圆弧青霉菌毒素-青霉酸对小鼠肾脏的损伤及机理

采用25日龄健康的昆明种小鼠120只,分为空白对照组和圆弧青霉菌毒素-青霉酸(以下简称青霉酸)低、中、高剂量组进行试验,以探索青霉酸对小鼠肾脏的损伤及损伤机理.结果表明,青霉酸对小鼠肾脏的损伤作用主要是在肾小管上皮细胞;高剂量染毒能使小鼠肾小管上皮细胞空泡变性,细胞核出现固缩、溶解,相同剂量下雄性肾脏的损伤比雌性的严重;脂质过氧化反应是青霉酸引起肾损伤的作用机理,它能使小鼠肾组织中SOD活性降低及MDA含量上升,呈现剂量相关性;青霉酸通过促进Bax和P53基因的表达,抑制Bcl-2的表达,诱导肾小管上皮细胞发生凋亡.

圆弧青霉菌毒素-青霉酸间接竞争ELISA检测方法的建立

对圆弧青霉菌毒素-青霉酸的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测条件进行优化,建立最佳反应条件下的间接竞争酶联免疫吸附试验。以间接非竞争ELISA基本操作步骤为基础,优化ELISA反应过程中的反应条件,最后建立青霉酸的间接竞争ELISA检测法。经在均一性良好酶标板测试,抗体最适工作浓度为1∶4×103,人工抗原的饱和浓度为3.35μg/mL。试验结果显示,37℃包被2 h,用0.2 g/L BSA封闭液封闭1 h可达到良好的封闭效果;底物的最适反应时间为10 min;以板外竞争反应模式为佳。试验初步建立了青霉酸间接竞争酶联免疫吸附法,为将来ELISA试剂盒的研制奠定基础。

圆弧青霉菌毒素——青霉酸ELISA定量检测试剂盒的研制

为了建立用于定量检测饲料与食品中青霉酸的ELISA试剂盒,试验在合成青霉酸人工抗原并免疫小鼠获得特异单克隆抗体的基础上,利用间接竞争ELISA方法对试剂盒各项技术参数进行测定,最终获得特异、快速的检测试剂盒。结果表明:在优化的条件下,该试剂盒对青霉酸标准品的最低检测浓度为1.6μg/mL;线性方程为y=9.54x+5.844 4(R2=0.996 4),线性范围为0.1～25.6μg/mL;回收试验的平均回收率分别为80.5%、83.3%、85.36%,37℃可保存48 h左右,与黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、伏马毒素等的交叉反应率小于0.01%,具有良好的特异性。说明已初步研制出用于检测饲料中青霉酸的ELISA试剂盒。