HPLC法同时测定不同产地香附药材中香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮

目的建立HPLC法同时定量测定香附中3种特征性成分香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮,并对不同产地香附样品进行测定。方法香附甲醇提取液的分析采用Phenomenex C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-水（68∶32）,检测波长为242nm,体积流量为1.0mL/min,柱温为30℃。结果香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮进样量分别在0.260-0.912μg、0.028-0.098μg、0.082-0.286μg内呈现良好的线性关系,平均回收率分别为98.3%（RSD为1.5%）、97.9%（RSD为2.0%）、99.1%（RSD为1.4%）。海南、广东、广西、四川省的11批香附中香附烯酮为1.52-4.80mg/g、圆柚酮为0.04-0.20 mg/g、α-香附酮为0.70-1.99 mg/g。结论同一产地香附中3种成分含有量均呈现香附烯酮〉α-香附酮〉圆柚酮的规律。

益智药材中圆柚酮含量的高效液相色谱法测定

目的建立益智药材中圆柚酮的含量测定方法，并对不同产地药材进行含量测定。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil—C18（5μm，250mm×4．6mm），流动相为乙腈-水（65：35），检测波长为235nm，流速为1．00ml·min^-1，柱温为40℃。结果圆柚酮在0．1152～0．2688μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0．9999；平均回收率为97．34％，RSD=1．48％（n=6）。不同产地益智药材中圆柚酮的含量在1．50～2．10mg·g^-1之间。结论该法可靠、准确、简便，可作为益智药材的质量控制方法。

同时蒸馏萃取制备富含圆柚酮的柚皮油研究

采用同时蒸馏萃取,通过连续蒸馏和不同时段蒸馏提取沙田柚柚皮精油,连续蒸馏10h精油提取率(1.27%)低于4个时段精油提取率的和(2.05%)。用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析,鉴定出主要成分为圆柚酮、D-柠檬烯、王草素、顺式-芳樟醇氧化物、糠醛、反式-芳樟醇氧化物。采用面积归一化方法计算其质量分数,结果表明,在不同蒸馏时段提取,第四时段所得柚皮油圆柚酮的质量分数高达49.90%,连续蒸馏10h时所得柚皮油圆柚酮的质量分数达到30.76%。采用同时蒸馏萃取方法,较长的蒸馏时间有利于柚皮油中圆柚酮含量的提高。

圆柚酮的合成

综述了烟草重要致香物圆柚酮的合成研究现状 ,主要讨论了圆柚酮合成的反应原理及一般合成方法。参考文献

圆柚酮的晶体结构及在烟用香精香料中的应用

以巴伦亚烯为原料合成了圆柚酮，并对其晶体结构进行了分析鉴定。该化合物属于单斜晶系，空间群为P2，，晶胞参数a=0．5903（2）nm，b=0．9495（4）nm，c=1．1630（6）nm，β=96．09（2）°，V=0．6482（5）nm^3，晶体计算密度，Dx=1．119mg·m^-3，Z=2，μ=0．07mm。将圆柚酮用作烟用香料的使用结果表明：在温度为20℃时，该化合物的香气阈值为0．001mg·L^-1；在卷炯中使用具有增加卷烟香气，丰满卷烟香味和降低刺激的作用；作为烟用香料使用，圆柚酮在烟丝中的最适宜添加量为Ⅲ（圆柚酮）=（1～10）×10^-6。

生物酶法催化瓦伦西亚烯生成圆柚酮

在体外,利用野生型CYP450BM-3对瓦伦西亚烯进行催化,酶-底物复合物催化NADPH氧化的速率为31±1.0 nmol(nmol P450)-1min-1,但催化产物中没有检测到圆柚酮的生成。突变体R47L/Y51F/F87A与底物复合物催化NADPH氧化的速率高于野生型,为79±6.5 nmol(nmol P450)-1min-1,并在催化产物中检测到圆柚酮的生成,但其产物选择性较差,圆柚酮的含量仅占总产物的6.8%。与此同时,检测了另一个突变体A74G/F87V/L188Q对瓦伦西亚烯的催化效果,发现其与底物复合物对NADPH的氧化速率与突变体R47L/Y51F/F87A相当,但产物中圆柚酮的比率更高,达8.0%。

益智仁挥发油中圆柚酮的测定及抗氧化活性的研究

目的定量分析益智仁挥发油中圆柚酮的含量，探讨益智仁挥发油中圆柚酮与其抗氧化活性之间的量效关系。方法采用水蒸气蒸馏法提取益智仁挥发油，气相色谱对其中圆柚酮进行定量分析，DPPH法测定其抗氧化活性。结果圆柚酮在0．7424-5．1968mg／ml呈良好的线性关系，平均回收率为100．47％，RSD为2．24％，益智仁挥发油中圆柚酮的含量为0．4423-1．5149mg／g。结论不同产地之间的益智仁挥发油中圆柚酮的含量具有很大的差异，海南产地的益智仁中圆柚酮的含量普遍较高，广西产地的次之，广东的最差；圆柚酮具有抗氧化能力，且挥发油抗氧化作用与挥发油中圆柚酮的含量具有一定的关系。

HPLC测定益智仁以及其盐灸炮制品中白杨素和圆柚酮含量

目的建立益智仁中白杨素和圆柚酮的高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法,并比较益智仁以及其盐灸炮制品中白杨素和圆柚酮含量的变化。方法采用HPLC,色谱柱为YMC-Pack C18(250×4.6 mm,5μm),以0.3%磷酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长为250 nm,柱温30℃,流速0.6 mL·min^-1,进样量15μL。结果白杨素在0.518-10.36 mg·mL^-1范围内呈良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为101.45%;圆柚酮在20.26-405.10 mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为104.14%。结论建立的HPLC含量测定方法快速、准确,重复性好,可用于益智仁中化学成分的定量分析。益智仁与其炮制品盐益智仁在白杨素含量上具有显著差异(P<0.05),但圆柚酮含量上并无显著差异。

益智中圆柚酮对慢性肾损伤的保护作用

目的:评价益智中圆柚酮对慢性肾损伤的保护作用,阐述益智补肾缩尿的物质基础。方法:采用腺嘌呤诱导的CKD大鼠模型,对益智中圆柚酮的肾损伤保护作用进行研究,分别测定24 h尿量、尿蛋白(UP24h)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、硫酸吲哚醇(IS)的含量以及对肾脏病理切片进行观察,以确定圆柚酮对CKD的保护作用。结果:与模型组比较,圆柚酮各剂量组大鼠肾组织病理切片形态均有不同程度的改善,其中圆柚酮高剂量组>圆柚酮中剂量组>黄葵胶囊组>圆柚酮低剂量组,且高剂量组大鼠血清中BUN和IS及尿蛋白含量中低剂量组降低更明显;与高剂量组相比,中剂量组血清中Scr降低较明显。结论:圆柚酮对CKD呈现明显的量效关系,高剂量组对慢性肾损伤的保护作用强于低剂量组。

瓦伦西亚橘烯生物转化生成圆柚酮

利用固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术分析检测黑曲霉(Aspergillus niger)、毛霉(Mucor sp.)和解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)转化瓦伦西亚橘烯的产物,并比较3株菌株转化瓦伦西亚橘烯生成圆柚酮的效果。结果表明,3株菌种黑曲霉(A. niger)、毛霉(Mucor sp.)、解脂耶氏酵母(Y. lipolytica)均能对瓦伦西亚橘烯进行转化并生成圆柚酮,同时生成α-松油醇、香芹酮等物质。其中,解脂耶氏酵母转化瓦伦西亚橘烯生成圆柚酮转化量最高,达(252.52±15.79)mg/L,转化率也最高,达(27.45±1.72)%。其次为黑曲霉和毛霉,转化量分别为(140.94±30.26)mg/L和(137.67±14.02)mg/L,转化率分别为(15.32±3.29)%和(15.45±3.36)%。此外,通过正交试验对解脂耶氏酵母的发酵培养基进行条件优化,得到培养基最佳优化组合为α-乳糖40 g/L、蛋白胨15 g/L、FeSO4·7H2O 0.6 g/L。解脂耶氏酵母具有较好的生物转化瓦伦西亚橘烯生成圆柚酮的效果,优化后的该菌培养基转化生成圆柚酮质量浓度可达(457.32±76.11)mg/L,转化率为49%,较未优化的培养基相比,转化率提高21.55%。

高效液相梯度洗脱法同时测定复方救必应胶囊中紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和α-香附酮含量

目的：建立同时测定复方救必应胶囊中紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和α-香附酮含量的高效液相色谱法。方法：采用Phenomenex C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱;柱温为35℃;流速为0.9 m L/min;进样量为20μL;紫丁香苷和长梗冬青苷检测波长为210nm,圆柚酮和α-香附酮检测波长为242 nm。结果：紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和α-香附酮在给定浓度范围内线性范围分别为21.16-423.20 mg/L（r=0.9997）、33.31-666.20 mg/L（r=0.9992）、5.25-105.00 mg/L（r=0.9999）、3.39-67.80 mg/L（r=0.9995）,线性关系良好;平均加样回收率（n=6）和RSD值分别为96.92%（0.94%）、98.55%（0.85%）、98.68%（1.51%）、99.13%（1.24%）。结论：本文建立的HPLC梯度洗脱法同时测定复方救必应胶囊中紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和α-香附酮含量,方法准确、重现性好、灵敏度高,为评价复方救必应胶囊质量控制提供可靠方法。

圆柚酮生物转化菌种筛选及培养基组分优化

为筛选具有特定生物转化功能的菌株,从柑橘果园取得土样,以生长曲线及转化瓦伦西亚橘烯生成圆柚酮的产量为指标,进行菌株的初筛和复筛。利用SPME-GC-MS技术,对菌株转化瓦伦西亚橘烯生成的产物种类及含量进行测定与分析;通过生理生化实验以及16S rDNA测序对所筛菌株进行菌种鉴定,结果表明所筛菌株为伯克霍尔德菌属,将其命名为Burkholderia sp.PZQ14。在LB培养基的基础上,以圆柚酮转化量为指标,进行培养基成分单因素试验,再通过响应面优化试验,探讨培养基成分不同质量浓度组合对圆柚酮转化量的影响。结果表明,最优培养基组分为:葡萄糖38 g/L,蛋白胨25 g/L,FeSO_(4)0.60 g/L。在此条件下进行验证试验,圆柚酮转化量为328.69±17.88 mg/L,转化率为35.73%±1.24%,相比LB培养基,圆柚酮转化量提高了251 mg/L。

不同产地益智中圆柚酮的含量研究

调查研究收集广东省阳江市大八镇、广东省茂名市、广西、海南、安徽五个地区益智药材中圆柚酮的含量差异。方法:采用高效液相色谱法测定阳江、茂名、广西、海南、安徽五个地区益智中的圆柚酮的含量差异,用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以水-乙腈 (44:56)为流动相,检测波长235nm。结果:本次采集广东省阳江市大八镇、广东省茂名市、广西、海南省、安徽省五个地区的益智中的圆柚酮成分的含量在0.02mg/ml~0.38mg/ml之间呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为100.04%,最终以广东省阳江市大八镇的平均圆柚酮含量2.23mg/g最高。结论:圆柚酮的含量测定方法稳定,结果可靠,从结果上看阳江、广西、安徽、茂名、海南这五个地区益智中圆柚酮含量的依次降低。

香附醋制前后香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的含量比较

目的：研究醋制对香附中3种特征性成分香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮含量的影响.方法：采用HPLC测定醋制前后不同产地香附中3种成分的含量,Phenomenex C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相甲醇-水（68∶ 32）,检测波长242 nm,流速1.0 mL· min^-1,柱温30℃.结果：建立的含量测定方法稳定可靠,香附烯酮、圆柚酮及α-香附酮线性范围依次为0.260 ～0.912,0.028 ～0.098,0.082～ 0.286 μg;平均回收率分别为98.34％,97.87％,99.12％,RSD依次为1.48％,2.03％,1.37％.11个产地香附生品中香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的质量分数分别为1.52 ～4.80,0.04 ～0.20,0.70 ～ 1.99 mg·g^-1;醋制后3种成分质量分数依次为1.55 ～4.96,0.04～ 0.19,0.61 ～1.97 mg·g^-1.结论：不同产地香附中3种成分含量差异较大,醋制后香附烯酮含量升高,圆柚酮和α-香附酮含量降低,为香附的醋制机制研究提供参考.

益智不同部位中圆柚酮含量的比较

目的比较益智、益智壳、益智仁中圆柚酮的含量。方法采用HPLC法测定益智、益智壳、益智仁中圆柚酮的含量,用Agilent C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(56:44),流速1mL·mL^-1,柱温40℃,检测波长238nm。结果2.86~148.72μg·mL^-1圆柚酮与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为101.27%,RSD=2.94%。益智、益智壳、益智仁均含有圆柚酮,其含量的顺序为益智仁>益智>益智壳。结论益智仁中圆柚酮的含量明显高于益智和益智壳,建议不宜将益智作为益智仁使用。

UPLC法测定益智中的白杨素和圆柚酮

目的采用超高效液相色谱法（UPLC）同时测定益智药材中的白杨素和圆柚酮。方法色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,流动相为乙腈-水溶液,流速0.2 m L·min^-1,采用梯度洗脱,检测波长251 nm。结果白杨素0.139~347.5μg·m L^-1、圆柚酮0.197~492.5μg·m L^-1与峰面积呈良好的线性关系（r2分别为0.9995、0.9994）。平均加样回收率分别为98.97%（RSD=1.94%,n=9）、98.90%（RSD=1.45%,n=9）。不同地区的益智和益智的不同部位中两种成分的含量均有明显差异。结论所用方法准确、简单、重复性好,适用于益智中白杨素和圆柚酮的含量测定。

RP-HPLC法测定不同生长期益智药材中圆柚酮和益智酮甲的含量

目的:采用RP-HPLC法测定5～65 d益智果实中圆柚酮和益智酮甲的含量。方法:采用Phenomenex Gemini C6-phen-yl色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱[0～15 min,A-B(30∶70);16～50 min,A-B(30∶70)→A-B(44∶56);51～60 min,A-B(44∶56);61～65 min,A-B(44∶56)→A-B(70∶30)],流速1.0 mL.min-1,检测波长为240 nm。结果:圆柚酮和益智酮甲的线性范围分别为0.06～2.03μg(r=0.9999)和0.004～1.14μg(r=0.9995),加样回收率(n=6)分别为97.53%%和98.31%。益智中的成分在55 d后,含量趋于稳定。结论:本文方法可以为益智的采收时间提供科学参考。

一步法合成(±)-圆柚酮的简便方法

以巴伦西亚烯 1为原料 ,采用 H2 O2 /(H3 C) 3 COH/Na Cl O氧化体系来制备圆柚酮 2。得到的粗产品经进一步分离提纯后得高纯度的圆柚酮产品 2。其结构经 IR、MS、1H NMR和 13 C NMR证实。该合成路线简单 ,后处理方便 ,环境污染小 ,总收率为 70 .6 % 。

HPLC法测定调中四消丸中咖啡酸、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、圆柚酮和α-香附酮

目的建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定调中四消丸中咖啡酸、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、圆柚酮、α-香附酮。方法采用Agilent TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;0~21 min在325 nm波长下检测咖啡酸;21~37 min在254 nm波长下检测芦荟大黄素、大黄酸和大黄素甲醚,37~55 min在242nm波长下检测圆柚酮和α-香附酮;体积流量:0.9 mL/min;柱温:30℃;进样量为10μL。结果咖啡酸、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、圆柚酮、α-香附酮分别在2.48~49.60、17.56~351.20、4.59~91.80、6.76~135.20、1.92~38.40、4.26~85.20μg/mL与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为98.01%、99.27%、97.61%、99.41%、96.90%、98.58%,RSD值分别为0.77%、1.18%、0.96%、1.25%、1.48%、1.17%(n=6)。结论本方法简单快速,可作为调中四消丸的质量控制方法。

香料解析(三):圆柚酮

圆柚酮，又称为诺卡酮，是一种带有极为浓重圆柚香气和木香顶香的结晶体。它存在于柑桔类油品中（如圆柚），可以在柑桔类冷榨油或精油中提纯得到。纯的圆柚酮是白色至微黄色的晶体，而普通圆柚酮产品一般纯度稍低，外观呈透明淡黄色到黄色的液体。