将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-...将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-NTA琼脂糖亲和层析获得Mce4A重组蛋白;圆二色谱(CD)测定结果表明,Mce4A重组蛋白α螺旋含量为31.1%,β-折叠含量为0%,无规卷曲含量为61.0%,转角含量为7.9%。为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。展开更多
氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)被认为是动脉硬化的关键致病因素。oxLDL的性能与其唯一的组成蛋白——载脂蛋白B-100(apoB-100)的二级结构即构象密切相关。荧光光谱和圆二色(CD)光谱是研究蛋白质构象的...氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)被认为是动脉硬化的关键致病因素。oxLDL的性能与其唯一的组成蛋白——载脂蛋白B-100(apoB-100)的二级结构即构象密切相关。荧光光谱和圆二色(CD)光谱是研究蛋白质构象的有力手段,因此在oxLDL结构的研究中也有广泛的应用。本文综述了近年来荧光光谱和圆二色光谱在LDL氧化研究方面的应用,并对今后的研究方向做了展望。展开更多
本研究以DPPH自由基清除能力为抗氧化活性衡量指标,利用双因素实验设计研究方法,探究了高压脉冲电场(PEF)的电场强度(5、10、15、20 k V/cm)和脉冲频率(1800、2400 Hz)两个因素对抗氧化肽MMCTN的抗氧化活性的影响,并且考察了PEF处理后...本研究以DPPH自由基清除能力为抗氧化活性衡量指标,利用双因素实验设计研究方法,探究了高压脉冲电场(PEF)的电场强度(5、10、15、20 k V/cm)和脉冲频率(1800、2400 Hz)两个因素对抗氧化肽MMCTN的抗氧化活性的影响,并且考察了PEF处理后保留时间(0、2 h)对其抗氧化活性的作用;借助傅立叶红外光谱技术(MIR)、圆二色谱技术(CD)分析了PEF处理对MMCTN的二级结构影响情况。研究发现,当电场强度为10 k V/cm,脉冲频率为2400 Hz,且PEF处理后保留2 h时,MMCTN的DPPH自由基清除能力最高,达到94.14%±0.13%;MIR光谱分析得知高压脉冲电场处理的样品功能团发生了改变;CD色谱分析得知PEF处理后的样品中α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲之间发生了相互的转化。展开更多
氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)被认为是动脉硬化的关键致病因素。文章综合运用紫外吸收光谱、荧光光谱、同步荧光光谱及圆二色(circular dichroism,CD)光谱研究了Cu2+诱导不同时间的LDL体外氧化过程。随着...氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)被认为是动脉硬化的关键致病因素。文章综合运用紫外吸收光谱、荧光光谱、同步荧光光谱及圆二色(circular dichroism,CD)光谱研究了Cu2+诱导不同时间的LDL体外氧化过程。随着氧化时间的增加,生成的丙二醛(malonaldehyde,MDA)的量逐渐增加,其相对应的430nm处的荧光强度也随之加强,氧化过程中生成了新的氧化产物。氧化低密度脂蛋白紫外吸收增强;表征氨基酸残基信息的特征荧光强度和同步荧光强度降低;载脂蛋白B-100(apolipoprotein B-100,apoB-100)α-螺旋含量减少。实验结果表明,LDL氧化过程中Cu2+不仅诱导了氧化产物的生成,而且改变了apoB-100的构象进而导致了生色基团的微环境的变化。展开更多
为了解腰果主要过敏蛋白的分子结构及过敏性特征,通过有机溶剂脱脂、盐析、透析、葡聚糖凝胶Sephadex G-150分离纯化得到腰果主要过敏蛋白,采用紫外分光光度计、BCA定量试剂盒、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质免...为了解腰果主要过敏蛋白的分子结构及过敏性特征,通过有机溶剂脱脂、盐析、透析、葡聚糖凝胶Sephadex G-150分离纯化得到腰果主要过敏蛋白,采用紫外分光光度计、BCA定量试剂盒、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质免疫印迹(Western-Blotting)等手段检测腰果过敏蛋白及评价其免疫原性;应用NCBI数据库与蛋白质谱测序分析获得腰果过敏蛋白氨基酸序列、DNA序列,结合生物信息软件DNAstar与圆二色谱(CD)谱图预测腰果过敏蛋白结构。结果表明:Ana o 2与Ana o 3为腰果主要过敏蛋白,分子量分别为33和17 kD左右,根据圆二色谱检测结果与DNAstar中的Protean程序预测分析可知,Ana o 2中α-螺旋、β-折叠区段和转角区域均存在,是致敏性较强的一种亲水性蛋白,β-转角和无规则卷曲在Ana o 2氨基酸序列中出现率总和为54%,所在区域为优势抗原表位区。Ana o 3仅有少量的β-折叠区段和转角区域,出现率总和为12%,Ana o 3的二级结构主要为α-螺旋结构和无规则卷曲结构,不适宜作为抗原的表位,形成过敏性表位相对较弱。本研究结果为进一步明确天然腰果主要过敏原结构并对探索腰果致敏机理提供参考。展开更多
文摘将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-NTA琼脂糖亲和层析获得Mce4A重组蛋白;圆二色谱(CD)测定结果表明,Mce4A重组蛋白α螺旋含量为31.1%,β-折叠含量为0%,无规卷曲含量为61.0%,转角含量为7.9%。为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。
文摘氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)被认为是动脉硬化的关键致病因素。oxLDL的性能与其唯一的组成蛋白——载脂蛋白B-100(apoB-100)的二级结构即构象密切相关。荧光光谱和圆二色(CD)光谱是研究蛋白质构象的有力手段,因此在oxLDL结构的研究中也有广泛的应用。本文综述了近年来荧光光谱和圆二色光谱在LDL氧化研究方面的应用,并对今后的研究方向做了展望。
文摘本研究以DPPH自由基清除能力为抗氧化活性衡量指标,利用双因素实验设计研究方法,探究了高压脉冲电场(PEF)的电场强度(5、10、15、20 k V/cm)和脉冲频率(1800、2400 Hz)两个因素对抗氧化肽MMCTN的抗氧化活性的影响,并且考察了PEF处理后保留时间(0、2 h)对其抗氧化活性的作用;借助傅立叶红外光谱技术(MIR)、圆二色谱技术(CD)分析了PEF处理对MMCTN的二级结构影响情况。研究发现,当电场强度为10 k V/cm,脉冲频率为2400 Hz,且PEF处理后保留2 h时,MMCTN的DPPH自由基清除能力最高,达到94.14%±0.13%;MIR光谱分析得知高压脉冲电场处理的样品功能团发生了改变;CD色谱分析得知PEF处理后的样品中α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲之间发生了相互的转化。
文摘为了解腰果主要过敏蛋白的分子结构及过敏性特征,通过有机溶剂脱脂、盐析、透析、葡聚糖凝胶Sephadex G-150分离纯化得到腰果主要过敏蛋白,采用紫外分光光度计、BCA定量试剂盒、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质免疫印迹(Western-Blotting)等手段检测腰果过敏蛋白及评价其免疫原性;应用NCBI数据库与蛋白质谱测序分析获得腰果过敏蛋白氨基酸序列、DNA序列,结合生物信息软件DNAstar与圆二色谱(CD)谱图预测腰果过敏蛋白结构。结果表明:Ana o 2与Ana o 3为腰果主要过敏蛋白,分子量分别为33和17 kD左右,根据圆二色谱检测结果与DNAstar中的Protean程序预测分析可知,Ana o 2中α-螺旋、β-折叠区段和转角区域均存在,是致敏性较强的一种亲水性蛋白,β-转角和无规则卷曲在Ana o 2氨基酸序列中出现率总和为54%,所在区域为优势抗原表位区。Ana o 3仅有少量的β-折叠区段和转角区域,出现率总和为12%,Ana o 3的二级结构主要为α-螺旋结构和无规则卷曲结构,不适宜作为抗原的表位,形成过敏性表位相对较弱。本研究结果为进一步明确天然腰果主要过敏原结构并对探索腰果致敏机理提供参考。
