CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型肝小叶内卵圆细胞总体积与轮廓数密度变化的体视学分析

目的 定量研究CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝小叶内卵圆细胞(HOC)总体积和轮廓数密度的变化。方法 将11只雄性健康SD大鼠随机分为对照组(n=5)、肝纤维化组(n=6),每周2次皮下注射CCl4与橄榄油混悬液,每次3 mL/kg。在肝纤维化造模5周后取材,从每只大鼠肝脏随机抽选5个大小约1 mm3的肝组织块分别制作1张Epon812环氧树脂包埋超薄切片,运用体视学方法结合透射电子显微镜技术,对大鼠肝小叶内的HOC总体积和轮廓数密度进行定量研究,另从每只大鼠剩余肝脏等距随机抽选4个2 mm厚的肝组织块并分别制作2张石蜡包埋的Masson染色切片,按照肝纤维化Metavir分期标准定性评估每只大鼠的肝纤维化程度。计量资料两组间比较采用成组t检验。结果 体视学定量研究显示,对照组肝小叶内HOC总体积为(15.40±7.63) mm3,肝纤维化组肝小叶内HOC总体积为(146.80±114.00) mm3,与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝小叶内HOC总体积显著增加了8.53倍(t=-2.551,P=0.031);对照组肝小叶内HOC轮廓数密度为(56.20±40.40),肝纤维化组肝小叶内HOC轮廓数密度为(566.50±317.00),与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝小叶内轮廓数密度显著增加了9.08倍(t=-3.539,P=0.006);定性观察研究结果显示,肝纤维化大鼠肝纤维化分期按照Metavir评分标准达到Ⅱ~Ⅲ期,大鼠窦周隙内肝星状细胞增生部位周围伴随着HOC的大量增生。结论 CCl4诱导肝纤维化大鼠肝小叶内HOC显著增生。

腹腔促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤1例

1病例简介患者,男,23岁,“发现腹部包块1+个月”入院。入院前近1个月体重下降约5 kg,偶有便秘。查体:患者腹部膨隆,中下腹触及大小约30㎝×20㎝质硬包块。影像学:胸腹部CT示腹盆腔巨大肿块(图1A),大小32.0㎝×26.4㎝×15.3㎝,边界不清,密度不均,增强扫描示肿块不均匀中度强化,多发无强化坏死区。肠系膜及腹膜多发结节。左侧输尿管盆段受压,左肾积水(图1B)。

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤18F-FDG PET/CT显像1例

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤(DSRCT)是一种较罕见的侵袭性软组织恶性肿瘤,临床诊断较为困难,需要影像、病理及临床三者综合分析。国内外文献报道多为个案分析,本文报道2023年7月5日宁波大学附属第一医院收治的1例盆腔DSRCT患者,从18氟-氟代脱氧葡萄糖正电子发射体层成像/CT显像角度入手,分析其特征并复习相关文献以提高对该病的认识。

裂果薯总皂苷对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344上皮间质转化的影响

目的:探讨裂果薯总皂苷(SSPHs)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝卵圆细胞系WB-F344上皮间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法:将WB-F344细胞分为对照组、模型组,SSPHs低、中、高剂量组和PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002组。除对照组外,其余各组均以10μg/L TGF-β1诱导WB-F344构建EMT模型。采用MTT法、细胞划痕实验分别检测细胞增殖、迁移能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、western blotting法分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(Vimentin)的m RNA和蛋白表达,western blotting法检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白表达。结果:SSPHs可抑制TGF-β1诱导的WB-F344细胞的增殖,24 h的细胞半数抑制浓度(IC50)为3.02μg/mL。与对照组比较,模型组N-cadherin、Vimentin的mRNA及蛋白表达水平显著升高,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平显著降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,SSPHs中、高剂量组N-cadherin和Vimentin mRNA及蛋白表达下调,E-cadherin mRNA及蛋白表达上调,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值降低(均P<0.05),结果与LY294002组相似。结论:SSPHs可抑制TGF-β1诱导的WB-F344细胞EMT进程,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

单细胞测序分析小鼠肝卵圆细胞的分化

目的:探讨肝卵圆细胞HOCs分化为胆管上皮细胞的分化过程和分子机制,肝卵圆细胞(Hepatic oval cells, HOCs)是肝脏中具有双向分化潜能的干细胞样细胞,能够在肝脏严重损伤时分化为肝细胞和胆管上皮细胞以恢复肝脏。为系统性地明确HOCs在肝脏再生中的分化作用机制,本研究由小鼠肝卵圆细胞培养诱导分化为胆管上皮细胞的高通量单细胞转录组测序揭示HOCs分化为胆管上皮细胞中特定状态的细胞亚群和调控分化的关键作用机制。方法:HOCs在体外条件下联合表皮生长因子、干细胞生长因子、白血病抑制因子的诱导方案培养细胞,定向诱导分化为胆管上皮细胞。进行单细胞测序检测,整合测序数据进行质量控制、PCA降维分析、细胞聚类分群和t-SNE。结果:呈卵圆形、折光性强的HOCs诱导分化后细胞形态变为长梭形、铺路石样生长。单细胞测序数据的PCA降维分析将HOCs分化的细胞分为17个cluster,由HOCs的特异性marker基因Twf1和胆管细胞特异性标记物Krt19在各个亚群中的表达量异同和细胞分化的clustertree重新将HOCs分为6个细胞亚群。结论:由HOCs分化为胆管上皮细胞的单细胞测序数据鉴定出5种具有异质性的细胞类型,分别为肝卵圆细胞1 (Hepatic Oval Cell 1)、前胆管细胞1 (Pre-Cholangiocytes 1)、前胆管细胞2 (Pre-Cholangiocytes 2)、前胆管细胞3 (Pre-Cholangiocytes 3)、肝卵圆细胞2 (Hepatic Oval Cell 2),还有一群未能鉴定明确的细胞类型未知细胞(Unknown)。

原发性胸椎管内促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤1例

患者,男,28岁,入院前1个月无明显诱因下自觉背部不适,后逐渐出现双下肢无力,以右下肢为重且伴有明显麻木感,小便不畅,于2020年11月至我院就诊。患者主诉既往体健,无家族性遗传病史。查体:双下肢肌张力、肌力正常,痛觉和温度觉减退,右侧明显,双侧病理征阴性。

误诊为腹股沟斜疝的精索促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤1例

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤(desmoplastic small round cell tumor,DSRCT)是罕见的软组织来源的恶性肿瘤,1991年被正式命名,发病率低,目前尚无标准治疗方案,总体预后较差。DSRCT缺乏特异性临床表现,故确诊困难,大多数患者确诊时已发生转移。DSRCT主要好发于青年男性,常累及腹腔和盆腔。精索区DSRCT极为罕见,现报道1例误诊为腹股沟斜疝的精索DSRCT患者的临床病理资料,以期为临床诊治提供参考。

SOX9在小鼠肝卵圆细胞定向分化为胆管上皮细胞过程中的表达

目的:研究转录因子SOX9在小鼠肝卵圆细胞(HOC)定向分化为胆管上皮细胞(BEC)过程中的表达变化。方法:通过2-乙酰氨基芴灌胃联合2/3肝切除术构建小鼠HOC活化模型,利用二步酶消化法及Percoll密度梯度离心法提取HOC后于体外条件下联合利用表皮生长因子(EGF)、干细胞生长因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)诱导HOC定向分化为BEC。于倒置显微镜下观察分化前后细胞形态变化,利用流式细胞术对BEC进行鉴定,免疫荧光法检测分化前后SOX9的表达。结果:小鼠原代HOC在EGF、SCF以及LIF联合作用下分化至第8代可获得较为纯化的BEC。在原代HOC中SOX9主要表达于胞质,随着分化的进展逐渐表达于胞核,同时平均光密度值在分化过程中显著上调。结论:SOX9在小鼠HOC定向分化为BEC过程中由胞质进入胞核并且表达量显著升高,SOX9可能参与调控小鼠HOC向BEC的分化过程。

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤影像病理对照研究

目的探讨促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤影像学特征,并与病理学进行对照研究,以期提高影像学术前诊断准确性。方法回顾性分析经病理证实的9例促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤影像学资料,9例患者术前进行了CT平扫及动态增强检查,其中1例患者在CT平扫及动态增强检查后又进行了MRI平扫及动态增强检查,9例患者影像学检查前均未进行相关治疗,最终9位患者通过手术病理证实。结果9例均为男性患者,平均年龄为21.3岁,均表现为腹、盆腔内软组织肿块影,4例肿块位于盆腔,另外5例位于腹腔内,与腹膜关系密切,其中7例肿瘤内部可见钙化,2例患者出现腹腔积液,9例肿瘤内均含有不同程度坏死,9例肿瘤动态增强呈现渐进性强化,1例MRI动态增强可见肿瘤内部不均匀强化,周边呈环状强化。结论促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤常见于青少年男性,与腹膜、网膜及肠系膜关系密切,与周围实质脏器无明显起源关系,常规影像学术前可以提示诊断,从而更好地指导临床治疗。

对未分化小圆细胞肉瘤分子分型的认识

近年来软组织肿瘤的分子遗传学研究发展迅速,不仅在临床病理诊断中起着非常重要的作用,而且在临床治疗策略制定和生物学行为预测等方面也具有重要意义。未分化小圆细胞肉瘤(undifferentiated small round cell sarcoma,USRCS)的诊断是软组织肿瘤病理诊断中的难点。依据传统病理学难以将USRCS进一步分型。随着以二代测序(next generation sequencing)为代表的高通量分子检测手段的开展和应用,基于分子异常的USRCS新类型不断涌现,对以往一些分化不明的USRCS经过分子检测也得到了重新认识。USRCS的分型正在从形态学分型转向分子分型,这有助于实现疾病的精准诊治。在此对USRCS的临床病理学及分子检测研究的新进展进行概述。

大鼠肝卵圆细胞的生物学特征

目的:观察大鼠肝卵圆细胞的形态学参数、细胞表型及分化演变等生物学特征。方法:建立大鼠肝卵圆细胞增生模型,在肝组织切片上对大鼠肝卵圆细胞进行细胞图像分析及免疫组化染色。结果:肝卵圆细胞体积小、外形及胞核为椭圆形;胞质对细胞角蛋白(CK)19,OV6,甲胎蛋白(AFP)及波形蛋白染色呈阳性,对白细胞共同抗原(LCA)染色呈阴性,胞核对增生细胞核抗原(PCNA)染色呈阳性;在汇管区外周部位可见肝细胞样细胞,CK19及OV6染色呈阳性。结论:肝卵圆细胞在形态学上明显不同于肝细胞,同时具有胆管细胞及肝细胞的表型;肝细胞样细胞为肝卵圆细胞向肝细胞演变的中间过渡细胞。

筛选鉴定Thy-1标记阳性肝癌细胞系中的卵圆细胞样干细胞:可能是肝肿瘤干细胞吗?

背景:肝癌的转移复发被认为可能存在有肿瘤干细胞,后者在肿瘤细胞中数目极少,使得临床鉴别存在一定困难。Thy-1是卵圆细胞的表面标记蛋白,通过特异性标记物间接证明肿瘤中存在肿瘤干细胞是目前研究的重点。目的:探讨肝癌细胞中是否存在Thy-1标记阳性的卵圆细胞,并进行筛选鉴定。方法:流式细胞仪检测卵圆细胞标记蛋白Thy-1在肝癌细胞HepG2,BEL7402及正常肝细胞QSG7701的阳性表达情况,免疫磁珠分选Thy-1标记阳性的肝癌细胞,免疫荧光鉴定分选效率。裸鼠皮下接种实验设立3组,Thy-1+细胞组裸鼠于背部皮下接种分选的Thy-1+细胞5×105/只,HepG2细胞阳性对照组同法接种HepG2细胞0.5×107/只,Thy-1-细胞阴性对照组同法接种分选的Thy-1-细胞0.5×107/只,1个月后观察各组成瘤性。结果与结论:卵圆细胞表面标记蛋白Thy-1在肝癌细胞HepG2,BEL7402中的表达明显高于正常肝细胞QSG7701(P<0.05)。Thy-1+细胞组免疫荧光染色阳性率为85%,HepG2细胞阳性对照组为1%,Thy-1-细胞阴性对照组几乎无免疫荧光表达。HepG2细胞阳性对照组、Thy-1+细胞组5只裸鼠全部成瘤,且瘤体体积相对较大;而Thy-1-细胞阴性对照组仅有1只裸鼠成瘤,瘤体体积明显小于前2组(F=144.568,P<0.05),提示肝癌细胞中存在Thy-1标记阳性的卵圆细胞样干细胞,其可能是肝癌细胞中的肿瘤干细胞。

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤临床特点分析

促结缔组织增生性小圆细胞瘤（desmoplastic small round cell tumor，DSRCT）是一种罕见的高度恶性小细胞肿瘤。该肿瘤的临床表现、病理形态和免疫组化标记均有一定特殊性，充分认识和掌握DSRCT的特点，对于其病理诊断、鉴别诊断和临床治疗具有重要意义。现报道我科收治的1例DSRCT，结合文献复习探讨该肿瘤的临床特点。

横结肠促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤1例

促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤（ Desmoplastic small round cell tumor，DSRCT）是一种近年来鲜有报道的极少见的高度恶性肿瘤。自1991年由Gerald报道第1例以来迄今为止全球报道仅数百例[1]，国内也仅见个例报道。本文将报道我院首例DSRCT，以期与临床医师分享对此病的认识。

肝脏促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤(1例报告并复习文献)

目的 探讨促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤 (DSRCT)的临床特点、诊断及治疗。方法 回顾分析 1例原发于肝脏的促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的诊治经过及近期随访 ,并结合复习文献。结果 本例病理获正确诊断 ,肿瘤原发部位及所浸润器官联合切除并辅以化疗 ,随访 12个月效果良好。结论 充分认识和掌握 DSRCT的特点是临床诊断的关键 ;彻底切除肿瘤并辅以化疗可获良好效果。

华支睾吸虫溶血磷脂酶对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞的作用

目的:观察华支睾吸虫溶血磷脂酶(CslysoPLA)重组蛋白体外对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞的作用。方法:应用免疫荧光方法,观察CslysoPLA重组蛋白是否可与大鼠肝星状细胞和卵圆细胞膜结合;应用MTT方法,测定CslysoPLA重组蛋白对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞的促增殖作用;应用流式细胞术(FCM)检测CslysoPLA重组蛋白对大鼠卵圆细胞细胞周期的影响。结果:CslysoPLA重组蛋白可与大鼠肝星状细胞和卵圆细胞膜结合,MTT方法测定结果表明低浓度重组蛋白对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞有一定促增殖作用(P<0.05),20mg/L重组蛋白可促进大鼠卵圆细胞进入G2期,但高浓度重组蛋白可导致大鼠肝星状细胞和卵圆细胞死亡。结论:低浓度的CslysoPLA重组蛋白在体外可刺激大鼠肝星状细胞和卵圆细胞增殖,表明CslysoPLA可能是华支睾吸虫导致胆管上皮增生、腺瘤样病变和肝纤维化的效应分子之一。而高浓度的CslysoPLA重组蛋白可引起肝星状细胞和卵圆细胞死亡,表明CslysoPLA亦可能是华支睾吸虫引起的化学损伤的毒力因子之一。

肝细胞肝癌中卵圆细胞的组织学与超微结构研究

目的 :探讨人肝癌肝组织存在卵圆细胞的可能性。方法 :对 2 0例人肝细胞肝癌的手术标本行常规组织学和超微结构观察 ,并用胆管上皮分化标记CK7和肝细胞分化标记白蛋白对以上组织作免疫组化染色 ,同时对其中 5例作免疫电镜标记。结果 :光镜下 ,14/ 2 0例癌肿边缘常可见到增生的小胆管样结构。电镜下 ,14/ 2 0例可找到三型卵圆细胞。其中Ⅰ型细胞体积较小、核大、胞质少 ,此为较为原始的卵圆细胞。Ⅱ型细胞体积稍大 ,胞质稍多 ,此为向胆管上皮分化的小上皮细胞。Ⅲ型细胞体积稍大 ,内含稍多粗面内质网 ,此为向肝细胞分化的卵圆细胞。此三型卵圆细胞均有细胞内张力微丝和细胞间连接结构。免疫电镜显示 ,三型卵圆细胞均表达CK7和白蛋白 ,但Ⅰ型和Ⅱ型表达CK7多些 ,Ⅲ型表达白蛋白多些。结论 :与动物致癌模型肝中存在卵圆细胞一样 ,人肝细胞肝癌肝中也存在同样形态和免疫表型特点的卵圆细胞。结果支持卵圆细胞可能为肝前体细胞的假设。

卵圆细胞在实验性肝癌发生过程中的演变特征

背景与目的:卵圆细胞在肝癌发生过程中的作用至今还不十分明了。本研究拟通过动态的方法观察卵圆细胞在肝癌发生过程中的演变规律,揭示卵圆细胞与肝癌发生之间的关系。方法:构建实验性肝癌的大鼠诱癌模型,运用常规HE染色、免疫组织化学和爱新蓝特殊染色等方法,动态观察卵圆细胞在肝癌发生过程中的演变规律。结果:HE和免疫组化结果显示,在诱癌的第4周即可见散在的卵圆细胞在门管区附近出现,卵圆细胞OV-6免疫染色呈阳性。在诱癌的第8周和第14周,OV-6阳性细胞逐渐增多,并向肝小叶实质内深入,将肝组织分割成假小叶状。到诱癌的第17周和第24周,多个癌灶出现,同时OV-6阳性细胞的总体数量下降,癌灶内可观察到OV-6阳性细胞。爱新蓝特殊染色显示,诱发的肿瘤属混合性肝癌,其中胆管上皮细胞癌爱新蓝染色呈阳性,肝细胞癌染色呈阴性。结论:卵圆细胞在肝癌的发生过程中可能扮演重要的角色。

促纤维化小圆细胞肿瘤5例临床病理、免疫组化及电镜观察

目的 :观察 5例促纤维化小圆细胞肿瘤的临床病理特点 ,提高对此类肿瘤的认识。方法 :常规组织学 (HE)、免疫组化(ABC法 )和电镜技术检测结合临床资料综合分析。结果 :5例中 2例多次局部复发 ,2例在随访中 ,1例确诊后 4个月死亡。该肿瘤组织学特点为肿瘤组织呈单结节或多结节状浸润生长 ,伴有明显致密的成熟纤维性间质增生 ,肿瘤细胞主要为大小比较一致的小圆形细胞 ,呈团状或巢状埋于增生纤维间质中 ,少数病例部分区域肿瘤细胞显示有不同分化特点。免疫组化 :5例均有上皮表达 (AE1/AE3或EMA) ,3例表达NSE ,1例间质表达desmin ,1例间质表达vimentin。其中 1例做了电镜检查 ,细胞内可见张力原纤维和桥粒。结论 :(1)促纤维化小圆细胞肿瘤发病年龄跨度较大 ,发生部位可在腹腔也可在腹腔外 ;(2 )该肿瘤具有独特的组织学特点 ,大部分肿瘤细胞为无明确特点分化的上皮性小细胞 ,并埋于显著纤维化的间质中 ;(3)少数病例肿瘤细胞可因发生部位不同可有不同的特殊分化 ,较成熟特殊分化是预后好的标志 ;(4 )此瘤预后与发生部位、分裂活性及分化有关。