27-羟基胆固醇在乳腺癌进展中的作用及分子机制研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,也是女性癌症死亡的主要原因。高胆固醇血症和肥胖是乳腺癌发病的潜在危险因素,体内高胆固醇水平与乳腺癌的发展密切相关。然而,胆固醇代谢产物对乳腺癌进展的影响尚未完全阐明。胆固醇在体内有多种代谢产物,其中27-羟基胆固醇(27-hydroxycholesterol,27HC)是人体内循环水平最高的胆固醇羟基代谢物,是胆固醇促进乳腺癌发展的重要因素,可在促血管生成、上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)、内皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)及抑制免疫功能等多方面促进乳腺癌的侵袭转移。

胆固醇7α-羟化酶基因与妊娠期增重及妊娠结局相关性研究

目的:分析孕前体重指数(BMI)正常的单胎初产妇,胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因与妊娠期增重及妊娠结局相关性。方法:选择孕前BMI正常的单胎初产妇494例,根据是否合并妊娠期糖尿病(GDM)分为健康组(278例)与GDM组(216例),两组均行CYP7A1基因-204A/C多态性检测,在产前1周收集血液样本常规行空腹血糖(FBG)、血脂指标检测,并统计两组妊娠期增重程度与妊娠结局,进一步分析CYP7A1基因-204A/C多态性与妊娠期增重、不良妊娠结局等指标的相关性。结果:健康组CYP7A1基因-204A/C多态位点的等位基因A、C频率分别为56.12%、43.88%,GDM组分别为58.80%、41.20%,两组基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡原理(P>0.05)。GDM组甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、FBG水平高于健康组,妊娠期增重以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平低于健康组(均P<0.05);各基因型亚组间比较,健康组的CC基因亚组FBG水平低于AA基因亚组,AC基因亚组的HDL-C水平高于AA基因亚组(均P<0.05);GDM组的CC基因亚组妊娠期增重小于AA基因亚组(P<0.05)。两组产妇再按照妊娠期增重标准不同进行分组,在妊娠期增重≤14.0 kg组中,CC基因型亚组的TG水平明显高于AA基因型亚组,且巨大儿发生率明显高于AA基因型亚组(均P<0.05);在妊娠期增重>14.0 kg组中,CC基因型亚组的FBG水平明显小于AA基因型亚组(P<0.05)。Pearson相关性分析,CC基因型与妊娠期增重呈负相关性(r=-0.339,P=0.004),与妊娠不良妊娠结局呈正相关性(r=0.214,P=0.011)。结论:CYP7A1-204A/C基因多态性或导致CYP7A1酶的表达或活性改变,可能对产妇妊娠期增重和新生儿不良妊娠结局产生影响。然而其调控机制较为复杂,尚需要更多研究来加以证实,以方便后期更好地进行妊娠期营养管理和母婴保健。

HMG-CoA还原酶ScrFI基因多态性对高胆固醇血症和AI的影响:一个中老年人群的横断面研究

目的:探讨3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)的基因多态性对高胆固醇血症和动脉粥样硬化指数(AI)的影响。方法:检测南京市常住汉族174名中老年人血总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),计算AI;使用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测HMG-CoA还原酶ScrFI基因多态性。结果:高胆固醇血症患者87例(高胆固醇组),男21例,女性66,平均年龄(63.59±8.37)岁;胆固醇正常87例(正常组),男21例,女66例,平均年龄(62.92±7.60)岁。高胆固醇组AA基因型频率为25.10%,Aa基因型频率为55.31%,aa基因型频率为19.59%;正常组AA基因型频率为18.39%,Aa基因型频率为52.87%,aa基因型频率为28.74%;高胆固醇组的a等位基因频率为55.17%,高于正常组的47.13%,但差异无统计学意义(P>0.05),AA基因型人群的血HDL-C水平显著高于Aa和aa基因型人群(P<0.05);胆固醇正常组AA基因型人群的AI显著低于aa型基因人群(P<0.05);两组人群的AI随突变型杂合子和突变型纯合子的发生逐渐升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HMG-CoA还原酶ScrFI基因多态性可能是高胆固醇血症发生的遗传易感因素之一;HMG-CoA还原酶ScrFI基因突变可能会影响HMG-COA还原酶的活性,降低对胆固醇的抑制作用,增加总胆固醇和LDL-C的合成,较暴露于同样环境中的基因非突变型人群发生高胆固醇血症和动脉粥样硬化的风险可能会增高。

甜瓜果形基因CmSUN25-26-27a的鉴定和分子标记

【目的】挖掘甜瓜果形相关基因,为甜瓜果实形状的遗传改良提供理论基础。【方法】通过全基因组鉴定,系统发育分析,结合表达量与果形的关联分析来鉴定参与甜瓜果形调控的CmSUN基因,并利用候选基因在自然群体中的序列变异开发相关分子标记。【结果】通过全基因组鉴定及系统发育分析,鉴定到甜瓜CmSUN家族的CmSUN25-26-27a基因。该基因在开花当天的雌花中有显著的表达,并且在不同果形甜瓜中的表达量与果形指数(fruit shape index,FSI)呈正相关关系;对200份自然群体的序列分析发现,CmSUN25-26-27a基因编码区存在一个SNP-Single Nucleotide Polymorphism(A/G),导致了编码氨基酸的非同义突变,含有CmSUN25-26-27a^(A)等位基因的厚皮甜瓜的FSI显著高于含CmSUN25-26-27a^(G)等位基因的厚皮种质。该SNP位点将厚皮甜瓜按果形大致分为FSI>1.5(A)和FSI<1.5(G)两种类型。根据该SNP位点设计了用于区分甜瓜果形的dCAPS标记。【结论】CmSUN25-26-27a同源基因广泛参与葫芦科作物的果形调控,该基因在甜瓜中的表达量及序列变异与甜瓜FSI具有显著相关性。

苦荞黄烷酮3-羟化酶基因FtF3H及其启动子的克隆与功能分析

【目的】克隆苦荞FtF3H基因及其启动子序列,探究该基因的生物学效应及启动子对环境因素与激素的响应。【方法】基于苦荞基因组和转录组数据克隆FtF3H基因及其启动子,对二者进行生物信息学分析,采用qRT-PCR技术检测FtF3H对MeJA、ABA和光处理的响应,进一步利用转基因拟南芥技术,分析FtF3H的过表达对黄酮合成的影响。【结果】苦荞FtF3H基因DNA序列长2034 bp,包括2个内含子和3个外显子;其ORF序列为1104 bp,推导的FtF3H蛋白含367个氨基酸残基,归类于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶超家族且具有典型的植物F3H的分子特征。启动子PFtF3H在核心启动子基序外,还含有数目众多的光应答元件和激素响应元件,qRT-PCR检测结果显示,PFtF3H可强烈响应ABA、MeJA和光照的诱导。转基因拟南芥中,FtF3H的过表达可引起总黄酮含量显著增加(P<0.05),黄酮合成相关酶基因,AtANS、AtDFR和AtF′3H等的表达量显著上调(P<0.05),而拟南芥内源的AtF3H表达受到抑制(P<0.05)。【结论】苦荞FtF3H基因是一个典型的植物黄烷酮3-羟化酶,其表达受到激素和光的调控,在拟南芥中的过表达可促进黄酮的合成和积累。

胆固醇7α-羟化酶基因A-204C单核苷酸多态性及其与血浆血脂的关联

为探讨胆固醇7α-羟化酶基因(CYP7A1)多态性与中国四川汉族人群的分布及其与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)易感性的关系,对183例CHD患者和101例对照用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)进行CYP7A1基因A-204C基因座Eco31I酶切多态性分析。结果可见CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因C、A频率在CHD组和正常对照组分别为0.840、0.160和0.822、0.178,基因频率分布符合Hardy-Weiberg平衡定律。CYP7A1基因A-204C多态基因座基因型频率,等位基因A、C频率在CHD患者组和正常对照组间比较差异无显著性(P>0.05),但冠心病患者组中AA,AC,CC3种基因型之间总胆固醇(TC)的差异具有显著性(P<0.05),AA基因型患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较AC,CC基因型患者显著降低(P<0.05);而对照组中CC,CA基因型个体间总胆固醇(TC)水平差异有显著性(P<0.05)。中国汉族与白种人CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因频率比较,两者差异具有显著性(P<0.01)。提示CYP7A1基因A-204C多态基因座多态性与CHD无相关性,但与总胆固醇存在较密切的关联(P<O.05),在CHD患者组AA基因型中高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降(P<0.05)。

胆固醇7α-羟化酶在毕赤酵母中的异源表达

胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)是胆固醇分解为胆汁酸的限速酶,其催化胆固醇为7α-羟基胆固醇,7α-羟基胆固醇是重要的甾体药物及中间体。以人源CYP7A1作为研究对象,首先构建了重组毕赤酵母/pPIC3.5K-CYP7A1;然后对7α-羟化酶进行分子改造,之后将酶与不同来源NADPH细胞色素氧化还原酶(CPR)适配,以提高目的产物7α-羟基胆固醇的产量。其中突变体G485A将7α-羟基胆固醇的产量提高了8.70%;5种不同来源的CPR与CYP7A1共表达毕赤酵母菌株均可提高7α-羟基胆固醇的产量,并且罗汉果(Siraitia grosvenorii)来源的CPR(SgCPR)与CYP7A1适配性最好,使7α-羟基胆固醇的产率提高了82.26%;在以上研究的基础上,构建突变体G485A与SgCPR共表达毕赤酵母菌株,最终7α-羟基胆固醇的产量提高了133.79%,其产量为0.25 mg/L。实验在毕赤酵母中成功异源表达人源胆固醇7α-羟化酶,并通过分子改造及与不同来源CPR适配的方法提高了7α-羟基胆固醇的产量。

胆固醇7α-羟化酶基因研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。

新复合杂合基因突变致非经典21-羟化酶缺陷症1例报告并文献复习

目的 报道1例非经典21-羟化酶缺陷症(21-hydroxylase deficiency, 21-OHD)患者的基因类型,丰富该类疾病的遗传数据库。方法 收集我院收治的1例非经典21-OHD患者临床资料,结合基因测序结果,以明确诊断。采集其亲属外周血,针对CYP21A2进行高通量基因测序,并结合相关文献进行复习。结果 患者,女,16岁,临床表现为阴蒂肥厚,无月经来潮,多毛、痤疮,青春前期身体呈生长加速现象,骨龄提前。基因检测结果显示,CYP21A2基因有两个复合杂合变异[错义突变c.1451G>A(p:R484Q),缺失突变deletion exon 1~3]。通过对其家系进行测序,发现错义突变c.1451G>A(p:R484Q)来自于其外祖父及母亲,而缺失突变deletion exon 1~3来自于其祖母和父亲。结论 发现了1例新复合杂合基因突变致非经典21-羟化酶缺陷症患者,丰富了21-OHD致病突变数据库,有助于提高临床医师对该病的认识。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与儿童血脂水平的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因多态性与儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31Ⅰ酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的三型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性(P<0.05)。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,且其差异具有显著性(P<0.05)。三型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

绵羊高繁殖力候选基因类固醇21-羟化酶(CYP21)的研究

通过采取PCR-SSCP和限制性内切酶酶切的方法检测类固醇21-羟化酶(steroid 21-hydroxylase,CYP21)基因的10个外显子在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)、中等繁殖力品种(湖羊)和低繁殖力品种(多赛特羊和特克塞尔羊)间的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果显示,在所设计的10对引物中,仅引物P8扩增的片段存在多态性。对于P8扩增得到的片段,经HinPⅠ1酶切后,可在小尾寒羊、湖羊和多赛特羊中检测到AA和AB型,而在特克塞尔羊中只检测到AA型;经BcnⅠ酶切后,在小尾寒羊、湖羊、多赛特和特克塞尔羊中均检测到CC和CD型。测序结果显示AB型与AA型相比在2340位发生了A→G突变,但并未引起所编码的氨基酸发生改变;CD型与CC型相比在2376位发生了G→A突变,也未引起所编码氨基酸的变化。AB型小尾寒羊产羔数最小二乘均值比AA型的多0.96只(P<0.05),CC型和CD型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明CYP21基因的B等位基因是提高绵羊产羔数的一个候选DNA标记。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与小儿血脂的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与湖北儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31I酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的3型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,并且其差异具有显著性。3型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

铅对原代培养小鼠肝细胞胆固醇7α-羟化酶基因表达影响

目的探讨醋酸铅对培养的小鼠肝细胞中胆固醇7α-羟化酶基因表达的作用,为解释铅与血脂之间的关系提供理论依据。方法提取20只昆明小鼠的肝细胞,进行离体培养,以不同剂量的醋酸铅作为处理因素,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胆固醇7α-羟化酶基因的mRNA表达,并进行比较。结果不同剂量的醋酸铅对胆固醇7α-羟化酶基因转录水平的影响不同。高、中剂量组与对照组的差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01),表现为随着染毒剂量的增加,胆固醇7α-羟化酶的mRNA表达量逐渐下降。结论醋酸铅作为一种暴露因素对胆固醇7α-羟化酶基因的表达有抑制作用。

胆固醇7α-羟化酶基因——204A/C基因多态性与胆石病及血清脂质水平相关性的meta分析

目的评价CYP7A1-204A/C基因多态性与胆石病风险及血清脂质水平之间的相关性。方法通过纳入排除标准,获取符合要求的文献;根据研究间的异质性,确定使用随机效应模型或固定效应模型,使用Rev Man对数据进行分析。结果使用5篇文献评估CYP7A1-204A/C基因多态性与胆石病风险间的关系,涉及病例组人群830名,对照组健康人群882名。结果显示,CYP7A1-204A等位基因导致GSD风险提高5%(OR=1.05,95%CI:0.91~1.22,P=0.48),提高幅度不显著。以种族进行的亚组分析后,仍未见显著差异。使用4篇文献对CYP7A1-204A与血清脂质水平的相关性进行分析,涉及病例组人群802名,健康对照组人群691名。所有对象均为亚洲人。数据整合结果显示,AC基因型比AA基因型人群TG水平更高,差异显著(MD=-0.42,95%CI=-0.76~0.08,P=0.01)。显示AC基因型比AA基因型人群TG水平更高,差异显著(MD=-0.42,95%CI=-0.76~0.08,P=0.01)。CC基因型病例组人群的LDL-C显著高于AA基因型病例组人群(MD=-0.40,95%CI=0.06~0.73,P=0.02);AA基因型比CC基因型对照组人群有着更高的TC水平(MD=-0.35,95%CI=-0.60~0.10,P=0.007);AC基因型对照组人群的TG水平高于CC基因型对照组人群,差异显著(MD=-0.35,95%CI=-0.61^-0.08,P=0.01);对比对照组人群的CC基因型,AA基因型人群的HDL-C水平更高(MD=-0.15,95%CI=-0.21~0.09,P=0.0000098)。结论 CYP7A1-204A/C多态性与GSD风险在亚洲人群中无相关性;但是,CYP7A1-204A/C多态性与血清脂质水平有显著相关性。

胆固醇7-羟化酶基因rs4738687多态性与乙型肝炎病毒感染的相关性研究

目的探讨胆固醇7-羟化酶(CYP7A1)基因rs4738687多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。方法回顾性选取2015年1月至2019年2月在德阳市人民医院治疗的HBV感染病人200例(观察组),其中慢性HBV感染者140例,HBV相关肝硬化病人60例;同时选取该院健康体检者120例作为对照组。采用改良多重高温连接酶检测反应技术检测CYP7A1基因的rs4738687位点多态性。结果观察组和对照组rs4738687位点基因型和等位基因分布比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组HBV相关肝硬化病人rs4738687位点AG+GG基因型比例为90.00%,明显高于慢性HBV感染病人35.00%(P<0.05);观察组不同性别、年龄病人rs4738687位点AG+GG基因型比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CYP7A1基因rs473868位点多态性与HBV感染易感性无明显关系,但可能与HBV相关肝硬化发生存在正相关关系。

基于生物信息学分析骨肉瘤的关键基因和qRT-PCR实验验证

目的利用生物信息学方法筛选出与骨肉瘤(osteosarcoma,OS)相关的关键基因,以作为OS的潜在诊断标志物和新治疗靶点。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中检索下载2个符合本研究的OS相关数据集(GSE16088和GSE42572),共包括21例OS组织样本和14例正常骨组织样本。对数据集进行矫正分析鉴定出差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。通过加权基因共表达网络分析方法(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)与DEGs筛选出交集基因。对交集基因进行疾病本体论(Disease Ontology,DO)、基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络分析。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估该PPI网络degree排名前10位的Hubbe基因的表达水平对OS患者的诊断效能,并以另一个OS数据集GSE19276对Hubbe基因进行验证筛选出关键基因。分析关键基因与浸润性免疫细胞的相关性。收集2020年9月1日至2022年6月30日于广西中医药大学第一附属医院住院手术的4例OS患者的OS组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)对关键基因进行实验验证。结果在OS组织与正常骨组织中共筛选出687个DEGs(上调基因523个和下调基因164个)。WGCNA关键模块基因2338个。DEGs与WGCNA关键模块基因共有交集基因545个。DO富集分析结果表明,DEGs与WGCNA结果的交集基因主要与泌尿系统癌症、肾癌、生殖细胞癌、肌肉骨骼系统癌症和胚胎癌等癌症相关。GO富集结果表明,交集基因主要参与骨化的形成、细胞外基质组织和生物矿物组织发育等生物学过程。KEGG通路富集在磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又名Akt)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)信号通路及流体剪切应力和动脉粥样硬化等信号通路上。PPI网络分析中degree排名前10位的Hubbe基因为磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA)、脯氨酰4-羟化酶亚单位α1(prolyl 4-hydroxylase subunit alpha 1,P4HA1)、整合素αⅤ(integrin alphaⅤ,ITGAⅤ)、组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)、连环蛋白β1(catenin beta 1,CTNNB1)、Ⅲ型胶原蛋白α1(collagen typeⅢalpha 1,COL3A1)、Ⅰ型胶原蛋白α2(collagen typeⅠalpha 2,COL1A2)、转导蛋白β样1X相关蛋白1(transducin beta-like 1X-related protein 1,TBL1XR1)、小核核糖核蛋白多肽G(small nuclear ribonucleoprotein polypeptide G,SNRPG)和Ras相关核蛋白(Ras-related nuclear protein,RAN)。以数据集GSE19276绘制ROC曲线验证Hubbe基因表明,P4HA1和ITGAV的准确度较高(均AUC>0.8且P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,P4HA1和ITGAV mRNA在OS组织中高表达(均P<0.01)。结论P4HA1和ITGAV是OS的潜在生物标志物和治疗靶点。

胆固醇-25-羟化酶基因抗病毒功能研究进展

胆固醇-25-羟化酶(cholesterol-25-hydroxylase,CH25H)为干扰素刺激基因,可通过其酶活性产物25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25HC)发挥广谱的抗病毒作用。本文对CH25H的结构、酶活作用、脂肪代谢通路、抗病毒功能以及在免疫中的作用进行了综述。

白细胞介素-27、腺苷脱氢酶、基因检测、结核杆菌培养对结核性胸腔积液的诊断意义研究

目的研究白细胞介素-27(IL-27)、腺苷脱氢酶(ADA)、基因检测以及结核杆菌(MTB)培养用于结核性胸腔积液(TPE)诊断中的意义。方法选取本院收治的TPE患者总共90例为TPE组,另选取同时间段内本院收治的非TPE患者总共98例为非TPE组,两组均开展IL-27、ADA、基因检测和MTB培养,比较两组胸水IL-27、ADA水平和Genexpert MTB/MIF、MTB培养阳性率差异,并观察IL-27、ADA、Genexpert MTB/MIF、MTB培养单项或者联合检测对TPE的检出率。结果TPE组胸水内的IL-27、ADA水平和Genexpert MTB/MIF、MTB培养阳性率均高于非TPE组(P<0.05)。联合IL-27、ADA、Genexpert MTB/MIF、MTB培养对TPE的检出率高于单项检测(P<0.05)。结论IL-27、ADA、基因检测以及MTB培养能协助临床鉴别诊断TPE,且联合几项检测方法能提升对TPE的检出率,值得推广应用到临床。

苦荞黄烷酮3-羟化酶基因F3H的克隆及序列分析

为提高黄酮代谢途径中的关键酶活性,增加苦荞黄酮类化合物的合成量,根据已知植物的F3H基因同源序列,采用RT-PCR和RACE结合的方法,克隆了苦荞黄酮代谢途径中关键酶基因F3H,命名为FtF3H(GenBank登录号:FJ456858)。序列分析结果表明,FtF3H基因长1369bp,编码367个氨基酸,该氨基酸序列及其cDNA序列与葡萄、牵牛F3H等的同源性约80%。二级结构预测表明,随机卷曲是FtF3H蛋白最大量的结构元件,而α-螺旋和β-片层则散布于整个蛋白质中;三维结构建模预测FtF3H蛋白具有铁离子结合位点及2-O-酮戊二酸结合位点等F3H蛋白典型结构。

南丰蜜橘β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆和序列分析

以南丰蜜橘[Citrus reticulata Blanco var.kinokuni(Tanaka)H.H.Hu]基因组DNA为模板,根据已报道的柑橘β-胡萝卜素羟化酶基因保守序列设计4对引物,进行PCR扩增,得到4条长度为470、761、294和991 bp的片段.将这些片段克隆到pMD18-T载体,并进行测序.测序结果拼接成1条2 326 bp的序列.分析发现该序列含6个内含子,7个外显子.内含子两侧有典型的GT-AG保守序列.该序列中预测的编码序列与温州蜜柑、拟南芥等植物的β-胡萝卜素羟化酶基因序列保守性达80%以上,表明该序列确实为β-胡萝卜素羟化酶基因.该基因编码了1个含311个氨基酸的蛋白.将该序列递交到GenBank数据库,序列号为AM408552.