4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析

收集黑龙江省大庆地区牛源、绵羊源、绒山羊源和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫，以SDS-蛋白酶K法抽提其基因组DNA，用特异性引物通过PCR扩增土耳其斯坦东毕吸虫成虫细胞色素C氧化酶亚基1基因（coxl）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1基因（nad1）并进行测序，应用Chromas和DNAStar软件分析扩增产物的变异情况。结果表明，大庆地区4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1基因均为1125bp，nad1基因均为518bp；且其线粒体基因存在差异，coxl的同源性为99．0％～99．7％，nad1的同源性为98．3％～99．4％。

土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的原核表达

将pGEM-TM质粒上的土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(TM)基因片段亚克隆至原核表达载体pET28a(+),重组的pET28-TM在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中经1 mmol/L IPTG诱导表达出一37.5 ku的融合蛋白。该蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测,出现与目的蛋白大小一致的单一条带。Western-blotting检测结果表明,纯化的蛋白可被自然感染东毕吸虫的山羊血清识别,这为进一步研究东毕吸虫基因工程疫苗奠定了基础。

牛羊源土耳其斯坦东毕吸虫ITS和28S rDNA-LSU序列分析

目的探讨牛羊源土耳其斯坦东毕吸虫(Orientobilharzia turkestanicum)核糖体内转录间隔区(ITS)和28S核糖体大亚基序列(rDNA-LSU)的差异。方法粪便检查、剖杀自然感染东毕吸虫的绒山羊、山羊、绵羊和黄牛,收集虫体,形态学鉴定为土耳其斯坦东毕吸虫。抽提成虫基因组DNA,扩增其ITS(包括ITS-1、5.8S rDNA和ITS-2)和28S rDNA-LSU序列,测序并分析以上序列,以及28S rDNA-LSU序列RNA二级结构。结果牛、羊源土耳其斯坦东毕吸虫的ITS-1、5.8S rDNA、ITS-2和28S rDNA-LSU序列分别长384、159、331和1304bp。牛源和羊源的ITS-1和5.8S rDNA序列完全相同;黄牛源、绵羊源和绒山羊源的ITS-2序列完全相同,与山羊源存在1个碱基的差异;绵羊源和绒山羊源的28S rDNA-LSU序列完全相同,与牛源和山羊源分别有2个碱基的差异。绵羊源和绒山羊源的28S rDNA-LSU序列RNA二级结构相同,与山羊源存在微小差异,但牛源与羊源存在较大差异。结论不同终末宿主源土耳其斯坦东毕吸虫的核糖体序列存在不同程度的差异,羊源28S rDNA-LSU序列的RNA二级结构相同或相似,但与牛源存在较大差异。

土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库的构建

按照SMARTcDNA文库构建试剂盒说明 ,以TRIZOL试剂提取的土耳其斯坦东毕吸虫成虫总RNA为模板 ,以含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)为引物反转录合成第一链cDNA ,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA 5’端延伸出去的模板 ,采用LD -PCR技术以改良的oligo(dT)引物合成双链cDNA ,经蛋白酶K和SfiⅠ消化后 ,过CHROMASPIN - 4 0 0柱进行分级分离。双链cDNA与载体λTripEx2两臂连接 ,体外包装后构建成土耳其斯坦东毕吸虫成虫的cDNA噬菌体表达文库。经测定文库容量为 6 38× 10 6,文库扩增后的滴度为 3 4 8× 10 10 (Pfu/ml) ,PCR测定的重组率为 92 %。各项指标表明 ,我们成功的构建了高质量的cDNA文库 ,为进一步筛选、克隆保护性抗原基因奠定了基础。

土耳其斯坦东毕吸虫结节亚种染色体的G带研究

土耳其斯坦东毕吸虫结节亚种染色体的Ｇ带核型表明：Ｎｏ．Ⅰ染色体，短臂２条强带，末端为１条中强带，长臂７～８条强带，末端２条强带较宽；Ｎｏ．ⅡＺ染色体，短臂２条强带，末端的中强带较宽，长臂有４条等距间隔的强带，Ｗ染色体，短臂为１条强带，末端为１条阴性带，长臂５条强带；Ｎｏ．Ⅲ染色体，短臂２条强带，长臂５～６条强带；Ｎｏ．Ⅳ染色体长臂５～６条强带；Ｎｏ．Ⅴ染色体，长臂有４条强带；Ｎｏ．Ⅵ染色体，短臂有一较宽强带，长臂有２条强带；Ｎｏ．Ⅶ染色体，短臂有２条强带，长臂有２条强带。

土耳其斯坦东毕吸虫结节变种尾蚴皮层的超微结构观察

本文对土耳其斯坦东毕吸虫结节变种尾蚴皮层的超微结构进行了描述。尾蚴皮层从外向内由糖蛋白膜、外质膜、皮层基质、基质膜、基底膜组成。皮层基质为一较厚的致密层,无细胞界线及其它亚细胞结构,充满致密的细颗粒性物质。此层厚度变化较大,而致虫体表面凸凹不平。有两型致密体分布于皮层基质中。

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种扫描电镜观察及与其它血吸虫的比较

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种分别收集于四川和黑龙江省 ,按常规电镜方法处理后 ,以日立 JSM- 80 0扫描电镜观察并摄片。观察显示中华血吸虫体表无结节 ,其雄性成虫体表结构近似于日本血吸虫等亚洲血吸虫 ,与文献描述的采集于泰国的中华血吸虫也无明显差异。观察同时表明土耳其斯坦东毕吸虫结节变种与程氏东毕吸虫基本无差别 ,二者的感觉球种类与土耳其斯坦东毕吸虫一致 ,但数目较后者为多。同时结合已发表的有关裂体属血吸虫 SEM研究结果 ,对裂体属血吸虫 SEM超微结构特点列表进行了比较。按照 Rollinson的分组方法 ,中华血吸虫属于无结节组 ,而东毕吸虫属于不带棘的有结节组。

东毕吸虫抗原特异性的研究──土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原SDS-PAGE分析

为了探明东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分，供今后在免疫诊断和防治东毕吸虫的应用，本试验应用ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ首次对绒山羊体内寄生的土耳其斯坦东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分进行了分析。结果表明该抗原有１７ 条多肽带，其分子量范围２５～９３ＫＤ．其中主带７ 条，分别为２９、３０、３８、４０、６７、７８、９１ＫＤ。本试验初步阐明了土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原的多肽组分，为进一步对该病免疫诊断用抗原的分离、纯化。

基于线粒体nad4基因探讨土耳其斯坦东毕吸虫的系统发生位置

为探讨土耳其斯坦东毕吸虫在血吸虫中的系统发生位置,本研究设计一对特异性引物,通过PCR方法对土耳其斯坦东毕吸虫(绵羊源)线粒体烟酰胺脱氢酶亚基Ⅳ基因(nad4)进行扩增和测序分析,并与GenBank中相关血吸虫nad4基因进行比对。结果显示,本研究克隆的该吸虫线粒体nad4基因序列大小约为1030bp,与已发表的其它血吸虫线粒体nad4基因的同源性为51.6%～66.7%,其系统发生位置属于非洲血吸虫种群。

土耳其斯坦东毕吸虫结节变种的染色体C带核型

土耳其斯坦东毕吸虫结节变种的染色体C带核型表明;在雌性虫体,第1号染色体的短臂可见到一异染色质块。第2号性染色体的Z染色体不易出现C带,而W染色体从着丝点部位向长臂方向恒定的出现一大块异染色质。第3号、5号染色体不是恒定的出现C带。第4号染色体的端着丝粒非常明显。第6号、7号染色体在长臂末端分别可以见到一对异染色质块。在雄性虫体,可清楚地见到第2号性染色体为同形性染色体,两条同源染色体都没有异染色质出现。其它染色体的C带同雌性虫体。

几种杀螨剂防治枣树土耳其斯坦螨药效研究

【目的】通过防治枣树土耳其斯坦螨的药效试验,筛选高效,低毒的新型杀螨剂及合理使用剂量,从而达到有效控制枣树上土耳其斯坦叶螨的目的。【方法】采用田间喷雾的药效试验方法。【结果】57%炔螨特乳油1 500、2 000倍处理,1.8%阿维菌素乳油1 500、2 000倍处理,10.5%阿维·哒螨灵乳油1 500倍处理,碧拓乳油(生物药剂)1 000倍处理对枣树土耳其斯坦螨叶螨起到较好的防治效果,且对枣树安全。【结论】防治枣树土耳其斯坦螨可选用试验筛选出的以上4种药剂加水喷雾防治,对枣树土耳其斯坦螨均表现了良好的防效。

土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR技术从土耳其斯坦东毕吸虫(Orientobilharzia turkestanicum)成虫总RNA中扩增磷酸丙糖异构酶基因(TPI),鉴定后将目的片段与毕赤酵母表达载体pPIC9k连接,构建重组表达质粒pPIC9k-TPI,并将其电击转化到毕赤酵母GS115中,重组菌株经甲醇诱导后表达的TPI蛋白,经SDS-PAGE、western-blotting检测,并利用葡聚糖凝胶层析柱纯化。结果显示,成功地克隆了土耳其斯坦东毕吸虫TPI；重组毕赤酵母表达了分子质量为43 ku的TPI蛋白；葡聚糖凝胶层析过滤得到单一的TPI蛋白。

土耳其斯坦裂体吸虫23kDa蛋白基因的序列分析及抗原表位预测

为研究土耳其斯坦裂体吸虫23 kDa蛋白的生物学特性,以土耳其斯坦裂体吸虫cDNA为模版,利用PCR对23 kDa基因进行扩增,并将其克隆到T-easy载体后进行序列测定。利用生物信息学对其结构、抗原指数进行分析,并对其抗原表位进行预测。序列分析结果表明,该虫体的23 kDa基因长度为657 bp,A+T含量为57.38%,与曼氏血吸虫、埃及血吸虫和日本血吸虫的23 kDa基因的相似性分别为85.24%、83.71%和81.89%。蛋白二级结构分析表明,23 kDa蛋白经过4次跨膜,主要由6个α-螺旋、3个β-折叠、7个β转角和若干个无规则卷曲构成。抗原表位预测结果表明,该蛋白有3个B细胞抗原表位。综合分析土耳其斯坦裂体吸虫23 kDa蛋白是一种较好的抗原分子,是土耳其斯坦裂体吸虫疫苗的重要候选分子。

土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因的克隆及其序列分析

目的利用RTPCR和RACE技术克隆土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因全长序列并进行序列分析。方法根据日本血吸虫和曼氏血吸虫肌动蛋白基因的保守区设计引物,利用RTPCR扩增出土耳其斯坦东毕吸虫的肌动蛋白基因的大片段,再结合RACE技术分别得到肌动蛋白的3’端和5’端,将三部分序列拼接后获得肌动蛋白基因的全长cDNA序列并进行序列分析。结果成功克隆了土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白的全长cDNA并提交GenBank,登录号为DQ017265,核酸序列比对表明东毕吸虫肌动蛋白基因的核苷酸序列和日本血吸虫、曼氏血吸虫的同源性分别为90%和91%。结论土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白的全长cDNA的克隆为进一步表达及其生物学性能的分析提供了理论基础。

土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆及其序列分析

目的克隆土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶的全长基因。方法根据日本血吸虫和曼氏血吸虫磷酸丙糖异构酶基因的保守区设计引物,利用RT-PCR扩增出土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因的大片段,再结合RACE技术分别得到磷酸丙糖异构酶基因的3′端和5′端,将3部分序列拼接后获得磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA序列,并提交GenBank。结果成功克隆了土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA序列并提交GenBank,登录号为DQ092331。结论土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA的克隆为进一步表达及其生物学性能的分析提供了理论基础。

译名“东土耳其斯坦”是错误的

《中国翻译》杂志一九八六年第三期刊登了张德明同志题为《译名“东土耳其斯坦”并非大错》的文章。就内容而言,作者正确地指出了“East turkestan”(即:东突厥斯坦)这一地理名称的确是从历史上遗留下来的,它指的是我国疆域的某一部分。

论说所谓“土耳其斯坦”

本文从突厥的历史论证突厥只是中国的一个古代部族的名称。在漫长的历史发展中，突厥诸部向西迁徙，遍布于中亚西亚的广大地区。他们在不同的国度各有不同的名称，不再统一称为突厥，突厥成为一个语系的名称，在世界上并没有一个统一的突厥族。突厥斯坦是一个地名，过去误译为土耳其斯坦。由于突厥部族在不同的历史时期分布的地区不同，因而突厥斯坦的地域范围也不一样。到公元１１世纪以后，今中亚地区才可算是突厥斯坦。东突厥斯坦一名是１９世纪初期由俄国人杜撰的，从未被中国接受。１９２４年以后，苏联也不再使用突厥斯坦这个地名。有些人坚持使用东土耳其斯坦一名，是别有用心的，是为了进行分裂中国的活动。坚持使用东突厥斯坦一名的人还企图把新疆说成是突厥族一个民族的地方，这也是说不通的。本文以各民族共同开发建设新疆的事实论证了新疆属于新疆各民族，属于中国。

译名“东土耳其斯坦”并非“大错”

《翻译通讯》一九八五年第十一期第十五页右栏首行称:"所谓East Turkestan,指我国新疆一带,如译为‘东土耳其斯坦’则因本末倒置,可视为大错"。据 The Random House College Dictiona-ry和The Aminerican Heritage Dictionary ofthe English Language(NeW College Edition、以及《远东英汉大辞典》的 Turkestan条,"土耳其斯坦"(Turkestan)