土连翘体外抑制黄嘌呤氧化酶活性研究

目的:研究土连翘体外抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性。方法:采用高效液相色谱法检测酶反应生成尿酸的量,以甲醇-20 mmol/L K2HPO4缓冲液(pH7.5)(1∶99)为流动相,检测波长290 nm。测定了土连翘及其不同部位对牛奶和鼠肝来源的XOD活性的抑制作用。结果:牛奶来源XOD反应检测方法的重复性试验RSD为2.97%,平均加样回收率101.77%,RSD为2.87%;鼠肝来源XOD的重复性试验RSD为3.72%,回收率98.23%,RSD为3.26%。土连翘抑制牛奶XOD活性IC50为生药浓度1.569 mg/mL,除水溶部位对牛奶XOD没有抑制活性外,各部位对2种来源XOD均有抑制活性,但活性高低不同,同一部位对2种来源XOD的抑制活性有显著差异。结论:该检测方法快速、简便、专属性强、准确、重复性好。土连翘能显著抑制XOD活性,系多成分起作用。

脂氧化酶活性体外测定方法研究

目的:研究脂氧化酶(LOX)活性体外测定方法。方法:以亚油酸为底物,3ml反应液在25℃和pH8.0条件下反应5分钟,加5ml甲醇终止反应。采用高效液相色谱法检测亚油酸,Agilent Eclipse XDB-C8(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液(80∶20)为流动相,检测波长205nm。根据反应后亚油酸减少的量计算酶活性。采用文献报道的UV法和本文首创的HPLC法,对比测定了中药土连翘体外抑制LOX活性。结果:亚油酸浓度在5.296～264.8μg/ml范围内呈线性关系,r=0.9998,检测方法精密度RSD为1.74%,测定方法重复性RSD为2.43%。土连翘体外抑制LOX活性IC50为235μg药材/ml。与传统UV法比较,HPLC法专属性更好,更准确可靠。结论:我们创立的测定方法快速、简便、专属性强、准确、重复性好。