图像流式细胞仪在中华绒螯蟹血细胞分群及吞噬功能研究中的应用

为了更精确地对甲壳动物血细胞进行快速分类和功能分析,本研究以中华绒螯蟹为例,依据其血细胞内具有颗粒结构的特征,与常规显微观察对比,探讨了一种基于图像流式细胞仪的血细胞自动化分类新方法,并测量了体质量为(10±3) g的中华绒螯蟹的血细胞对直径1μm微球的吞噬情况。结果显示,两种方法都可将中华绒螯蟹血细胞分为4个类群。显微镜观察分类基于胞内可见颗粒,但由于缺乏精细的量化标准,批次样品的人工辨识结果波动较大;而图像流式方法以胞内全部颗粒结构为对象,利用高精度检测模块测量,结果更准确、客观,而且通量高、重复性好。测量结果显示,中华绒螯蟹血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒及大颗粒细胞占比分别为40.62%±2.65%、36.68%±6.84%、7.80%±1.16%和16.51%±5.60%,依据测量的颗粒特征区分的4个类群界限清晰,缺乏过渡样点,提示各类细胞之间可能没有相互转化。进一步的活体微球吞噬实验证实,中华绒螯蟹的4类血细胞都具有吞噬功能,并以无颗粒细胞为主要吞噬类群;吞噬微球的细胞比例在注射后6 h内呈钟型曲线变化,4 h可达峰值(5.69%±0.44%),表明中华绒螯蟹血细胞能高效清除血淋巴中的异物。研究表明,图像流式细胞仪适合于中华绒螯蟹的血细胞分类分析和功能研究,本研究结果为同类研究提供了重要参考,将有助于更全面了解甲壳动物血细胞的功能。

图像辅助流式细胞仪在中华绒螯蟹血细胞分析中的应用

[目的]探讨图像辅助流式细胞仪在中华绒螯蟹血细胞分类中的应用。[方法]建立了一种基于新型图像辅助流式细胞仪的自动化方法,并与显微镜观察对比,分析其在中华绒螯蟹血细胞分类方面的效果。[结果]2种方法均显示中华绒螯蟹血细胞可根据胞内颗粒差异分为4类。利用该研究建立的新方法测量河蟹血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒和大颗粒细胞的比例分别为(54.33±3.38)%、(27.63±2.10)%、(5.43±0.35)%和(12.51±3.38)%。由于显微镜参考的是可辨识的颗粒结构,而流式细胞仪则根据反映胞内全部颗粒差异的色散测量结果进行分类,因此2种方法的分析结果既有联系又不完全一致。[结论]上述结果提示中华绒螯蟹的各种血细胞之间还有尚未了解的差异,因此可能存在更多的细胞种类。图像辅助流式细胞仪既可以清晰地划定设门区间,又能通过图像佐证结果的准确性,还可凭借其高通量分析能力进一步确保结果的可靠性。该方法有助于促进水生动物血细胞的自动化分类分析与研究。

图像辅助流式细胞仪在鲫鱼血细胞分析中的应用

[目的]探讨图像辅助流式细胞仪在鲫鱼血细胞分析中的应用。[方法]将图像辅助流式细胞仪引入鲫鱼血细胞分类计数分析,并进一步用于急性铜离子胁迫对鲫鱼血细胞影响的机制探讨。[结果]多维全景分析仪独有的图像辨识功能较好地解决了有核红细胞对不同类群细胞分群设门分析的干扰,测量鲫鱼白细胞类群占比为1.18%~1.43%,与同类研究结果一致;120 mg/L铜离子急性刺激能够导致鲫鱼白细胞计数下降,并提示细胞水肿是铜离子的一种急性毒性效应。[结论]该研究建立了一种适用于含有核红细胞样本的操作简便、自动化程度较高的血细胞分群分析方法,可为同类研究提供新的技术手段。

全自动图象细胞仪在膀胱移行细胞癌尿细胞学诊断中的应用及临床意义

目的探讨全自动图像细胞仪对尿脱落细胞DNA异倍体的检测在膀胱肿瘤诊断中的价值及临床意义。方法采用全自动图像细胞仪对40例膀胱移行细胞癌(BTCC)患者和20例良性血尿患者尿样中脱落细胞进行DNA定量分析,同时行常规尿细胞学检查。结果BTCC患者尿液脱落细胞经常规尿细胞学和全自动图像细胞仪检查,阳性率分别为27.5%(11/40)和67.5%(27/40),20例良性血尿患者尿液标本经2种方法检查均为阴性。DNA倍体在膀胱移行细胞癌患者的尿液中为(7.08±2.34)c,在非膀胱移行细胞癌患者的尿液中为(2.95±3.06)c,P<0.01;临床分期Tis^T1为(6.29±3.61)c,T2~T3为(8.55±4.16)c,病理分级Ⅰ级为(5.85±1.72)c,Ⅱ级为(7.24±2.01)c,Ⅲ级为(9.25±1.81)c,DNA含量随着分期分级的增加而增加。结论应用全自动图像细胞仪对BTCC患者尿脱落细胞DNA的定量分析能够反映患者尿细胞中的恶性变化,可以作为BTCC诊断的辅助技术。

全自动图象细胞仪在肺癌痰细胞学诊断中的应用1.DNA异倍体作为标志物诊断肺癌

目的探讨全自动图像细胞仪对痰液脱落细胞DNA异倍体的检测在肺癌诊断中的价值。方法采用全自动图像细胞仪对 5 0例肺癌、30例肺结核患者和 4 0例健康人痰样中脱落细胞DNA进行定量分析 ,同时与常规痰细胞学和刷检细胞学结果进行比较。结果 5 0例肺癌患者痰样中DNA异倍体 (DI>2 .5或 5C)阳性率为 2 0 / 5 0 (4 0 % ) ,30例肺结核患者痰样和 4 0例健康人痰样均无一例阳性。肺癌患者痰样DNA异倍体阳性率高于常规痰细胞学阳性率 8/ 5 0 (16 % ) ,P <0 .0 1;也高于刷检细胞学阳性率 16 / 5 0 (32 % ) ,P >0 .0 5。结论全自动图像细胞仪对肺癌患者痰脱落细胞DNA的定量检测能够反映肺癌患者痰细胞中的恶性变化 ,对于肺癌诊断是一个敏感、特异的方法 。

大肠癌细胞核DNA含量检测的价值

目的 研究大肠癌与细胞核DNA含量的关系。方法 应用图像细胞仪检测 2 1例正常肠黏膜及 32例大肠癌细胞核DNA含量。结果 大肠癌组DI、PI、S %、>5C %及非整倍体检出率均明显高于正常肠黏膜组 ,大肠癌DNA直方图呈Ⅲ、Ⅳ型分布 ,正常肠黏膜呈Ⅰ型分布。结论 细胞核DNA含量与肿瘤分化程度、病灶大小、病灶部位及预后有关 ,与患者年龄、性别无关。

肺癌活检小标本ICM-DNA定量分析在诊断中的应用

目的：为了进一步了解肺癌细胞生物学行为，评价肺小标本ＩＣＭ—ＤＮＡ含量检测对肺癌的诊断价值。方法：选取纤维支气管镜活检肺小标本 ９５例，其中肺癌组 ６４例［包括鳞状上皮细胞癌（简称鳞癌）４５例，腺癌 ９例，小细胞未分化癌１０例］，肺良性病变（炎症）组３１例。将肺小标本石蜡包块以５μｍ连续切片，分别作ＨＥ染色和Ｆｅｕｌｇｅｎ 染色，后者进而用国际标准化 ＣＡＳ－２００型 图像细胞仪（ＩＣＭ）检测 ＤＮＡ含量。分析指标包括 ＤＮＡ质量、ＤＮＡ指数（ＤＩ）、增殖指数（ＰＩ）、Ｓ期百分比、核面积、直方图类型及倍体状况等。结果：肺癌组细胞核ＤＮＡ质量、ＤＩ、ＰＩ、Ｓ％和核面积等指标均明显高于肺炎症组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；肺癌组ＤＮＡ直方图类型主要为Ⅲ型和Ⅵ型（占７９．７％），未见Ⅰ型；而肺炎症组相反，无１例为Ⅲ型和Ⅵ型，多呈Ⅰ型改变（９０．３％），两组之间有显著差异（Ｐ＜０．０１）；两组的细胞核 ＤＮＡ 倍体状况存在极显著差异（Ｐ＜０．０１），肺癌组多为异倍体，异倍体检出率达９６．９％，而肺炎症组均为二倍体。以异倍体为标准，结合Ｓ期百分比，诊断肺癌的敏感性为９６．７％，特异性达１００％。结论：应用ＩＣＭ检测纤维支气管?

DNA定量检测与胃癌预后的关系

目的探讨DNA含量与胃癌预后的关系。方法采用IMS-2000型癌细胞DNA分析系统测定163例胃癌患者的DNA指数、平均CV值、DNA主峰面积、DNA主峰质量(pg)、平均DNA质量(pg)、G0G1期细胞百分率、S期细胞百分率、G2M期细胞百分率以及5倍体超过率等9项指标,并进行Cox比例风险回归分析。结果Cox比例风险回归模型单因素和多因素分析结果显示,这9项指标与生存率之间的差别均无统计学意义(P>0.05)。结论DNA含量与胃癌患者术后生存率无相关性。DNA含量不能作为预测胃癌预后的独立指标。

以天青A染料显示DNA的染色方法

对肿瘤细胞核中的脱氧核糖核酸（DNA）含量进行测定，根据其倍体及细胞周期情况对肿瘤细胞的良恶性，恶性程度以及预后加以判断，称为DNA定量分析，能进行这种测定的主要有流式细胞仪和图像细胞仪两种，图像细胞仪分析由于具有直观，标本适用性广等特点深受广大病理工作者的青睐，DNA图像细胞分析首先必须进行DNA染色，传统的染色方法是Feulgen法，所用染料为碱性品红，我们采用天青A作为染料，替代碱性品红，取得了良好的DNA染色效果。