葱白提取物对高脂血症大鼠SREBP2/PCSK9信号通路和线粒体功能的影响

目的探讨葱白提取物(FOB)对高脂血症(HLP)大鼠固醇调节元件结合蛋白(SREBP)2/前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9信号通路和线粒体功能的影响。方法脂肪乳灌胃法构建大鼠HLP模型并进行模型鉴定,将大鼠分为:正常组、模型组、FOB低、中、高剂量组、瑞舒伐他汀组。生化方法检测血清脂质含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态变化,油红O染色观察脂质沉积情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western印迹分别检测低密度脂蛋白受体(LDLR)、PCSK9和SREBP2 mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察肝组织线粒体,流式检测活性氧(ROS)及线粒体膜电位,qPCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体融合蛋白(mfn)1、mfn2、神经萎缩蛋白(OPA)1、线粒体动力相关蛋白(Drp)1表达水平。结果与模型组比较,FOB能够显著降低血脂水平,减少脂质沉积,修复肝组织损伤,升高LDLR水平,降低PCSK9和SREBP2水平,缓解肝组织线粒体损伤,降低ROS水平,升高线粒体膜电位,升高mtDNA拷贝数、mfn1、mfn2、OPA1水平,降低Drp1蛋白水平。结论FOB能够降低血脂、改善线粒体功能,其机制可能与FOB调控SREBP2/PCSK9信号通路有关。

PCSK9/LDLR通路介导姜黄素烟酸酯促进HepG2摄取脂质

为研究PCSK9/LDLR通路介导姜黄素烟酸酯(CurTn)降低血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),减少动脉内膜下脂质沉积的分子机制,用5、10、15μmo/L姜黄素烟酸酯与25 mg/L LDL共孵育Hep G2细胞24 h,分别采用油红O染色、胆固醇荧光定量试剂盒、Di I-LDL摄取检测细胞内胆固醇含量及LDL摄取情况,用逆转录定量聚合酶链反应(RT-Q-PCR)检测LDLR及SREBP2的m RNA表达,蛋白质印迹检测LDLR、SREBP2及PCSK9蛋白表达.随姜黄素烟酸酯作用浓度的增高细胞内脂滴显著增多,细胞内游离胆固醇(FC)、总胆固醇(TC)含量增高,细胞内胆固醇摄取增多;RT-Q-PCR和蛋白质印迹检测发现,与对照组(Control)比较,5、10、15μmo/L姜黄素烟酸酯处理组LDLR蛋白表达增高,SREBP2 mRNA表达水平升高,PCSK9蛋白表达降低,但对LDLR mRNA及SREBP2蛋白表达无影响.结果表明:姜黄素烟酸酯通过降低PCSK9、减少LDLR降解、升高LDLR蛋白表达,促进HepG2细胞胆摄取胆固醇.初步说明CurTn可能通过抑制PCSK9介导LDLR溶酶体降解,促进肝脏清除血浆LDL-C水平.

血清PCSK9在2型糖尿病患者中的作用机制及临床意义

目的探讨2型糖尿病患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)水平检测的临床意义以及PCSK9的作用机制。方法选取体检者中的2型糖尿病患者74例作为糖尿病组;同时选取与其年龄性别相匹配的体检健康者76例作为对照组。检测纳入研究者血清PCSK9水平及临床相关指标:空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)。分析血清PCSK9水平与LDL-C、hs-CRP的相关性。以不同水平葡萄糖(高水平:30 mmol/L;低水平:5 mmol/L)孵育HepG2细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)及Western Blot检测固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及PCSK9的表达。采用Betulin和SREBP2 siRNA抑制SREBP2,检测SREBP2抑制对PCSK9表达水平的影响。结果糖尿病组血清PCSK9水平高于对照组(P<0.05),糖尿病组TC、TG、LDL-C、FPG、HbA1c、hs-CRP均高于对照组(P<0.05)。糖尿病患者血清PCSK9水平与LDL-C、hs-CRP水平呈正相关(r=0.593、0.424,P<0.05)。高水平葡萄糖孵育的HepG2细胞,SREBP2及PCSK9表达水平高于低水平葡萄糖孵育的细胞(P<0.05);SREBP2受到抑制后,PCSK9的表达水平降低(P<0.05)。结论糖尿病患者血清PCSK9水平升高,高水平血糖可能通过诱导转录因子SREBP2的表达来提高PCSK9的表达水平。