固蓝B单一试剂显色法测定血清总胆红素的探讨

用固蓝B、HCl、尿素已制单一试剂测定血清总胆红素。方法学评价结果：线性范围0～342．0μmol／L，批内CV1．52％，批间CV2．10％，回收率98．2％～102．9％，表观摩尔消光因数K630＝1．0007×105cm2／mol，Hb≤2．5g／L，NaN3≤2．0g／L基本不影响胆红素测定，与改良J－G法比较，γ＝0.999，Y（本法）＝0．99X＋0．15。

碳化青和固蓝逆行标记新生大鼠面神经核的比较研究

目的 探讨碳化青(diI) 和固蓝(Fast Blue ,FB) 用作鉴定分离培养新生大鼠面神经运动神经元细胞来源的逆行追踪剂的可行性。方法 采用外周注射逆行标记法, 比较不同浓度下碳化青(diI5 % 和10 % - DMSO 液)和固蓝(FB,5 % 和3 % ) 两种荧光染料逆行标记新生大鼠面神经核区运动神经元数量及其分布特点, 观察并比较标记荧光持续时间。结果 固蓝逆行标记面神经核区运动神经元胞浆呈蓝绿色荧光, 荧光淬灭较快; 平均每张切片标记神经元数多于碳化青(t= 3 .187 和t= 3 .880 , P< 0 .01) 。碳化青标记细胞为橙红色荧光, 且持续96 小时以上;10 % 碳化青作追踪剂时, 标记细胞数较5 % 碳化青多( t = 2 .163 , P < 0 .05) 。固蓝和碳化青标记的面神经核区运动神经元胞体分布相似。结论 碳化青有荧光保持时间长、不易向胞体外扩散等优点, 可选作鉴定和识别所分离培养的新生大鼠面神经运动元细胞较理想逆行追踪剂, 而固蓝尽管标记率高,

固蓝B法测定血清胆红素的改进

报告对固蓝Ｂ单一试剂测定血清总与结合的胆红素法的改进，在联合应用甲醇和尿素作总胆红素显色的加速剂，降低了固蓝Ｂ的浓度。总胆红素的回收率为９５．２～１０２．２％，批内重复性，总胆红素ＣＶ＝１．２％，结合胆红素ＣＶ＝２．７％；批间重复性，总胆红素ＣＶ在２．３～３．８％之间，结合胆红素为４．０～４．３％。本法（ｙ）与Ｊ—Ｇ法（ｘ）比较，总胆红素两法密切相关（ｒ＝０．９９８９ｒ＝０．９８５１ｘ＋１．０６７６），结合胆红素，以Ｊ—Ｇ直接法定值的黄疸血清作参考物测得的结果表明两法紧密相关（ｒ＝０．９９９７，ｒ＝０．９９７ｘ＋０．５６６７），但以未结合胆红素作标准则有明显的比例偏差（ｒ＝０．９９３０，ｙ＝０．８４６６ｘ—３．５０７１）。

固蓝RR盐的浓度对特异性酯酶染色灵敏度的影响

氯醋酸AS—D萘酚酯酶（SE）染色对急性粒细胞白血病具有重要鉴别诊断意义。但SE染色的灵敏度不如过氧化物酶染色的灵敏度高，故影响SE染色的多种因素很值得细致研究。本文主要探讨常用偶联剂固蓝RR盐的不同浓度对SE染色灵敏度的影响。

固蓝BB盐的浓度对特异性酯酶染色灵敏度的影响

氯醋酸AS-D萘酚酯酶（SE）染色对确诊急性粒细胞白血病具有重要价值。固蓝RR盐的浓度可对SE染色灵敏度产生大的影响^[1]。本文的目的是探讨pH7．4时，常用偶联剂固蓝BB盐的不同浓度对SE染色灵敏度的影响，以确定固蓝BB盐的实际有效浓度。

热处理香榧种子油中美拉德产物的生成及其对两种总酚测定方法的影响

通过测定香榧种子油褐变指数与3-脱氧葡萄糖醛酮、丙酮醛及5-羟甲基糠醛3种美拉德产物的含量验证美拉德反应的发生并进一步考察3种产物对福林-酚法与固蓝BB盐法测定总酚的影响。结果表明:香榧籽在150℃热处理90~120 min时,福林-酚法测得的油脂总酚含量上升,而固蓝BB盐法的测定结果与之相反。低温长时热处理及高温处理皆会引起香榧种子油在294 nm波长处吸光度上升,且在经高温(150℃)处理的油样中检出了3-脱氧葡萄糖醛酮(0.21~0.47μg/g)与5-羟甲基糠醛(0.06~0.40μg/g),在各加热条件的油样中皆检出丙酮醛(0.67~1.73μg/g)。福林-酚法测定中,3-脱氧葡萄糖醛酮、丙酮醛在765 nm波长处的吸光度皆随浓度增大呈线性升高,同浓度3种美拉德产物在此波长处的响应排序为3-脱氧葡萄糖醛酮>丙酮醛>5-羟甲基糠醛;3-脱氧葡萄糖醛酮的存在会造成福林-酚法测定结果偏大且干扰程度与样品总酚含量无关,而与其本身浓度呈正相关。固蓝BB盐法测定中,3种美拉德中间产物在420 nm波长处的吸光度变化皆不显著。因此,针对加工过程中易形成3-脱氧葡萄糖醛酮、丙酮醛的食品基质,选择固蓝BB盐法替代福林-酚法测定总酚含量可降低这两种物质对定量的干扰。

大鼠创伤性脊髓损伤模型的建立

目的:建立一种控制性脊髓挫伤大鼠模型。方法:采用BenchmarkTM立体定位颅脑撞击器制备大鼠创伤性脊髓损伤,并在伤后1、2、3、5、7、142、8 d借助斜板试验及BBB评分评价其运动功能,然后观察损伤部位及其邻近区域的形态学改变。结果:脊髓损伤后大鼠在斜板上维持的角度以及BBB评分显著低于假手术组(P<0.01)。损伤部位可见神经纤维肿胀。灰质部运动神经元肿胀、坏死,尼氏体淡染,甚至溶解。小胶质细胞明显增生。通过铜银染色和Luxol固蓝染色,可见运动神经元溃变以及髓鞘脱失。结论:建立的控制性脊髓挫伤大鼠模型重复性好,适合神经保护药物的药效学筛选。

果蔬中维生素C含量的测定方法探讨

采用了固蓝B盐分光光度法测定果蔬中维生素C,方法的相对标准偏差为0.83%～4.57%,回收率为90.8%～100.7%。结果表明,该法具有重现性和精密度良好,实验简便、快速和经济等优点。

香鳞毛蕨药材的质量标准研究

目的建立香鳞毛蕨药材质量标准,为控制其质量提供试验依据。方法采用性状、显微鉴别法对香鳞毛蕨药材的性状、显微特征进行描述;参照2015年版《中国药典》四部通则相关方法,对该药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物进行测定;采用薄层色谱法,分别以绵马素BB(aspidin BB)和对照药材为对照,对该药材进行定性鉴别;采用紫外分光光度法,以绵马素BB为指标,建立了该药材中总间苯三酚质量分数的测定方法。结果香鳞毛蕨药材的性状、显微、薄层鉴别方法均具有很好的专属性,6批样品的水分、总灰分酸、不溶性灰分、醇溶性浸出物平均值分别为9.45%、9.38%、1.58%、20.8%,总间苯三酚质量分数以绵马素BB计,为40.78 mg/g。结论建立了香鳞毛蕨药材质量标准,所建立的质量标准可用于香鳞毛蕨的质量控制。

分光光度法快速测定糙米中烷基间苯二酚的研究

建立了快速测定糙米中烷基间苯二酚的分光光度法。以固蓝RR盐为显色剂,质量分数5%的K2CO3为碱化剂,调节介质pH值为10,室温下反应15min,烷基间苯二酚与固蓝RR盐特异性结合呈紫红色化合物,在480nm处有最大吸光度。用此法定量测定糙米中烷基间苯二酚的含量,重复性试验相对标准偏差为0.24%,加标回收率为98.8%~100.4%。与传统定量检测方法相比,该方法不需要将样品进行粉碎,不仅节省能源与人力,还能避免粉碎过程对活性成分造成的损失与损害,因此具有很好的推广价值。

不同温度条件下唾液斑酯酶表型的可测期限

目的 探讨不同温度条件下滤纸唾液斑酯酶的可测期限。方法 应用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳及固蓝RR染色方法 ,检测 4℃、室温 (18～ 2 5℃ )及 37℃条件下保存的滤纸上唾液斑酯酶表型的可测期限。结果 滤纸唾液斑 4℃保存 12周 ,室温保存 6周 ,37℃保存 5天 ,均可正确检出酯酶表型。唾液斑酯酶的三种表型F、FS和S ,F和S表型唾液斑在 4℃保存12周 ,室温保存 6周 ,37℃保存 5天 ,均可正确检出 ;FS表型唾液斑在 4℃保存 13周 ,室温保存 7周 ,37℃保存 6天 ,均可正确检出。结论 4℃保存的唾液斑酯酶表型的可测期限比室温及 37℃条件下保存的长。在同样温度条件下保存的唾液斑 。

底物浓度对特异性酯酶染色积分的影响

目的探讨底物浓度对特异性酯酶(SE)染色积分的影响。方法 1例患者中,取每例患者骨髓片3张,分别浸入3种底物浓度孵育液中进行SE染色。结果底物浓度0.25、1.0、2.5mg/10mL的SE染色积分均数分别为(88.6±51.1)、(113.1±59.3)、(125.2±62.8)分。结论适当提高底物浓度,可提高SE染色灵敏度。

Cas9-CRISPR敲除hae3基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响

为获得hae3基因缺失的突变体,并研究hae3基因对血红蛋白生成的影响,以斑马鱼Danio rerio为研究对象,利用Cas9-CRISPR技术,成功建立了缺失血红蛋白hae3基因的鱼类模型,采用显微注射技术将hae3 sgRNA与Cas9 RNA混合后对斑马鱼第一细胞期受精卵动物极进行注射,利用序列测定与比对、T7核酸酶酶切方法成功检测到了hae3基因的敲除,并对缺失hae3基因的斑马鱼和对照组斑马鱼同时进行固蓝(O-dianisidine)染色。结果表明,与对照组相比,试验组斑马鱼血红蛋白含量明显下降,并有畸形表型。研究表明,胚胎时期hae3基因的缺失会严重影响斑马鱼血红蛋白的生成,而且伴随畸形发育表型。

CRISPR/Cas9技术敲除hbae1.1基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响

利用CRISPR/Cas9技术敲除hbae1.1基因,获得缺失hbae1.1基因的纯合突变体,并研究缺失hbae1.1基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响。根据斑马鱼hbae1.1基因设计敲除靶点,并制备相应gRNA,将gRNA与Cas9蛋白以一定比例混合后通过显微注射注入斑马鱼受精卵一细胞期的动物极。通过T7E1核酸内切酶酶切、测序和序列比对后检测到成功敲除了hbae1.1基因,并通过与WT交配和内交,成功获得F 2代纯合突变体。将hbae1.1基因缺失的纯合突变体与野生型斑马鱼WT所产受精卵一起进行固蓝(o-Diansidine)染色,结果显示,与对照组WT相比,突变体的血红蛋白含量明显减少。研究表明,hbae1.1基因的缺失会对斑马鱼血红蛋白的生成造成一定影响。同时hbae1.1基因的研究为了解鱼类血红蛋白的发生发育提供一定基础。

重氮盐及磷酸萘酚盐浓度对NAP染色结果的影响

目的通过观察磷酸萘酚盐和重氮盐不同浓度下染色结果,选择偶氮偶联物的种类和最佳实验浓度。方法用4种不同重氮盐染色同1份标本,观察染色效果,选择较理想的重氮盐;随机抽取11例健康体检者,每例采集10份标本平均分为2组,1组用5种不同浓度的重氮盐染色,另1组用5种不同浓度的萘酚AS-BI磷酸盐染色,观察阳性率和阳性指数有无差异,选择最佳浓度。结果固蓝RR染色结果最好;0.4 mg/ml是固蓝RR在NAP染色中的最佳浓度(阳性率F=84.86,P=0<0.05;阳性指数F=76.93,P=0<0.05,t0.4-0.8=1.88,P=0.09>0.05,但0.4 mg/ml组阳性指数高于0.8 mg/ml组);0.02 mg/ml是磷酸AS-BI萘酚盐在NAP染色中的最佳浓度(阳性率t4-5=6.34,P=0<0.05;阳性指数t4-5=3.45,P=0.01<0.05;其余组别之间差异均无统计学意义,P>0.05)。结论固蓝和磷酸萘酚盐应选择最佳浓度,不但减低成本浪费,同时提高了染色效果和灵敏度。