国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用

目的建立国产磁珠结合自动化工作站批量提取案件中生物检材DNA的方法。方法采用国产磁珠结合Bio-Robert Universal System自动化工作站对案件中常见的生物样本进行DNA提取,检测Identifiler系统16个STR基因座,在ABI3130XL遗传分析仪上进行STR分型。其中210份样品同时在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量。结果9100份10类生物检材应用国产磁珠结合自动化工作站,大部分可提取到足够的DNA进行STR检验。STR检验成功率最高的为口腔拭子、肌肉,达100%,接触细胞检材的成功率较低,为50.0%。结论国产磁珠结合自动化工作站可用于案件中常见的大部分生物样本的DNA提取。

国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸中的应用

目的:评价国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸的临床应用价值。方法:首先,用国产磁珠法试剂B与进口磁珠法试剂A(罗氏试剂)对78例标本进行乙型肝炎病毒核酸的平行测定,比较其相关性。然后,对8个梯度浓度的结果重复检测3次,评价其精密度。最后,用试剂B与煮沸裂解法试剂C对58例标本进行比较,评价其阳性检出率。结果:在相关性方面,试剂A与试剂B显著相关(r=0.987,P<0.05)。在精密度方面,3次重复检测结果之间差异无显著性(F=0.999,P>0.05)。在阳性检出率方面,试剂B阳性检出率(60.34%)高于试剂C(39.77%)。结论:国产磁珠法试剂与进口磁珠法试剂相关性强,精密度和阳性检出率高,且价格较低廉,适合临床推广使用。

两种国产磁珠试剂盒对常见PCR抑制物去除效果比较

目的比较国产博坤磁珠试剂盒和Wawasye磁珠试剂盒对法医学常见PCR抑制物的去除效果。方法选择6种常见PCR抑制物,胆汁酸盐、胶原质、腐殖酸、血红素、黑色素和尿素,分别将其与K562 DNA混合后,采用Identifiler试剂盒进行分型,以恰好抑制K562 DNA所有26个不同等位基因的抑制物浓度为标准添加浓度,在此基础上提高每种PCR抑制物的浓度,分别采用两种磁珠试剂盒对混有抑制物的标准品DNA进行纯化处理后,再进行PCR扩增和STR分型检测,统计STR基因座等位基因检出个数。结果分别混有1×、2×和4×标准添加浓度各种抑制物的K562 DNA经博坤磁珠试剂盒纯化后,均可检出所有STR基因座的全部等位基因;经Wawasye磁珠试剂盒纯化后,混有胆汁酸盐、胶原质、血红素和尿素的DNA均可检出所有STR基因座的全部等位基因,而混有腐殖酸和黑色素的DNA未检出任何等位基因。结论除Wawasye磁珠试剂盒无法有效去除腐殖酸和黑色素外,两种国产磁珠试剂盒对大多数PCR抑制物均具有良好去除效果。

国产沙门氏菌免疫磁珠的制备及其应用

目的优化免疫磁珠制备条件,获得捕获性能高、成本低的国产沙门氏菌免疫磁珠,为国产沙门氏菌免疫磁珠的产业化制备奠定基础。方法采用亚微米级羧基磁珠及沙门氏菌多克隆抗体,利用碳二亚胺缩合法制备2 mg级免疫磁珠。以目标菌捕获率、磁珠表面抗体偶联率为评价指标,对4种粒径(100、300、500、1000 nm)的磁珠原材料进行筛选;以目标菌捕获率、磁珠表面抗体偶联率、免疫磁珠表面FITC荧光强度为评价指标,对磁珠与抗体不同的投料比(100:1、100:1.5、100:2、100:2.5、100:3)进行优化;同时,对国产沙门氏菌免疫磁珠与进口免疫磁珠(Dynalbeads~?沙门氏菌免疫磁珠、Bac Trace~?沙门氏菌免疫磁珠)的性能进行比较分析,考察了捕获率、免疫磁珠与目标菌的结合情况、特异性捕获能力等,并在实际样品中进行了应用检测。结果以粒径为300 nm的磁珠为原材料制备的免疫磁珠对浓度为10~2 CFU/mL的目标菌的捕获率为99%、抗体偶联率为34.64%,明显高于其他粒径的免疫磁珠;当投料比为100:2(磁珠:抗体)时,制备的免疫磁珠对浓度为10~2 CFU/m L的目标菌的捕获率为100%,偶联率为52.34%,优于其他投料比;针对不同浓度的鼠伤寒沙门氏菌(10~0~10~6 CFU/mL),国产免疫磁珠的捕获率高于进口免疫磁珠(国产:83%~100%;Dynalbeads~?:57%~74%;Bac Trace~?:9%~40%);在25 mL牛奶中添加(11.9±3.7)CFU鼠伤寒沙门氏标准菌株,国产沙门氏菌免疫磁珠的检出率高于进口免疫磁珠(国产:100%;Dynalbeads~?:70%;Bac Trace~?:40%)。结论优化了制备条件后所制备的国产沙门氏菌免疫磁珠的捕获能力强、价格低、能够实现大体积实际样品中痕量目标菌的100%检出,具有广阔的应用前景,本研究为沙门氏菌免疫磁珠的国产化应用提供了科学数据。

国产免疫磁珠分离细胞的方法学研究及初步应用

目的 :探讨以国产免疫磁珠进行细胞分离的方法 ,并评价直接包被法的特异性和敏感性及其在脐血和骨髓 CD+ 34 细胞分离中的应用。方法 :直接包被法、SPA法、生物素 -亲和素法。结果 :直接包被法、SPA法和生物素-亲合素法均可有效分离细胞 ,但以直接包被法最具优势 ,并证明其有较高特异性和敏感性。应用直接包被法分离脐血及骨髓中的 CD+ 34 细胞率为 5 1%～ 82 % ,台盼蓝拒染率为 82 %～ 88%。结论 :国产免疫磁珠有较好的分离效果 。

国产和进口磁珠提取试剂盒提取微量DNA的对比分析

通过选取目前市面上常见的两款进口、三款国产磁珠提取试剂盒,设计平行对比试验,严格按照各试剂盒的说明书操作,提取纯化微量DNA,再进行STR分型。结果发现,三款国产磁珠试剂盒提取效果更优于进口试剂盒。可见,与进口试剂盒相比,国产磁珠试剂盒提取所需时间更短、提取效果更好、操作更为简便,国产磁珠试剂盒比进口试剂盒更具优势,同样适用于微量生物检材的DNA提取。