新型土贝母苷甲脂质体的制备及其抗胰腺癌作用研究

目的 利用中药活性成分土贝母苷甲完全替代胆固醇作为脂质体膜材料,制备新型土贝母苷甲脂质体(Tub I-LPs),并研究其体内外抗肿瘤作用。方法 采用薄膜水化法制备脂质体。利用粒径仪考察粒径和电位,透射电镜观察形貌,并进行包封率及体外稳定性考察。使用小鼠全血比较土贝母苷甲单体(Tub I)、土贝母苷甲普通型胆固醇脂质体(C-Tub I-LPs)和Tub I-LPs的溶血性。使用CCK-8法检测Tub I-LPs对Panc 02细胞和MIA PaCa 02细胞的增殖抑制效果,利用流式细胞仪检测凋亡作用。倒置荧光显微镜和流式细胞仪分别定性和定量检测Panc 02细胞和MIA PaCa 02细胞对两种脂质体的细胞摄取能力。使用JC-1实验检测线粒体膜电位的变化。体内实验评估两种脂质体的抗肿瘤效果。使用HE染色评价制剂的安全性。结果 两种脂质体粒径分散均匀,呈近似球状,Tub I-LPs平均粒径为(112.8±0.2)nm,Zeta电位为(-2.6±0.2)m V。C-Tub I-LPs平均粒径为(185.2±0.2)nm,Zeta电位为(-3.1±0.2)m V。Tub I-LPs和C-Tub I-LPs的包封率分别为98.22%和48.39%,两者相比,稳定性相似,但Tub I-LPs溶血性明显降低,且其在细胞增殖抑制,致癌细胞凋亡方面作用更加显著。细胞摄取实验结果显示,肿瘤细胞对Tub I-LPs的摄取能力为C-LPs的3倍。Tub I-LPs引起肿瘤细胞线粒体膜电位下降更显著。C57原位胰腺癌模型证实Tub I-LPs抑制肿瘤作用更加显著。HE染色显示两种脂质体均无明显毒副作用。结论 使用土贝母苷甲作为膜材能显著增强其细胞摄取能力,并有效提高整体抗肿瘤效果,为进一步利用该膜材包裹抗肿瘤药物研究奠定了基础。

土贝母苷甲通过AKT/NF-κB信号通路抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、迁徙和侵袭能力

目的探究土贝母苷甲(TBMS1)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系MDA-MB-468的影响,并探求其作用机制。方法通过MTT实验测定TBMS1对细胞活性的影响并确定给药浓度,通过EDU细胞增殖实验测定TBMS1对细胞增殖能力的影响,通过细胞划痕实验测定TBMS1对细胞迁徙能力的影响,通过Transwell实验测定TBMS1对细胞侵袭能力的影响,通过Western Blot实验测定TBMS1作用于MDA-MB-468细胞的具体作用机制。结果TBMS1对MDA-MB-468细胞的增殖、迁徙和侵袭能力呈剂量依赖性抑制。而Western Blot及挽救实验结果表明:TBMS1通过抑制AKT/NF-κB信号通路发挥作用。结论TBMS1作为一种天然药物成分,在TNBC的治疗中显示出潜在的抗肿瘤活性,且具有较低的药物毒性。

基于RANKL/RANK/OPG信号通路探讨土贝母苷甲对糖尿病性骨质疏松大鼠骨质流失的影响

目的 探讨土贝母苷甲对糖尿病性骨质疏松(OP)大鼠骨质流失及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)/骨保护蛋白(OPG)信号通路的影响。方法 采用高脂高糖饮食+链脲佐菌素腹腔注射法构建大鼠糖尿病性OP模型,将60只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、土贝母苷甲低剂量组(1μmol/L)、土贝母苷甲高剂量组(5μmol/L)、OPG组(3 mg/kg)、土贝母苷甲高剂量+OPG组(5μmol/L土贝母苷甲+3 mg/kg OPG)。酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清核心结合因子α1(CBF-α1)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、骨钙素(OC)水平;Micro-CT测定骨密度(BMD)及骨小梁微结构参数;TRAP染色测定股骨表面破骨细胞数量(N.Oc/BS);HE染色观测大鼠骨组织病理变化;qRT-PCR法与Western blot法分别测定骨组织RANKL、RANK、OPG mRNA与蛋白水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠血清CBF-α1、PINP、OC水平、股骨最大负荷、断裂挠度、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、OPG mRNA与蛋白水平降低(P<0.05),Tb.Sp、N.Oc/BS、RANKL mRNA与蛋白、RANK mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,土贝母苷甲高剂量组、OPG组血清CBF-α1、PINP、OC水平、股骨最大负荷、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、OPG mRNA与蛋白水平升高(P<0.05),Tb.Sp、N.Oc/BS、RANKL mRNA与蛋白、RANK mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与土贝母苷甲高剂量组相比,土贝母苷甲高剂量+OPG组大鼠上述指标均进一步升高或降低(P<0.05)。结论 土贝母苷甲可能通过抑制RANKL/RANK/OPG通路,减少糖尿病性OP大鼠破骨细胞形成,抑制骨流失。

注射用土贝母苷甲肺靶向制剂的体外释药研究

目的:探讨土贝母苷甲肺靶向微粒的体外释药机理。方法:采用动态透析技术考察制剂的体外释药规律。结果:体外释放试验表明,土贝母苷甲原料药及原料药与载体材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物的简单混合物的体外释放均较符合一级动力学方程,而土贝母苷甲聚乳酸-羟基乙酸共聚物载药肺靶向微球的体外释放则均较符合Weibull方程,t1/2明显延长,缓释作用明显。

土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡(英文)

目的 :研究土贝母苷甲 (下称苷甲 )抗肿瘤作用的机制 ,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞术 ,光学、荧光和电子显微镜 ,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响 ;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2和bax表达的变化。结果 :苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用 ,其 2 4、4 8和 72h的IC50 值分别为 35 .7,2 3.6 ,17.4 μmol·L-1。在苷甲的作用下 ,细胞周期阻滞在G2 M期 ,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl 2下调 ,bax过表达。结论 :苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用 ,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl 2的下调及bax的过表达密切相关。

土贝母苷甲诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡

背景和目的:土贝母犤Bolbostemmapaniculatum(Maxim.)Franquet犦是一种传统中药,我们以前的研究结果已证实从中药土贝母块茎中分离得到的土贝母苷甲(下称苷甲)有强抗肿瘤效果。本研究旨在探讨苷甲对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测苷甲对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA电泳图谱的变化,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl-2和bax表达的变化。结果:苷甲抑制CNE-2Z细胞的生长,其24、48、72h的IC50分别为32.5、20.7、16.7μmol/L。苷甲诱导CNE-2Z细胞发生程序性死亡:流式细胞分析发现Sub-G1峰,50μmol/L苷甲作用CNE-2Z细胞12h,凋亡指数为72.8%;CNE-2Z细胞经苷甲作用(10μmol/L,24、48、72h;30、40、50、60μmol/L,12h)后,其DNA电泳图中出现典型的梯形条带。苷甲诱导bcl-2表达下调且磷酸化,并伴有bax高表达。结论:苷甲诱导CNE-2Z细胞发生形态学和生化学上典型的程序性死亡,其诱导的CNE-2Z细胞凋亡与bcl-2失活和bax激活有关。

土贝母苷甲对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨土贝母苷甲(下称苷甲)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:PGCL3细胞经不同剂量苷甲处理24、48、72h,MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用重组基底膜侵袭模型、粘附基质分析、Transwell小室趋化运动模型研究苷甲对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测苷甲对PGCL3细胞分泌Ⅳ型胶原酶(MMP-2)能力及活性的影响。结果:苷甲明显抑制PGCL3细胞的生长,且呈剂量依赖关系,作用24、48、72h的IC50分别为15.70、14.20和13.32μmo.lL-1。苷甲1.25、2.50、5.00μmol·L-1处理PGCL3细胞24h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为28.7%、41.0%、57.5%;对PGCL3细胞迁移能力的抑制率分别为21.6%、35.2%、53.7%。苷甲降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且呈一定的剂量依赖关系。结论:苷甲抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其对PGCL3细胞的侵袭和粘附的影响可能与其降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率有关。

土贝母苷甲和苷乙的抗肿瘤作用

土贝母 [Bolbostemmapaniculatum(Maxim )Franquet (Cucurbitaceae) ]是一种传统中药。土贝母苷甲和苷乙都是从土贝母中分离、纯化出来的抗肿瘤活性成分 ,属齐墩果烷型三萜皂苷 ,苷甲和苷乙在结构上的惟一区别是苷乙 16位碳上的羟基。苷甲和苷乙的构效关系研究表明 ,苷乙的抗肿瘤活性较苷甲更强 ,毒性更低。苷甲和苷乙都能诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。

土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的抑制作用

目的:本研究旨在探讨土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的影响。方法:采用裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤实验转移和裸BALB/c小鼠Lewis肺癌自发转移模型研究土贝母苷甲对肿瘤转移的影响;采用免疫组织化学法检测土贝母苷甲对转移相关基因CD44v6、ErbB-2和nm23-H1表达的影响。结果:腹腔注射低于全身中毒水平剂量的土贝母苷甲明显减少接种B16黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移灶数量,而对小鼠的健康和活力无明显影响;土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.wk-1×2 d)对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制率分别为68.8%、82.8%和49.1%。土贝母苷甲治疗组小鼠Lewis肺癌原发肿瘤的平均瘤重明显低于对照组(P<0.05)。土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.w-1×2 d)治疗组小鼠的肝转移抑制率分别为46.3%、52.0%和54.7%。土贝母苷甲显著下调促转移基因CD44v6和ErbB-2的表达,上调抑转移基因nm23-H1的表达。结论:土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤的实验性转移和Lewis肺癌的自发性转移都有显著的抑制作用。土贝母苷甲对肿瘤转移的这种抑制作用与其抑制原发肿瘤生长、下调促转移基因CD44v6和ErbB-2及上调抑转移基因nm23-H1的表达有关,提示土贝母苷甲是一个阻止癌扩散和转移的候补化合物。

土贝母苷甲抑制血管生成

土贝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim.)Franquet (Cucurbitaceae)],为传统中药,载于清代赵学敏氏编著的<本草纲目拾遗>.我们从1978年开始从生药土贝母中分离、纯化抗癌活性成分,并对其中得率最高(1.9%)的土贝母苷甲(苷甲)进行了系统的研究[1,2].

土贝母苷甲对人脐静脉内皮细胞凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响

研究了土贝母苷甲(下称苷甲)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响。包括:MTT法检测苷甲对HUVECs生长的影响;荧光显微镜观察苷甲作用下HUVECs的形态变化;流式细胞术分析苷甲对HUVECs周期及凋亡的影响;聚碳酸酯膜小室(Transwell model)趋化运动模型检测苷甲对HUVECs运动能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane,CAM)试验检测苷甲对人鼻咽癌细胞(human nasopharyngeal carcinomaCNE-2Zcells,CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检测苷甲对BALB/c裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)表达的影响。苷甲明显抑制HUVECs的生长,其抑制效果与剂量和作用时间相关,苷甲作用HUVECs24、48、72h其IC50值分别为24.2、21.4、17.9μmol/L;苷甲作用下HUVECs发生周期阻滞,呈现典型的凋亡特征,20.0μmol/L苷甲作用12、24、36hHUVECs的凋亡率分别为11.4%、20.8%、25.3%;20.0μmol/L苷甲处理HUVECs24h,对细胞迁移抑制率为58.4%;苷甲抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,并与剂量相关;苷甲应用后瘤组织MVD明显减少,VEGF、bFGF、PDGF表达下调。苷甲有明显的抑制血管生成活性,其抑制血管生成作用与诱导血管内皮细胞凋亡,抑制其运动能力,下调VEGF、bFGF和PDGF的表达有关。

土贝母苷甲靶向制剂的研究

靶向制剂可以提高靶组织的药理作用并降低全身的不良反应 ,为第 4代的药物剂型。针对中药土贝母的抗肿瘤成分——土贝母苷甲有效但毒性较大的问题 ,进行靶向制剂的实验研究 。

土贝母苷甲通过上调FADD/caspase-8/caspase-3的表达促进人胶质瘤U251细胞凋亡

目的研究土贝母苷甲(TBMSⅠ)诱导人胶质瘤U251细胞凋亡及其可能的内在机制。方法四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度的土贝母苷甲对U251细胞增殖的影响。Hoechst 33258荧光染色观察不同浓度土贝母苷甲处理U251细胞后细胞核形态的变化。流式细胞仪检测细胞的凋亡率。Western blot分析土贝母苷甲对FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表达水平的影响。结果土贝母苷甲以剂量依赖方式抑制U251细胞的增殖。土贝母苷甲处理后,U251细胞的细胞核表现出固缩浓染等凋亡特征,且随着药物浓度的增加,细胞数目逐渐减少。与对照组相比较,土贝母处理组(10、20、25μg/ml)的早期和晚期凋亡率均显著增加,差异有统计学意义(P﹤0.05)。10、20、25μg/ml土贝母苷甲处理组上调了FADD、caspase-8和caspase-3蛋白的表达水平,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论土贝母苷甲在体外能够明显的抑制U251细胞的增殖,其机制可能与上调FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表达从而诱导细胞凋亡有关。

土贝母苷甲对人HL-60髓性白血病细胞周期与凋亡的影响

目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)对人髓性白血病细胞HL-60的细胞周期及凋亡的影响。方法:采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测苷甲对HL-60细胞生长的影响;形态学方法(荧光显微镜和透射电镜)、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在苷甲作用下HL-60细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cyclinB1表达的变化。结果:苷甲显著抑制HL-60细胞的生长,其抑制效果与浓度及时间呈依赖关系。15μmol·L-1苷甲作用24小时可将HL-60细胞阻滞于G2/M期,进而诱导其凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状区带。bcl-2表达无明显变化,cyclinB1表达降低。结论:苷甲对细胞周期起阻滞作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与cyclinB1表达降低有关。

土贝母苷甲在人宫颈癌HeLa细胞内对线粒体的影响

目的:探讨线粒体在土贝母苷甲(TBMS1)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法:流式细胞仪测定线粒体膜电位(ΔΨm)、琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂片和蛋白质免疫印迹法检测细胞色素c(cyt c)的表达。结果:TBMS1引起人宫颈癌HeLa细胞凋亡,使得ΔΨm下降,释放入胞质的cyt c增加,并具有时间、剂量依赖性;TBMS1还可直接作用于分离的鼠肝脏线粒体,使之释放cyt c;TBMS1的这种作用部分能够被线粒体膜保护剂环孢菌素A(CsA)阻断。结论:线粒体途径是TBMS1诱导的HeLa细胞凋亡的途径之一。

土贝母苷甲肺靶向微球制备工艺研究

目的 :土贝母苷甲肺靶向微球制备工艺研究。方法 :w/ o/ w复乳法制备土贝母苷甲肺靶向微球 ,通过单因素考察复乳法中各制备条件的影响 ,采用高效液相色谱法进行测定。结论 :土贝母苷甲肺靶向微球粒径大小符合要求 ,具有肺靶向性 。

土贝母苷甲对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖和形态学的影响

目的:从细胞水平探讨土贝母苷甲(TBMS1)对PC3细胞的抗肿瘤作用,为临床前列腺癌的有效治疗提供相应的理论依据。方法:利用MTT比色法检测TBMS1对PC3细胞的抑制作用,并计算抑制率。瑞氏染色法观察TBMS1作用细胞后,细胞内部形态学变化。结果:土贝母苷甲能明显抑制PC3细胞的增殖,并呈剂量依赖性。细胞形态呈典型的凋亡形态学改变。结论:土贝母苷甲显著抑制PC3细胞的增殖,具有一定的抗前列腺癌作用。

土贝母苷甲对人红白血病细胞K562的诱导分化作用

目的:研究土贝母苷甲对人红白血病细胞K562分化的影响。方法:采用台盼蓝拒染法检测土贝母苷甲对K562细胞增殖的影响;采用细胞形态学、细胞化学方法检测土贝母苷甲对K562细胞分化的影响;采用Western blotting法检测土贝母苷甲对K562细胞早期原癌基因c-myc、cf-os表达的影响。结果:土贝母苷甲下调K562细胞c-myc的表达,上调cf-os的表达,诱导K562细胞产生血红蛋白,诱导K562细胞向成熟红系细胞方向分化。结论:土贝母苷甲对人红白血病细胞K562具有诱导分化作用。

HPLC法测定甲肿消及大鼠血清中土贝母苷甲的含量

目的建立甲肿消制剂及灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法,甲肿消制剂用甲醇萃取,血清样品采用C18SPE固相萃取柱(3mL,200mg,60μm)处理,甲醇洗脱;色谱柱:DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保护柱;流动相:甲醇-水(65∶35),检测波长:214nm,流速:1mL/min。结果甲肿消制剂及大鼠血清中土贝母苷甲的回收率分别为(103.49±3.49)%、(104.70±4.69)%,土贝母苷甲在1.18～88.5μg/mL浓度范围内线性良好。每1g制剂含土贝母苷甲995.3μg,灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲浓度为3.19μg/mL。结论本方法快速、简便、准确,可用于测定制剂及其血清中土贝母苷甲的含量。

土贝母苷甲诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护作用

目的观察土贝母苷甲(TBMS1)诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护效果,探讨以线粒体为中心的内源性凋亡途径在TBMS1诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时的作用。方法利用透射电镜观察不同浓度TBMS1作用不同时间引起的细胞超微结构的变化,以及环孢菌素A预处理对TBMS1作用的影响。结果随着土贝母TBMS1浓度的增高和作用时间的延长,人HeLa细胞的结构发生了连续性变化。肿瘤细胞逐渐减小,细胞间隙逐渐增大,线粒体逐渐肿胀、退化,粗面内质网逐渐扩张,核逐渐变小、核碎裂。在TBMS1低浓度时,环孢菌素A能够在一定程度上保护细胞免受TBMS1的损伤。环孢菌素A对TBMS1的损伤有保护效果。但当TBMS1浓度增大时,环孢菌素A的这种保护就不起作用了。结论TBMS1诱导HeLa细胞发生一系列凋亡特征的超微结构变化,线粒体肿胀、退化为其特征之一,从形态学角度提供了以线粒体为中心的内源性凋亡途径起一定作用。