土槿乙酸B体外抗真菌活性及对白色念珠菌麦角甾醇生物合成的影响

目的:研究土槿乙酸B(PLAB)的体外抗真菌活性和对白色念珠菌细胞膜中麦角甾醇生物合成的影响。方法:采用微量液体稀释法研究PLAB的体外抗白色念珠菌、新生隐球菌、絮状表皮癣菌的活性。将白色念珠菌经不同浓度PLAB及氟康唑作用28 h后,经过皂化、提取未皂化脂,采用高效液相色谱法测定其麦角甾醇的含量变化。结果:PLAB对白色念珠菌、新生隐球菌、絮状表皮癣菌这三株菌株的MIC50分别为16、32、16μg·mL-1。PLAB能使白色念珠菌中的麦角甾醇含量下降(P<0.05),且含量变化呈明显的剂量依赖性。结论:PLAB具有较强的抗真菌作用,通过抑制真菌的麦角甾醇生物合成而发挥高效抗真菌活性。

土槿乙酸抗白色念珠菌的敏感性及作用机理的电镜研究

目的:测定土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对白色念珠菌(caudida albicans)标准菌株C1a的最低抑菌浓度(MIC),并在透射电镜下观察经PLAB作用后,白色念珠菌超微结构的改变,探讨其作用机制,从而为抗白色念珠菌的中药开发提供理论依据。方法:用液体稀释法检测PLAB对白色念珠菌C1a的MIC,透射电镜下观察经不同浓度PLAB作用前后白色念珠菌C1a超微结构的改变,两性霉素B(AmB)为阳性对照药物。结果:PLAB对白色念珠菌C1a的MIC为32μg/ml。透射电镜观察发现,AmB处理组白色念珠菌C1a形态基本正常,但细胞壁结构疏松,有裂口,细胞膜缺失较严重,胞浆内容物漏出。经PLAB处理组白色念珠菌C1a细胞变形,结构模糊,细胞壁疏松,有裂口,细胞膜连续性破坏,进而破碎成碎片互相融合,细胞器肿胀乃至坏死溶解,甚至胞浆内容物全部漏出呈"空壳"状。结论:PLAB有抗白色念珠菌作用,可能通过破坏白色念珠菌的细胞壁、细胞膜、细胞核的结构而达到抗真菌作用。

土槿乙酸抑制人卵巢癌SKOV_3细胞增殖并诱导G_2/M期阻滞

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞周期的影响。方法 MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞术检测细胞周期;Real time-PCR和Western blot检测周期相关基因Cyclin B1、CDK1和CyclinD1的表达变化。结果 PLAB明显抑制SKOV3细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P<0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为2.44、1.60、2.94μmol.L-1。5μmol.L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P<0.05),同时伴有Cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P<0.05),Cyclin D1呈低表达状态(P<0.05)。结论 PLAB可抑制SKOV3细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随Cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关。

土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用

目的初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制。方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理。流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路相关信号分子水平。结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平。下调NF-κB p65、p NF-κB p65、IKKα、IKKβ、p IKKα/β、IκBα、p IκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期。GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用。结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关。

土槿乙酸诱导前列腺癌DU-145细胞周期阻滞的机制研究

目的:探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人前列腺癌细胞株DU-145细胞增殖和细胞周期的影响。方法:MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞术检测细胞周期;Real-timePCR和Western blot检测周期相关基因cyclin B1,CDK1和cyclin D1的表达变化。结果:PLAB明显抑制DU-145细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P<0.05),其24,48,72 h的IC50分别为4.53,2.39,2.08μmol·L-1。5μmol·L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P<0.05),同时伴有cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P<0.05),cyclin D1呈低表达状态(P<0.05)。结论:PLAB可抑制DU-145细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关。