土壤芽孢杆菌分离方法的比较——以成都郊区土壤为例

【目的】筛选一种简便、实用的从土壤中分离芽孢杆菌的方法,初步调查成都郊区土壤芽孢杆菌资源。【方法】以稀释平板计数法为基础,用成都郊区20个土样作材料,设土壤悬液经加热和不加热分别用牛肉膏蛋白胨琼脂和麦芽汁牛肉膏蛋白胨琼脂分离芽孢杆菌4种处理方法,用"直接法-牛肉膏"、"直接法-麦芽汁"、"间接法-牛肉膏"和"间接法-麦芽汁"分别表示这4种处理。【结果】4种处理测定的芽孢杆菌总数为(5.18±0.38)～(6.30±0.56)logcfu·g-1drysoil,加热处理测定的数量显著低于不加热处理的;用"直接法-麦芽汁"分离的芽孢杆菌种类极显著多于其它处理,用该方法可从成都郊区分离21个种,最常见种有环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、泛酸芽孢杆菌(B.pantothenticus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alcalophilus)等。用"间接法-牛肉膏"仅分离到13个种,最常见种有巨大芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、异常芽孢杆菌(B.insolitus)等。【结论】直接法-麦芽汁是分离土壤芽孢杆菌的理想方法。B.circulans、B.megaterium、B.pantothenticus、B.alcalophilus、B.cereus、B.licheniformis、B.insolitus、B.subtilis、B.spaericus、B.pumilus等为成都市郊区土壤芽孢杆菌的主要类群,广泛存在于区域内。

成都市郊区土壤芽孢杆菌的解磷、解钾潜力

采用稀释平板法对成都市郊区27个土壤样品进行了芽孢杆菌的分离,获得333个菌株。在解磷、解钾培养基上分析其解磷、解钾能力。结果表明,约有15%的土壤芽孢杆菌菌株分解无机磷的效果显著,分属15种芽孢杆菌,其中地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)为分解无机磷的优势芽孢杆菌。多数菌株也能在有机磷和钾细菌培养基上生长,但分解能力较差。

土壤芽孢杆菌NBT菌株理化诱变筛选及其对作物生长的影响

用紫外线加氯化锂 (LiCl)复合诱变方式对释钾效能较强的土壤芽孢杆菌NBT菌株进行诱变处理 ,得到抗高渗 (2 %NaCl)突变株 32株。经高渗、高温及酸、碱诱导 ,突变株NBT 6和NBT 19能够在 10 %NaCl溶液中存活 ,同时能够耐受 35～ 5 5℃高温及pH 4～ 10的酸碱环境 ,两突变株的释钾活性与出发菌株相当 ,且传代稳定。辣椒、棉花盆栽试验表明 ,NBT 6和NBT 19不仅能在作物根际土壤增殖 ,而且能提高根际土壤有效磷、钾含量 ,改善植株的钾素营养 ,促进植株生长。

土壤芽孢杆菌NDD-1及其拮抗菌短小芽孢杆菌NDY-10的分离、鉴定和抑菌特性

从内蒙古大唐国际托总托发电有限责任公司储煤区土壤样品中筛选到1株拮抗菌株NDY-10及被其抑制的菌株NDD-1。通过菌落形态和显微镜观察,结合16S rRNA、gyrB基因比对分析对菌株进行鉴定;采用牛津杯法对菌株NDY-10进行抑菌谱试验;通过紫外线照射、不同温度、不同pH值等处理对菌株NDY-10发酵上清液对菌株NDD-1的抑菌活性及稳定性进行研究。结果表明,经鉴定,菌株NDY-10、NDD-1分别为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、土壤芽孢杆菌(Solibacillus sp.)。短小芽孢杆菌NDY-10对土壤芽孢杆菌NDD-1、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用依次减弱,而对枯草芽孢杆菌、酵母菌、青霉菌没有抑制作用;短小芽孢杆菌NDY-10发酵上清液抑菌活性受热处理影响较大,受紫外线照射处理影响较小,在pH值为5~9范围内保持较高的稳定性。首次报道了短小芽孢杆菌对土壤芽孢杆菌的抑菌作用。

嗜热脱氮土壤芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的克隆与重组表达及其酶学性质研究

【目的】克隆嗜热脱氮土壤芽孢杆菌中的β-葡萄糖苷酶基因bglB,在E.coli中异源表达,纯化并研究其酶学性质。【方法】利用PCR技术从嗜热脱氮土壤芽孢杆菌的基因组DNA中克隆得到bglB基因,将该基因克隆到表达载体pGEX-2TL上并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对纯化后的β-葡萄糖苷酶的酶学性质及寡聚状态进行分析。【结果】重组表达的β-葡萄糖苷酶最适温度为65°C,最适pH为7.0,能在pH 5-10、60°C下稳定存在4 h,并能在较高的离子强度(880 mmol/L K+)下发挥其功能。Al3+离子对其有强烈的激活作用,Co2+有一定的抑制作用。最适反应条件下该酶比活力为0.043 IU/mg。该酶具有多种寡聚体形式,这些寡聚体均有β-葡萄糖苷酶活性。【结论】获得一个耐热耐盐的中性β-葡萄糖苷酶,为进一步研究β-葡萄糖苷酶的催化作用机理,提高其热稳定性提供一定的帮助。

土壤类芽孢杆菌PCR鉴定方法的建立

以gyrB基因为靶标,设计土壤类芽孢杆菌的特异性引物,建立了土壤类芽孢杆菌的特异性PCR鉴定方法。该方法具有较高的特异性,可有效区分胶质类芽孢杆菌及其它各种细菌菌种。该PCR方法也具有较好的灵敏度,可检测只含1到10细胞之间的检测样品。

一株硅酸盐细菌的鉴定及其系统发育学分析

从南京地区黄棕壤中分离的一株好氧、革兰氏阴性、产芽孢的硅酸盐细菌NBT菌株 ,能产生丰厚的荚膜 ,具有鞭毛 ,能水解淀粉、产生吲哚、液化明胶 ,全细胞脂肪酸为硬脂酸C16∶0 、软脂酸C18∶1(Δ9) 和anteiso C15,DNA的G +Cmol%为 5 3 7%。 1 6SrRNA基因测序和系统发育学分析的结果表明 ,该菌株与胶质芽孢杆菌B 75 1 9(Bacillusmucilaginosus)、土壤芽孢杆菌B 75 1 7(B .edaphicus)亲缘关系最近。该菌株与B .edaphicusB 75 1 7的总DNA杂交率为 69% ,在形态、生理生化特征上有差异 。

一株产脂肽类生物表面活性剂菌株的分离及代谢产物分析

采用多次富集培养、血平板筛选方法,从新疆克拉玛依油田油水样中分离得到产生物表面活性剂菌株L1。该菌株与已培养的土壤芽孢杆菌(Brevibacillus agri)的16S rDNA序列同源性达到99%;其代谢产物具有降低表面张力的作用,可以将发酵液表面张力从最初的69.56 mN.m-1降到29.36 mN.m-1;菌株代谢产物经薄层层析分析初步鉴定为脂肽类生物表面活性剂,红外光谱定性该生物表面活性剂属于环脂肽类表面活性剂。

生物滴滤器处理间二氯苯废气的性能分析

从土壤中筛选1株能够降解间二氯苯能力的菌株,鉴定为土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri),该优势菌最佳生长条件为:降解时间48 h,菌液接种量10%,pH=7,温度25℃。以间二氯苯为模拟有机废气,采用生物滴滤器接种土壤短芽孢杆菌的方法对其进行生物处理。结果表明,在空床停留时间为90 s、进气浓度为1 000 mg·m^-3、进气负荷为60 g·(m^3·h)^-1条件下,间二氯苯的去除率可以维持在85%以上。生物滴滤器稳定运行后,菌体表面官能团发生改变,通过傅里叶红外光谱和X射线光电子能谱分析发现,菌株通过逐步加氧羧化后开环降解间二氯苯;对菌株再进行16S rRNA基因序列的同源性分析发现,生物膜中Brevibacillus agri占比达69.39%,并可以良好生长。研究可为间二氯苯的工业化处理提供参考。