土茯苓黄酮与鲣鱼蛋白肽的交互作用研究

选取土茯苓和鲣鱼为原料,制备土茯苓黄酮和鲣鱼蛋白肽。以黄酮提取率、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)清除活性和黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制活性为指标筛选土茯苓黄酮,以蛋白质回收率、DPPH·清除活性和XOD抑制活性为指标优化鲣鱼蛋白肽水解酶,并分析最佳酶解液的总氨基酸含量。将筛选出的土茯苓黄酮和鲣鱼蛋白肽进行交互作用,研究其产物的XOD抑制活性和DPPH·清除活性变化,最后用荧光光谱法探究交互作用的可能机理。研究表明,醇提土茯苓黄酮的提取率、XOD活性和DPPH·清除活性都显著高于水提土茯苓黄酮,鲣鱼蛋白肽的最佳处理酶为木瓜蛋白酶,二者交互作用后发现,产物的XOD抑制活性显著提高,且其DPPH·清除活性表现出明显的协同增效作用,巴士杀菌有助于提高其DPPH·清除活性,而高温灭菌后DPPH·清除活性显著降低,pH 6.0时交互作用产物DPPH·清除活性最高。结合荧光光谱分析,推测土茯苓黄酮与鲣鱼蛋白肽可能通过氢键结合形成新的产物。

土茯苓总黄酮改善ISO诱导的小鼠心肌肥大和心脏炎症的预防作用及机制

目的研究土茯苓总黄酮(Smilax glabra flavonoids,SGF)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌肥大和心脏炎症的作用及机制。方法C57/6J小鼠随机分为正常组、ISO模型组(1.25 mg/(kg·d))、SGF低剂量组(50 mg/(kg·d))、SGF高剂量组(100 mg/(kg·d))。SGF低剂量组和SGF高剂量组均在造模前预防给药7 d,之后各组进行ISO皮下注射,连续注射7 d后进行超声心动图测定;眼眶取血分离血清,检测血清中N端脑钠肽前体(N-terminal brain natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)及炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)含量;收集心肌标本,观察心肌组织的病理学改变,二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)染色法检测心肌活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,检测心脏相关肥大基因mRNA水平变化以及NOD样受体热蛋白结构域蛋白3/半胱天冬酶-1/白介素18(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3/cysteinyl aspartate specific proteinase-1/interleukin-18,NLRP3/Caspase-1/IL-18)炎症级联通路上关键因子蛋白水平表达的变化。结果SGF预防给药可降低超声心动图中的左室舒张末期室间隔厚度(left ventricular end-diastolic inter ventricular septal thickness,IVSd)、左室收缩末期室间隔厚度(left ventricular end-systolic interventricular septal thickness,IVSs)和射血分数(ejection fraction,EF),提高左室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVIDd)、左室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVIDs)和左心室收缩末期容积(left ventricular end systolic volume,LVESV),降低血中IL-1β、IL-6、TNF-α和NT-proBNP含量,抑制心脏相关肥大基因心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、β-肌球蛋白重链(beta-myosin heavy chain,β-MHC)mRNA表达水平上调,抑制心肌ROS水平增加,下调NLRP3/Caspase-1/IL-18炎症级联通路上关键因子NLRP3、Caspase-1(p20)和IL-18的蛋白表达,改善心肌细胞肥大和排列紊乱的情况,减少心肌纤维外的成纤维细胞增多,减轻炎症细胞浸润和心肌组织纤维化情况。结论SGF可改善ISO诱导的小鼠心肌肥大和心脏炎症,可能通过NLRP3/Caspase-1/IL-18炎症级联通路起作用。

土茯苓总黄酮对兔离体胸主动脉环的舒张作用及机制

目的探讨土茯苓总黄酮(SGF)对兔胸主动脉环的舒张作用及作用机制。方法制备内皮完整或去内皮的兔离体胸主动脉环并检验其内皮完整性,利用MedLab-U/8c生物信号采集处理系统检测药物刺激后血管张力。①内皮完整胸主动脉环分为氯化钾(KCl)60 mmol·L^(-1)、去氧肾上腺素(PE)1μmol·L^(-1)、去甲肾上腺素(NE)1μmol·L^(-1)、一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)100μmol·L^(-1)和β2肾上腺素能受体阻滞剂ICI1185510.1μmol·L^(-1)组。KCl组、PE组和NE组分别预收缩胸主动脉环10 min,L-NAME组和ICI118551组分别预处理胸主动脉环30 min,并加入NE 1μmol·L^(-1)预收缩10 min。所有组间隔6 min加1次SGF,检测SGF 15.625~500 mg·L^(-1)浓度作用下血管张力;②去内皮胸主动脉环分为PE 1μmol·L^(-1)、NE 1μmol·L^(-1)和氯化钙(CaCl_(2))组。PE组和NE组预收缩胸主动脉环10 min,间隔6 min加1次SGF,检测SGF 15.625~250 mg·L^(-1)浓度作用下血管张力。CaCl_(2)组在无钙环境中加入KCl 60 mmol·L^(-1)预收缩胸主动脉环,同时加SGF 500 mg·L^(-1)预处理20 min,间隔6 min添加1次CaCl_(2),检测CaCl_(2)0.15~2.4 mmol·L^(-1)浓度作用下血管张力。同时设生理盐水组。结果在内皮存在条件下,SGF 15.625~250 mg·L^(-1)对KCl预收缩胸主动脉环无明显作用,而SGF 31.25~500 mg·L^(-1)对PE和NE预收缩胸主动脉环有显著舒张作用(P<0.01),最大舒张率分别达(56±12)%和(76±13)%。SGF 500 mg·L^(-1)对胸主动脉环的舒张功能减弱,舒张率为(40±10)%和(46±15)%。L-NAME 100μmol·L^(-1)预处理基本阻断SGF诱导的胸主动脉环舒张作用(P<0.01),而ICI1185510.1μmol·L^(-1)预处理仅部分阻断SGF的舒张效应(P<0.01)。去除胸主动脉环内皮后,SGF对PE和NE预收缩胸主动脉环无舒张作用,但SGF 500 mg·L^(-1)预处理能显著降低CaCl_(2)0.6~2.4 mmol·L^(-1)诱导的胸主动脉环收缩(P<0.05)。结论SGF可能具有一氧化氮依赖性诱导血管舒张、钙离子通道阻滞剂和β受体阻滞剂作用。

土茯苓黄酮对高脂小鼠脂肪代谢及抗氧化水平的影响

研究了土茯苓总黄酮及主要成分落新妇苷对高脂小鼠脂肪代谢及体内抗氧化水平的影响。80只ICR小鼠随机分成8组,其中Ⅰ组为基础对照组,Ⅱ组为高脂对照组;其余6组在饮用水中分别添加1、2和4 mg/m L的落新妇苷或土茯苓总黄酮。八周后,解剖小鼠,采集腹腔脂肪和肝脏并称重,分析血清中甘油三酯(TG),总胆固醇,高密度胆固醇和葡萄糖含量。实验结果表明与高脂对照组相比,土茯苓黄酮对小鼠摄食量和饮水量无明显影响,但可显著减少小鼠体重增幅、腹腔脂肪重量及血清中TG含量。机制研究表明土茯苓黄酮能显著提升小鼠肝脏中肉碱脂酰基转移酶和脂肪酸β-氧化酶活性,但对脂肪酸合成酶活性无明显影响,说明土茯苓黄酮通过促进分解减少体内脂肪蓄积。土茯苓黄酮能显著增加肝脏中抗氧化酶活性,并减少脂质过氧化产物丙二醛的含量,说明土茯苓黄酮具有体内抗氧化活性。

土茯苓及其有效成分治疗风湿骨病的研究进展

风湿骨病主要是由于正气虚弱,风寒湿等邪气乘虚侵袭,痹阻经络,引起关节肿胀疼痛、屈伸不利、功能障碍的疾病,后期可出现关节致残和(或)内脏功能衰竭。已有较多文献报道土茯苓特别是落新妇苷在治疗风湿骨病方面具有独特的抗炎抗氧化、调节免疫等作用,本文就其在风湿骨病中作用机制的研究进展作一综述,为进一步开发利用和研发新药提供科学依据。

基于IL-17/Notch轴土茯苓总黄酮对银屑病小鼠皮肤瘙痒缓解及炎症反应抑制的作用机制研究

[目的]探讨土茯苓总黄酮对银屑病小鼠皮肤瘙痒及炎症反应的影响,及对白细胞介素(IL)-17/Notch信号轴的调控作用。[方法]将50只小鼠按照随机数字表法随机分为正常组、模型组、土茯苓总黄酮低剂量组(简称低剂量组)、土茯苓总黄酮高剂量组(简称高剂量组)和甲氨蝶呤组,每组10只,除正常组外,其余组小鼠背部脱毛,每日涂抹5%咪喹莫特软膏62.5 mg,1次/日,连续7 d,正常组小鼠背部涂抹等量凡士林软膏,低、高剂量组小鼠每日分别用300和500 mg/kg土茯苓总黄酮灌胃,甲氨蝶呤组小鼠每日1 mg/kg甲氨蝶呤片水溶液灌胃,1次/日,连续7 d。评估小鼠皮肤瘙痒次数,进行皮损严重程度指数(PASI)评分,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清干扰素γ(IFN-γ)、IL-23和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤组织病理损伤,聚合酶链反应(PCR)检测水通道蛋白-3(AQP3)和神经酰胺(Cer)mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量。[结果]正常组小鼠表皮层菲薄,仅有少量炎性细胞;模型组小鼠表皮增厚,伴有角化过度或角化不全,真皮乳头出现水肿,伴血管扩张,棘层增厚,可见大量炎性细胞浸润;低、高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠病理损伤不同程度减轻。与正常组比较,模型组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量升高,AQP3和Cer mRNA相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05);与高剂量组比较,甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05)。[结论]土茯苓总黄酮可改善银屑病小鼠皮肤损伤,减轻皮肤瘙痒,抑制对炎症反应,其可能是通过抑制IL-17/Notch信号轴发挥调控作用。

土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的研究

目的：探讨土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的影响。方法：采用双硫腙-PAR-铅分光光度法检测溶液中的铅离子含量，从而衡量出样品对铅离子的螯合能力；体外试验测定土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物清除自由基的能力和总的抗氧化能力。结果：土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物均在体外有很好的螯合作用，能够有效清除ABTS＋、DPPH·和羟基自由基，并且具有很好的抗氧化能力。结论：土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子有显著的螯合能力，以及具有良好的自由基清除和抗氧化能力。

土茯苓总黄酮通过p38/ERK MAPK通路调控膜性肾病大鼠足细胞上皮-间充质转化的作用机制研究

目的:探讨土茯苓总黄酮(SGF)对膜性肾病大鼠足细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及对p38/细胞外调节蛋白激酶(ERK)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调节作用。方法:将76只造模成功的膜性肾病SD大鼠随机分为模型组、SGF低剂量组(15 mg/kg)、SGF高剂量组(30 mg/kg)和阳性药物组(环孢素,10 mg/kg),每组19只,另取20只正常SD大鼠作为对照组。各组采用相应药物干预6周。HE染色和TUNEL法观察大鼠肾皮质组织病变和PC凋亡。检测24 h尿蛋白(24 h UTP)、血清血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平,血清白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,肾皮质组织细胞外调节蛋白激酶(ERK)mKNA、p38MAPK mKNA、Nephrin mKNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA,以及ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA蛋白水平。结果:模型组大鼠肾小球体积增大,细胞萎缩,系膜与基质出现明显增生,肾小管扩张;SGF低剂量组、SGF高剂量组及阳性药物组大鼠肾脏病理损伤均有不同程度减轻。与模型组比较,SGF低剂量组、SGF高剂量组及阳性药物组大鼠IL-4、TGF-β1水平,Nephrin mRNA和蛋白水平均明显升高(P<0.05),24h UTP、Scr、BUN、TNF-α、肾小球足细胞凋亡指数(AI)、α-SMA mRNA、p-ERK蛋白、p-p38MAPK蛋白、α-SMA蛋白水平均明显降低(P<0.05),其中以阳性药物组大鼠各指标变化最显著,其次是SGF高、低剂量组(P<0.05)。结论:SGF可有效改善膜性肾病大鼠炎性反应和细胞凋亡,抑制EMT过程,可能是通过调控p38/ERK MAPK通路发挥作用。

土茯苓总黄酮治疗自身免疫性前列腺炎模型大鼠作用机制研究

目的探讨土茯苓总黄酮治疗自身免疫性前列腺炎模型大鼠作用机制。方法60只SD大鼠按照随机数字表法分成空白组、模型组、阿司匹林组(100 mg/kg)和土茯苓总黄酮低(100 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高剂量组(500 mg/kg),每组10只。除空白组注射等体积生理盐水外,其余各组大鼠均利用腹腔注射百白破疫苗(0.5 mL)+皮下多点注射前列腺蛋白提纯稀释液与完全弗氏佐剂混合乳剂(1 mL),建立自身免疫性前列腺炎大鼠模型。造模成功后土茯苓总黄酮低、中、高剂量组按100、300及500 mg/kg土茯苓总黄酮灌胃,空白组、模型组给予相同体积生理盐水,阿司匹林组给予100 mg/kg阿司匹林混悬液,每天1次,连续给药15 d。HE染色观察前列腺组织形态学变化;ELISA法测定大鼠前列腺组织白细胞介素1β(IL-1β),白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果与空白组比较,模型组大鼠前列腺组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达明显增加[IL-1β:(68.37±3.74)ng/L比(4.16±0.72)ng/L,IL-6:(285.87±41.37)ng/L比(119.18±32.18)ng/L,TNF-α:(356.16±51.64)ng/L比(97.18±16.59)ng/L,P均<0.05]。与模型组比较,阿司匹林组和土茯苓总黄酮低、中、高剂量组IL-1β水平均明显下降[(16.67±1.53)ng/L、(56.23±7.19)ng/L、(40.74±2.68)ng/L、(22.39±1.72)ng/L比(68.37±3.74)ng/L,P均<0.05];TNF-α明显降低[(105.61±27.98)ng/L、(284.71±17.39)ng/L、(227.24±6.97)ng/L、(188.67±17.17)ng/L比(356.16±51.64)ng/L,P均<0.05];IL-6除土茯苓总黄酮低剂量组降低不明显以外[(281.34±20.81)ng/L比(285.87±41.37)ng/L,P>0.05],阿司匹林组和土茯苓总黄酮中、高剂量组均明显下降[(120.37±42.02)ng/L、(158.37±34.21)ng/L、(112.94±16.46)ng/L比(285.87±41.37)ng/L,P均<0.05]。病理结果显示,各组大鼠前列腺组织病理表现与其炎症因子表达程度相一致。结论土茯苓总黄酮能降低自身免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺组织IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平,改善前列腺病理形态,减轻前列腺组织炎症反应。

基于 NLRP3 炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P〈0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P〈0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P〈0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P〈0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。