并优化人类胃黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性。方法刮取手术胃黏膜组织,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。以固相pH梯度———IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(13%)的垂直电泳为第二向。结果成功地得到了胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱。

两种大肠癌转移性细胞株双向电泳图谱的初步分析

目的初步分析大肠癌转移过程中差异表达的蛋白质,为阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法以一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480为实验对象,利用双向电泳技术(two-dimensionalgelelectrophoresis,2-DE),建立并优化两种细胞株的蛋白表达图谱;之后利用Melanieш软件分析与大肠癌转移相关的差异表达蛋白点。结果两种细胞株的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性;采用了非线性pH3-10及重叠窄范围的固相pH梯度胶条,提高了2-DE图谱的分辨率;初步选择11个差异表达蛋白点。结论非线性及重叠窄范围的固相pH梯度胶条可改善2-DE中蛋白分离的效果,初步分离的差异蛋白点为进一步鉴定大肠癌转移相关蛋白及建立大肠癌转移性细胞株的2-DE数据库奠定了基础。

蛋白质组分析的开门技术——双向电泳

本文简述了蛋白质组学研究的主要技术之一———双向电泳的原理、方法、发展概况和相关设备的进展 。

双向电泳应注意的几个关键问题

着重介绍双向电泳的关键技术,如样品的提取,电泳条件的选择及双向电泳中应注意的关键问题等,为蛋白组学工作者提供可以借鉴的方法和经验。

卵巢癌组织蛋白双向电泳分析技术的建立

目的初步建立卵巢癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性。方法提取卵巢癌肿瘤组织中蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,对关键环节如样品处理、上样量分析和水化等进行一系列优化。进一步采用垂直SDS-PAGE进行第二相分离,银染显色、图像分析或软件分析电泳图谱。结果通过实验条件的反复筛选获得了较为满意的卵巢癌双向凝胶电泳图谱。结论本文初步建立了卵巢癌蛋白质组双向电泳分析方法,具有较好的分辨率和重复性,为进一步研究卵巢癌的差异表达及特异性分子标志物的筛选奠定了基础。

双向电泳技术应用于消化道粘膜组织并优化

目的 :初步建立并优化了组织蛋白质组分析所需的双向电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。方法 :以小鼠肠组织为例 ,对以固相pH梯度为第一向的双向电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果与结论 :以固相pH梯度—IPG胶条 (pH 3～ 10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 ,成功地得到了肠组织的双向电泳图谱。