人睾丸单倍体圆形精子细胞鉴别技术研究进展

圆形精子细胞注射(ROSI)技术是通过显微注射技术将单倍体圆形精子细胞注射入成熟卵母细胞中,使卵母细胞受精进而分裂形成胚胎的技术,是目前部分非梗阻性无精子症患者获得自己遗传学后代的最后希望。圆形精子细胞为单倍体雄性生殖细胞,是精原细胞经过减数分裂后变形成为精子前的最后一个阶段,主要通过睾丸穿刺取精术(TESA)或显微外科睾丸取精术(Micro-TESE)获得。虽然已经有ROSI试管婴儿出生,但总体来说ROSI技术效率(妊娠率、活产率)较低,因此到目前为止国内外还没有广泛推行该技术,其中不能准确鉴别活体单倍体圆形精子细胞是导致ROSI技术效率低下的主要原因之一。该文对目前几种鉴别人睾丸单倍体圆形精子细胞的方法进行综述。

PLCζ对小鼠圆形精子细胞注射后卵母细胞受精及胚胎发育的影响

目的探讨PLCζ作为激活剂的可行性及对ROSI后卵母细胞受精及胚胎发育的影响。方法在体外构建重组质粒pCRII-TOPO-PLCζ,诱导表达后采用质谱鉴定和Western blot检测抗原性。重组PLCζ蛋白作为小鼠ROSI卵母细胞的激活剂,记录受精及胚胎发育情况并统计分析。结果成功构建了重组质粒pCRII-TOPO-PLCζ,体外表达后经质谱鉴定为小鼠PLCζ蛋白,并具有良好的抗原性。重组PLCζ蛋白激活卵母细胞后的受精率、2-4细胞率、8细胞率及成囊率与空白组之间的差异均无显著性(P>0.05)。结论本研究中重组PLCζ蛋白对卵母细胞受精及胚胎发育无显著影响,作为小鼠ROSI后的卵母细胞激活剂的可行性值得商榷。

化学激活在小鼠圆形精子细胞体外受精中的应用

目的:通过对生精细胞体外培养所获圆形精子细胞显微注射(ROSI)后的小鼠卵母细胞进行单一和联合化学激活,寻找小鼠圆形精子细胞体外受精的最佳激活方案。方法:采用不同浓度的乙醇(EH)、离子霉素(Ion)、钙离子载体A23187(CIA)、氯化锶(SrCl2)、6-二甲基苯胺嘌呤(6-DMAP)及放线菌酮(CHX)对ROSI后的卵母细胞进行不同作用时间的激活,并根据不同的激活途径,联合两种最佳激活浓度和时间的激活剂对ROSI后的卵母细胞行联合激活,以受精率、卵裂率和桑囊胚形成率为观察指标,比较单一及联合方案对卵母细胞的激活效果。结果:①单一激活时,各激活剂的最佳方案分别为7%EH作用6 min,5μmol/L CIA作用5 min,5μmol/L Ion作用5 min,2 mmol/L 6-DMAP作用2 h,10 mmol/L SrCl2作用1.5 h,10μg/ml CHX作用1.5 h,其中10 mmol/L SrCl2作用1.5 h桑囊胚率最高,显著优于CHX方案(P<0.05),但与其它各组无显著性差异;②EH+6-DMAP组桑囊胚率(29.63%)显著高于其它联合激活组以及除SrCl2以外所有单一激活方案(P<0.05),且正常受精率、卵裂率及桑囊胚率均高于SrCl2组,但无显著性差异。结论:单一激活方案中10 mmol/L SrCl2作用1.5 h,联合方案中7%EH作用6 min+2 mmol/L 6-DMAP作用2 h对体外培养所获圆形精子细胞ROSI后的卵母细胞激活效果最佳。EH+6-DMAP的联合激活方案优于单一激活。

圆形精子注射技术应用研究进展

圆形精子是成熟精子的前体细胞,具有单倍体的遗传特性,通过卵胞质内圆形精子注射(round spermatid injection,ROSI)技术可以使卵母细胞受精并发育成胎儿。1996年,第一例通过ROSI技术出生的婴儿诞生,但临床应用一直在成功与失败中反复交替。至今,ROSI技术尚未广泛应用于临床,主要原因在于ROSI技术出生效率低,且出生婴儿的安全性未得到充分验证。ROSI技术在解决部分非梗阻性无精子症患者生育生物学后代的问题上展现出广阔的应用前景。本文对ROSI技术的应用研究进展进行综述,以期更全面系统地认识ROSI技术,推动其在临床更高效、更安全地应用。

诊治男性不育症的几种新法

一种治疗男性不育症的方法叫做胞浆精子注射法(ICSI),即将单个精子直接注入一个卵细胞的胞浆内。ICSI可以使用过去认为不适于授精的精子,包括不能移动的、未成熟的或畸形精子,只要它们是活的并且有完整的遗传成分。试验结果表明:使用新技术,胎儿异常率和普通人群没有差异。目前,这一技术只有包括多伦多优育中心在内的少数几个研究中心能够进行。多伦多优育中心的胞浆精子注射法成功率为25％,女方如为38岁以下的妇女,成功率可达30％。