NF-κB圈套寡脱氧核苷酸联合紫杉醇对肺癌血管生成的影响

目的探讨NF-κB圈套寡脱氧核苷酸技术(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇对肺癌血管生成的影响。方法培养人肺癌细胞A549:(1)用脂质体瞬时转染法介导NF-κB全硫代圈套寡核苷酸(decoy ODN)和全硫代错义圈套寡核苷酸(scramble decoy ODN)处理A549细胞;(2)分为对照组、NF-κB decoy ODN组、紫杉醇组(1 000 ng/mL)和NF-κB decoy ODN+紫杉醇组,RT-PCR法测COX-2 mRNA水平表达;(3)免疫组织化学法测VEGF蛋白表达。结果 NF-κB decoy ODN、紫杉醇干预后A549细胞的COX-2 mRNA水平表达下降,对照组、NF-κB decoy ODN组、紫杉醇组、NF-κB decoy ODN+紫杉醇组浓度依次是:(0.71±0.04)μg/μL、(0.44±0.08)μg/μL、(0.51±0.02)μg/μL、(0.34±0.05)μg/μL(P<0.05)。VEGF蛋白表达亦下降,各组细胞阳性率依次是:(85±0.50)%、(63±0.26)%、(57±1.5)%、(21±0.34)%(P<0.05)。结论 NF-κB decoy ODN联合紫杉醇可明显抑制肺癌细胞血管生成,该作用可能与COX-2、VEGF表达相关。

NF-κB圈套寡脱氧核苷酸技术的发展和应用

NF κB是一种重要的核转录因子 ,可被多种刺激因素激活 ,并转位至细胞核 ,与相应的靶基因结合 ,启动基因转录。NF κB的靶基因包括编码细胞因子、粘附分子、诱导型一氧化氮合酶等的基因 ,因此与多种炎性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发生有关。人工合成的双链NF κB圈套寡脱氧核苷酸含有NF κB结合位点 ,可与游离的NF κB结合 ,从而圈套了NF κB ,阻止其活化。NF κB圈套寡脱氧核苷酸已成功用于多种疾病的发病机制及治疗学研究 。

NF-κB圈套寡脱氧核苷酸联合紫杉醇对肺癌细胞增殖凋亡的影响

探讨NF-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇对肺癌细胞增殖凋亡的影响。培养人肺癌细胞A549:(1)脂质体瞬时转染细胞;(2)MTT试验观察细胞生长曲线;(3)流式细胞术检测细胞凋亡率。NF-κB decoyODN使细胞生长受到抑制,NF-κBdecoy ODN联合紫杉醇使细胞凋亡增加。NF-κB decoy ODN联合紫杉醇可增强对肺癌细胞增殖的抑制及凋亡的诱导。

针对SP1的圈套寡脱氧核苷酸抑制NIH_3T_3细胞活力和Ⅲα_1胶原基因表达的研究

目的:研究针对转录因子SP1的圈套寡脱氧核苷酸(Decoy-Oligodeoxynucleotide,Decoy-ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的活力和Ⅲα1胶原基因表达的影响,探讨圈套寡脱氧核苷酸用于病理性瘢痕基因治疗的可能性及机理。方法:设计合成针对SP1的特异性哑铃形Decoy-ODN。用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞。分别用流式细胞仪检测ODN转染效率,激光共聚焦显微镜观察ODN在细胞中的分布,电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证ODN与SP1的特异性结合。用WST-8检测ODN对细胞活力的影响。用RT-PCR检测ODN对细胞胶原基因表达的抑制作用。结果:分别转染25nM、50nM、100nM、150nM SP1 Decoy-ODN,48h后,细胞活力依次为0.9331±0.0203、0.7479±0.0868、0.577±0.0347、0.4703±0.0147;转染100nMSP1Decoy-ODN可明显抑制Ⅲα1胶原mRNA的表达(P<0.01),抑制效果达60%。结论:Decoy-ODN可以通过拮抗核转录因子SP1的活性而抑制NIH3T3细胞的活力和Ⅲα1胶原基因的表达。

NF—κB双链寡脱氧核苷酸圈套对严重肺挫伤兔呼吸功能及炎性因子表达的影响

目的研究NF—κB双链寡脱氧核苷酸圈套（NF—κB decoy oligodeoxynucleotides，NF—κB decoy ODN）对严重胸外伤肺挫伤早期呼吸功能及血清炎性因子IL-1β、IL-13表达的影响。方法40只新西兰白兔用随机数字表法分为严重胸外伤肺挫伤组（挫伤组，12只）、严重胸外伤肺挫伤NF—κB杂链decoy ODN治疗组（杂链组，12只）、严重胸外伤肺挫伤NF—κB正链decoy ODN治疗组（正链组，12只）、对照组（正常无损伤组，4只）。建立严重胸外伤肺损伤模型，按实验分组分别将合成的正链、杂链NF—κB decoy ODN经颈内静脉注入，每只实验兔分别注射20μg。于肺挫伤后1，2，3，4h监测呼吸频率、潮气量、气道压力、呼吸流率曲线及呼气末CO2浓度，经颈动脉抽取血标本，ELISA法检测血清炎性因子IL-1β、IL-13的表达。结果肺挫伤后经NF—κB正链decoy ODN治疗后，肺泡通气量、动脉血氧分压、肺顺应性逐渐上升，肺泡一动脉血氧分压差逐渐下降直至接近正常水平，与挫伤组和杂链组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。杂链组上述指标略有变化，但与挫伤组比较，差异无统计学意义（P〉0．01）。血清炎性因子IL-1β在挫伤后1h升至高峰，并持续至实验结束，IL-13的表达在肺挫伤后1h下降，4h降至最低值。经正链decoy ODN治疗后可使挫伤后显著升高的IL-1β明显降低，而IL-13的表达维持于高水平，与挫伤组、杂链组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论在严重胸外伤肺挫伤早期呼吸功能出现损害时给予NF—κB正链decoy ODN治疗，对挫伤肺通气功能、换气功能、呼吸力学有明显的保护作用，且血清炎性因子IL-1β的表达减少，IL-13表达升高。