乙型肝炎病毒基因B型及基因C型两种国家标准品研制

目的研制乙型肝炎病毒(HBV)基因B型及基因C型两种国家标准品。方法收集我国不同地区的HBV感染者血浆样品,经HBV五项、DNA病毒检测,从中筛选出11份基因分型标准品候选品样品。经HBV序列测定,进化树分析,初步确定2份样品分别为HBV B型及C型标准品候选品。分别将2份候选品离心、分装后,进行HBV基因分型验证测定,并进行定量的协作标定测定。结果确认筛选出HBV基因B型及基因C型标准品,其HBV DNA浓度分别为4.67×10~7IU/mL(CV为3.6%)及3.66×10^(8)IU/mL(CV为2.9%)。装量检查,大于0.5 mL/支,符合规定。均匀性检查,两者P值分别为0.428(F值为1.140)及0.420(F值为1.173),分装的标准品支与支之间浓度均匀无差异。将两种标准品在不同方式保存(反复冻融、4℃保存、室温及37℃放置)后,测定结果与-80℃保存样品测定结果相比较,绝对偏差均在±0.2的范围内,方差分析P值均大于0.1;另外,-20℃保存12个月后与-80℃保存样品两者测定数据分析,B型P值为0.237(F值为1.934)、C型P值为0.173(F值为2.737),P值均大于0.1,稳定性验证符合规定。结论制备了HBV基因B型及基因C型两种国家标准品,为我国HBV基因分型试剂的质量控制和标准化提供了依据。

细菌内毒素国家标准品的协作标定

目的:标定中国食品药品检定研究院细菌内毒素工作标准品(细菌内毒素检测用)。方法:以细菌内毒素国家标准品(9000 EU/支,细菌内毒素检测用)为标准,采用2020年版《中华人民共和国药典》四部1143细菌内毒素检查法中凝胶法和动态浊度法分别对给定的6支细菌内毒素工作标准待标品进行效价标定。结果:待标品预估效价为90 EU/支,标定结果除1支存在偏差外,其余5支效价均在可接受范围。结论:本批待标品采用动态浊度法进行检测时效价较凝胶法测定结果和预估效价均偏低,是否因环境或运输因素使其效价衰减,还有待进一步的实验研究。采用量反应平行线法对动态浊度法测定结果进行尝试计算,结果显示其试品间存在差异,其他全部符合平行,可能是配制时的浓度需要调整。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子国家标准品的研制

目的 建立效价测定用的重组牛碱性成纤维细胞生长因子（ｈＦＧＦ）国家标准品。方法 按ＷＨＯ有 关要求制备标准品，分装、冻干后进行检定，以ｂＦＧＦ国际标准品为标准进行协作标定。结果 经检测外观、无菌实 验合格，水分为０．９９％，于－２０、４和２５℃条件下放置２３个月其生物活性稳定。该标准品经３家实验室协作标定， 共２３次测定，平均效价为６９７１支。实验均数的９５％可信区间为６２６６－７７５３ＩＵ／支，单次实验的９５％参考值范围 为３３９４－１０９６５ＩＵ／支，平均可信限率为 １０．９９５％。结抡 该批重组牛ｂＦＧＦ国家标准品各项指标均符合要求，可作 为国家标准品使用，效价定为７０００ＩＵ／支，批号为０１／９６。

重组人表皮生长因子生物活性国家标准品的研制

【摘 要】目的 建立测定重组人表皮生长因子（rhEGF）活性用国家标准品。方法 按WHO有关要求，制备并检测标准品，以EGF国际标准品为标准进行协作标定。结果 冻干EGF标准品经外观、无菌、水分检测均符合规定，在-20、4、25和37℃保持33个月生物活性稳定，协作标定几何平均效价为6823IU/支。实验均数的95％可信区间为5958～7812IU/支，单次实验的95％参考值范围为2241～12056IU/支，平均可信限率为14．64％。结论 该批EGF标准品可作为国家标准品，效价定为6800IU/支，批号为97/01。

促甲状腺素(TSH)免疫测定用国家标准品的研制

介绍了促甲状腺素（ＴＳＨ）第一次免疫测定用国家标准品（批号：０５３０－９４１２）的制备过程。选用Ｓｉｇｍａ公司ＴＳＨ高纯品，经配制，分装，冷干等一系列标准品制备的常规步骤，制得成品１４００支，以ＷＨＯ２ｎｄＩＲＰ８０／５５８为对照品，经协作标定，本标准品免疫活性为５２０μＩＵ／支。

泰万菌素兽用国家标准品的研制

旨在研制首批泰万菌素兽用国家标准品,用于酒石酸泰万菌素及其制剂中泰万菌素的效价测定。采用精制后的泰万菌素酒石酸盐为原料进行本批泰万菌素标准品的研制,原料分装后按照酒石酸泰万菌素质量标准及《中华人民共和国兽药典》2015年版中的规定对其进行质量检测及均匀性评价,采用紫外-可见分光光度法测定最大吸收波长,60℃减压干燥法测定干燥失重,高效液相色谱法测定泰万菌素A组分,并以原始发明厂的标准品为基准,采用抗生素微生物检定法中三剂量管碟法进行协作标定,对标定结果进行合并计算,作为本批标准品的效价赋值。结果显示,分装后的标准品经60℃减压干燥至恒重后减失重量为2.0%,均匀性评价符合要求,在289 nm的波长处有最大吸收,抗生素微生物检定法测定的泰万菌素效价为822 U·mg-1。本研究研制的首批泰万菌素兽用国家标准品各项检测指标均符合规定,可作为国家标准品发放,用于酒石酸泰万菌素原料及制剂中泰万菌素的效价测定,便于生产企业和质量检定部门进行酒石酸泰万菌素原料及制剂的质量控制,对于提高和保证兽药质量具有重要意义。

免疫测定用甲胎蛋白国家标准品的制备与定值

目的 制备并标定免疫测定用甲胎蛋白（AFP）国家标准品.方法 制备AFP国家标准品冻干品,以酶联免疫法（ELISA）、化学发光法（CLIA）及时间分辨荧光法（TRFIA）对AFP国家标准品进行联合定值,并以AFP国际标准物质做校准,以实现国际单位的溯源.对国家标准品的赋值不确定度进行评定,对均匀性和稳定性进行检验.结果 AFP国家标准品赋值为645 IU/支,不确定度为±43 IU,瓶间精度为1.75％;2～8℃储存16周,与-20℃常规储存比较,相对偏差不大于5.0％,长期稳定性考察18个月,测定值偏差不大于5.0％.结论 本研究制备的免疫测定用AFP标准品符合国家标准物质的要求.

重组链激酶(rSK)国家标准品的研制

目的 建立效价测定用重组链激酶国家标准品。方法 以NIBSC的国际标准品为标准 ,采用体外溶圈法 ,按WHO要求组织了 3家实验室 ,对该批rSK国家标准品 (批号 96 0 70 1)的效价进行协作标定。结果 经统计学分析 ,均数为 495IU/支 ,95 %可信区间为 45 7～ 5 35IU/支 ,单次测定的 95 %标准值范围为 30 1～ 70 6IU/支。该批国家标准品效价确定为 5 0 0IU/支。 4种不同温度存放 2 9个月的样品 ,效价稳定。结论 该批rSK效价稳定 ,可作为国家标准品。

第一批重组人红细胞生成素国家标准品的研制

目的 建立符合国家标准品要求，用于重组人红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）质量控制的ｒＨｕＥＰＯ国家标 准品。方法 用英国 ＮＩＢＳＣ提供的 ＷＨＯ ｒＨｕＥＰＯ（８７／６８４），采用经典的多血症小鼠－”Ｆｅ体内生物学活性测定法， 对我国第一批重组人红细胞生成素国家标准品（９８０５２８）进行了标定。用阿根廷ＩＮＳＴＴＴＵＴＯ ＳＩＤＵＳ Ｓ．Ａ．进行了复 核标定。结果 该批国家标准品效价为８２ＩＵ／瓶，生物学活性稳定。结论９８０５２８批ｒＨｕＥＰＯ可作为国家标准品， 用于重组红细胞生成素制品体内生物学活性测定。

首批肝素抗Ⅱa因子效价测定用国家标准品协作标定

目的建立肝素抗Ⅱa因子效价测定用国家标准品。方法通过理化分析及效价测定,筛选出适合的标准品原料,溶解、分装、冻干后制备成肝素国家标准物质待标品(140817-201501)。以第6次肝素国际标准品07/328为标准品,分别采用《中国药典》2015年版和2010年版肝素钠效价测定方法测定待标品的抗Ⅱa因子效价、抗Ⅹa因子效价和抗凝效价,由13个实验室协作标定。为考察肝素国家标准品的延续性,上一批肝素钠国家标准品(150509-200912)在协作标定中使用。结果效价标化结果经统计学分析,实验室内及实验室间的几何变异系数(geometric coefficient of variation,gcv)均小于10%;以第6次肝素国际标准品07/328作为标准品,待标品抗Ⅱa因子效价为2011 IU/安瓿,抗Ⅹa因子效价为1998 IU/安瓿,抗凝效价为1992 IU/安瓿;对各实验室抗Ⅱa因子效价、抗Ⅹa因子效价、抗凝效价几何均值进行单因素方差分析,结果没有显著性差异;各实验室使用国际标准品测定待标品抗Ⅱa因子效价和使用上一批肝素钠国家标准品(150509-200912)测定的待标品抗凝效价几何均值进行welch检验,结果没有显著性差异,肝素国家标准品的延续性良好。结论经国家药品标准物质委员会审定后批准,待标品(140817-201501)用作肝素效价测定用国家标准品,效价为2011 IU/安瓿。

甲胎蛋白免疫测定用国家标准品的建立

甲胎蛋白(AFP)是一种血清糖基化蛋白,在正常成人血清中含量极少。AFP主要由胎儿卵黄囊和肝脏产生,其次是胃肠道黏膜、肾脏也可少量合成。AFP是单链糖蛋白,分子量65~70kD,其物理化学特性和氨基酸组成类似于血清白蛋白,但抗原性不同[1-3]。作为一种肿瘤标记物,AFP可以用于肿瘤的诊断疗效监控,70%~95%的原发性肝癌患者呈现AFP水平升高,AFP异常升高提示原发性肝癌的发生[4-7]。妊娠期可通过AFP监测进行疾病的筛查和诊断,产前普查羊水中AFP水平可监控胎儿异常,孕妇血清异常升高提示胎儿神经管缺陷畸形,如脊柱裂、无脑儿、脑积水等,AFP降低提示未出生的婴儿有唐氏综合征的危险性[8-11]。

第7批细菌内毒素国家标准品的建立

目的建立第7批细菌内毒素国家标准品。方法冻干制备了2批细菌内毒素国家标准品候选品。以第2批细菌内毒素国际标准品(94/580)为基准,采用凝胶法、动态浊度法和终点显色法3种方法,组织了13家单位进行协作标定。结果与结论通过比较2批候选品标定结果的精密性及对3种标定方法是否存在显著性差异,最终确定其中1批候选品为第7批细菌内毒素国家标准品,效价为10000EU.支-1,批号:150600-200707。

人胰岛素免疫测定用国家标准品研制

一批人胰岛素原料，经高效液相、聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射免疫分析证实是具有较高生物活性和免疫活性的单组分人胰岛素，适宜作为国家免疫标准品原料。用含蔗糖和人血清白蛋白的醋酸溶液将此原料配制成１０ＩＵ／Ｌ溶液，按每支１ｍＬ分装，经冻干制备成待标品。用ＷＨＯ人胰岛素免疫测定用国际标准品为对照品，进行免疫活性标定，２２组结果的均值为１０．０４ｍＩＵ／支。分别以国际标准品和待标品为对照测定同一组质控血清，其均值接近，且在统计学中无显著差异。证明本待标品可做为免疫测定用国家标准品。

第一次低分子量肝素效价测定用国家标准品协作标定

通过理化指标及活性等测定,筛选出适合的标准品原料,溶解、分装、冻干后制备成低分子量肝素(low molecular weight heparin,LMWH)国家标准物质待标品(140647-200801)。应用第二次国际标准品(01/608),采用生色底物法(chromogenic substrate method),组织国内8个实验室对其效价进行协作标定。效价标化结果经统计学分析,实验室内及实验室间的几何变异系数(geometric coefficient of var-iation,gcv)均小于10%。经药品标准物质专家委员会审定后批准,待标品(140647-200801)用作LM-WH效价测定用国家标准品,其抗Xa因子效价为1151 IU/安瓿,抗IIa因子效价为424 IU/安瓿。

首次DNA重组人生长激素(rhGH)国家标准品的研制

协作标定了首批重组人生长激素（ｒｈＧＨ）国家标准品，以第一次国际标准品为对照，按药典方法：生物测定（去垂体大鼠体重法和胫骨法）及理化测定（ＨＰＳＥＣ）．首次ｒｈＧＨ和Ｍｅｔ－ｒｈＧＨ国家标准品批号为：０６２７－９７０１Ａ和Ｂ；其蛋白含量分别为１．８和２．１ｍｇ／ａｍｐ，生物效价分别为５．０和５．５ＩＵ／ａｍｐ．

第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品协作标定

目的 协作标定第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品。方法 以 WHO 97/592批人凝血因子Ⅶ浓制剂国际标准品为对照,采用一期法标定我国首批人凝血因子Ⅶ因家标准品,并将标准品分别置4℃、22℃、37℃保存5个月,用加速破坏试验进行稳定性考查。结果 该批标准品效价为16.0IU/支,稳定性良好。其他项目均达到国家标准品要求。结论 已成功研制第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品。

第二代百日咳疫苗毒性国家标准品的建立

目的建立第二代百日咳疫苗毒性国家标准品(简称二代毒性标准品)。方法选用百日咳疫苗生产菌株(编号CS株CMCC58003)进行发酵罐培养,将收获的百日咳菌液灭活后分装冻干后,作为第二代百日咳国家毒性标准品的候选品(简称候选毒性标准品)。以第一代百日咳疫苗毒性国家标准品为标准(简称一代毒性标准品),由4个单位协作标定候选毒性标准品,采用热加速法考察候选毒性标准品的稳定性。结果共获得检定合格的候选毒性标准品1 800支;经4个实验室协作标定,每支二代毒性标准品LPU为21,HSU为41;且稳定性良好。结论候选毒性标准品各项指标均符合要求,可作为第二代百日咳疫苗毒性国家标准品使用。

锂、钠、钾、镁、钙、氯复合电解质冰冻人血清国家标准品的研制和性能评价

目的研制锂、钠、钾、镁、钙、氯复合电解质冰冻人血清国家标准品,并评价其性能,促进锂、钠、钾、镁、钙、氯电解质测定的标准化。方法收集含不同浓度锂、钠、钾、镁、钙、氯离子的无溶血、脂血和黄疸血清,经多重过滤、除菌后分装,制备成3个水平的候选品,-70℃保存。以钾离子作为均匀性评价的特性量,采用单因素方差分析评价候选品的均匀性。以钾、钠、氯离子作为稳定性评价的特性量,采用线性回归分析评价候选品的稳定性。采用参考方法或经验证的方法定值,并计算不确定度。评估候选品、新鲜血清样本在参考方法或经验证的方法与4个常规检测系统间的互通性。结果3个水平侯选品中,钾离子的均匀性检验F值分别为1.6301、1.4986和1.0208,均<F0.05;钾、钠、氯离子在2~8℃、20~25℃和-20℃条件下,均至少可稳定30d。3个水平侯选品中,锂离子定值结果分别为(0.649±0.022)、(1.195±0.032)、(1.334±0.008)mmol/L(k=2),钠离子定值结果分别为(120.057±2.206)、(142.030±1.521)、(158.228±1.293)mmol/L(k=2),钾离子定值结果分别为(5.042±0.143)、(5.739±0.106)、(6.158±0.094)mmol/L(k=2),镁离子定值结果分别为(0.732±0.021)、(0.857±0.026)、(1.144±0.026)mmol/L(k=2),钙离子定值结果分别为(2.014±0.078)、(2.348±0.056)、(3.070±0.024)mmol/L(k=2),氯离子定值结果分别为(90.814±2.005)、(108.875±0.908)、(128.156±1.453)mmol/L(k=2)。钠、钾、镁、钙和氯离子3个水平侯选品浓度均在新鲜血清样本的95%可信区间内,互通性良好。结论制备的锂、钠、钾、镁、钙、氯复合电解质冰冻人血清国家标准品候选品均匀性、稳定性好,钠、钾、镁、钙和氯离子侯选品互通性良好,定值准确可靠,可作为国家标准品使用。

第四批人凝血因子VIII国家标准品制备和标定

目的:建立经两步病毒灭活工艺制备的人凝血因子VIII国家标准品,以替代第三批人凝血因子VIII国家标准品。方法:按《中国药典》2010年版三部对人凝血因子VIII产品的生产工艺要求和质量标准,制备第四批人凝血因子VIII国家标准品(批号20100101),用WHO第七批人凝血因子VIII国际标准品(批号99/678),采用一期法进行协作标定,采用加速破坏试验进行稳定性考察。结果:批号20100101人凝血因子VIII国家标准品效价为12.1IU/支,稳定性好,其它项目指标均达到国家标准品的要求。结论:建立了符合国家标准品要求、并经病毒灭活的第四批人凝血因子VIII国家标准品。